浅谈腐败梭菌病诊断及防治措施

贾锋军

（山东省临朐县农业农村局柳山畜牧兽医站 262616）

腐败梭菌（Clostridium septicum）旧称为腐败杆菌（Bacillus septicus）、腐败弧菌（Vibrio septicus），是引起动物和人恶性水肿（Malignant edematis maligni）的主要病原菌，故也曾称为恶性水肿杆菌（Bacillus edema）[2]。是巴斯德在1877年培养的第一个厌氧致病微生物[1]。腐败梭菌是第一个分离到的致病性厌氧菌，是人和动物气性坏疽的主要病原之一[3]。在家畜中由本菌感染引起的牛的恶性水肿和羊的快疫占有重要地位[3]。

1 腐败梭菌在我国的流行情况

1953 年我国正式确诊羊快疫的存在[3]，自此之后腐败梭菌给我国畜牧业带来了巨大的经济损失。2005 年10 月山东省某规模养殖场死亡育成波尔山羊50 余只[4]，2008 年海晏县三角城镇三角城村9 户牧民饲养的2430 只绵羊中死亡羊330 只[5]，2009～2010 年石河子某规模化奶牛场先后死亡11 头高产奶牛[6]，2011 年4 月甘肃省永靖县三塬镇出现巴氏杆菌和腐败梭菌混合感染病例[7]，同年11 月青海省大通县某牛场放牧牦牛群死亡牦牛9 头[8]，2012 年2 月山东省即墨市腐败梭菌感染发病山羊12 只绵羊20 只[9]，青岛市城阳区死亡小羊4 只大羊1只[10]，2013 年重庆大足区石马镇某羊场出现巴氏杆菌与腐败梭菌混合感染死亡大足黑山羊22 只[11]，2013 年11 月泾源县泾河源镇北营村赫某饲养的20 只羊死亡羔羊4 只[12]，2014 年3 月新疆伊吾县盐池乡王某饲养的250 只绵羊死亡羊6 只[13]，同年4 月广西壮族自治区资源县资源镇谢某饲养的山羊死亡30余只[14]，8 月山东省东营市某养殖户发生羊腐败梭菌病[15]，2014 年9 月甘肃省武威市凉州区腐败梭菌与链球菌混合感染死亡藏系羊5 只[16]，同年10 月广西壮族自治区兴宾区良江镇山羊养殖户石某山羊死亡17 只[17]，2015 年1 月广西宜州市龙头乡德惠村上水屯某养殖户山羊死亡6 只[18]，同期青海省海北州祁连县默勒镇扎隆乡死亡羊40 只[19]，2015 年4 月甘肃省临洮县某养殖场绵羊死亡13 只[20]，同期河北省迁安市彭店子乡某养殖户小尾寒羊死亡6 只[21]，2016 年3 月内蒙古赤峰市克什克腾旗达来诺日镇某养殖户绵羊死亡11 只[22]，同期湖南省新晃县原方家屯乡方家屯蔡某山羊死亡8 只[23]，2016 年10 月武汉市黄陂区某养殖场育成羊死亡11 只[24]，2017 年内蒙古科右前旗俄体镇三合村陈牧仁家绵羊死亡1 只[25]。近10 年的报道表明，腐败梭菌在我国各地都有暴发，给我国养殖业带来了巨大危害。

2 腐败梭菌概况

2.1 腐败梭菌主要生物学特性

腐败梭菌为革兰氏阳性厌氧菌，可产生芽孢[26]，有鞭毛，无荚膜，芽孢卵圆，位于中央或偏端，芽孢横径较菌体宽[27]。本菌专性厌氧，葡萄糖鲜血琼脂平板37℃厌氧培养48h 形成灰白色或半透明、边缘不整微微隆起的菌落形态，可以发酵葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖、水杨素、甘露糖，不发酵蔗糖，可液化明胶[28]。Robertson，Handerson，Moussa，Shirasaka 等报道本菌存在不同血清型，杨学礼也证实我国分离株也存在不同血清型。本菌有O 抗原和H 抗原，Handerson 和杨学礼等报道不同型的“O”抗原菌株之间缺乏有效交叉免疫，可以看出，对于本菌的分型，尤其是按“O”抗原进行分型，具有重要意义[3]。本菌用一般消毒药物短时间可以杀死繁殖体，芽孢在腐败尸体中可以存活3 个月，土壤中存活20～25年，煮沸2～10min 或0.2%氯化汞，1.05%～1.2%甲醛处理10min，能将本菌芽孢杀死[27]。

2.2 腐败梭菌致病性

腐败梭菌可以产生α、β、γ、δ 4 种外毒素，其中α 为主要致死性毒力因子[29,30]，具有坏死、溶血和致死作用[31]。α 毒素分子量大小为46～48kDa，在其C 末端经水解后形成活化形式，大小为41～44kDa[32,33]，β 毒素为脱氧核糖核酸酶，可杀白细胞，γ 和δ 毒素分别具有透明质酸酶和溶血素活性。这些毒素可增强血管通透性，引发肌肉坏死[34]。

致病范围包括人、马、牛、绵羊、猪、犬、猫、鸡等。实验动物以豚鼠和小鼠最易感。经创伤感染可致人的气性坏疽，马、牛、羊、猪等家畜的恶性水肿及鸡气性水肿。消化道内源性感染致牛、绵羊及山羊快疫[2]。

2.3 腐败梭菌感染临床症状及剖检症状

腐败梭菌引起的疾病传播速度快、发病急，死亡率高。以突然发病死亡、食欲减退、体温升高为特征，并伴有伤口或者腹部膨大、磨牙、疝痛、口鼻等部位流出泡沫样血色液体，最为典型的病理变化为局部膨大水肿甚至糜烂坏死、腹腔积液、有气泡及出血点[34]。

绵羊山羊常常表现出突然发病，不治而亡，病程稍长者表现出离群独卧，不愿走动，运动失调等症状。病羊出现腹部膨大，胃肠臌气，有疼痛感，有时还会出现磨牙，口鼻流出血泡沫状液体，排粪困难等症状。体温升高，最高可达39～40℃，数小时之内死亡[35,36]。

剖检病死绵羊可见多数羊肝脏肿大破裂，腹腔和心包积液，有凝血块，皱胃、十二指肠及幽门出血并伴有坏死灶，胆囊肿胀，心肌变性，左内膜会有点状出血[34]。剖检山羊可见病死羊腹部肿胀，可视黏膜发绀，眼球外突，肛门外翻。胸腔和心包积液，心内膜有出血点，肝肿大质脆并伴有出血点，肾脏也有点状出血，气管出血并伴有泡沫。肺淤血呈现暗红色。皱胃充血肿胀并伴有出血，小肠臌气，黏膜充血出血、脱落、坏死，呈现“红肠样”[37]。

3 腐败梭菌的实验室诊断

病畜死后由肠道侵入其他部位，注意区别诊断。对恶性水肿，水肿液或组织直接涂片镜检无多大诊断意义；对羊快疫，肝脏被膜触片染色镜检，若发现长丝状细菌，则具有诊断价值，确诊需要做细菌的分离鉴定[2]。

3.1 腐败梭菌的分离培养、镜检与生化鉴定

无菌操作取心、血、肝、脾、肠系膜淋巴结等脏器接种于厌气肉肝汤，37℃培养24h，厌气肉肝汤中可产生气体[38]；将病料接种于葡萄糖鲜血琼脂平板，37℃厌氧培养48h，形成灰白色或半透明、边缘不整微微隆起的菌落形态[28]，革兰氏染色镜检可见革兰氏阳性，两端钝圆，单在或者2～3 个相连的粗大杆菌同时还可发现无关节长丝状菌体[39,40]。生化鉴定可以发酵葡萄糖、果糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖、水杨素、甘露糖，不发酵蔗糖，可液化明胶[28]。

3.2 腐败梭菌触片检查

无菌取病畜肝脏，用病畜肝脏制作被膜触片，除见到两端钝圆、单个或短链状的粗大菌体外，还可以观察到无关节的长丝状菌体链，其他脏器也可以观察到病原[41]。

3.3 腐败梭菌的PCR 鉴定

腐败梭菌的α 毒素（溶血素）基因，有270bp 片段在24种细菌溶血素中无同源性（包括亲缘关系很近的气肿疽梭菌和其他梭菌），可以用PCR 快速做出准确诊断，这是腐败梭菌于气肿疽梭菌鉴别诊断的唯一鉴别方法[2]，所以获得病料模板进行PCR 扩增α 毒素的特异性序列可以快速诊断和鉴定腐败梭菌[42]。李生庆等人建立了一种基于α 毒素的PCR 诊断[43]；彭小兵等人成功建立二重PCR 方法鉴别气肿疽梭菌和腐败梭菌[44]。

3.4 腐败梭菌动物实验

将分离病原菌对豚鼠进行肌肉感染可见注射部位肌肉呈现鲜红色，有大量血色水肿液并产生许多气泡。参见附图。

4 腐败梭菌的防治

4.1 腐败梭菌病的预防

（1）落实好疫苗接种工作[45]。免疫接种是预防该病的最为有效方法之一，目前国内主要是用羊快疫、黑疫二联灭活苗、羊快疫、猝疽、羊肠毒血症三联灭活疫苗、羊梭菌病多联干粉灭活苗等[46]，或者羊快疫、羊猝狙、羊肠毒血症、羔羊痢疾、黑疫五联苗[45]。

（2）加强饲养管理[47,48]。禁喂冰冷食物，减少胃肠刺激引发此病[48]。适时添加精料，提高机体免疫力。加强环境卫生清扫，按时消毒杀菌[49]。

（3）发现病死羊时及时无害化处理病死羊，严禁剥皮利用，对健康动物进行隔离[50,51]。监测羊群体温并及时隔离体温异常羊只[52]。

（4）注意易感羊群的紧急防控。同群中的易感羊只要做好紧急接种疫苗[53]。

4.2 腐败梭菌病的治疗

（1）抗菌。对病程稍长的病羊可以进行抗生素治疗[48]。可选用磺胺类、青霉素、头孢类抗生素（头孢唑啉、头孢呋辛钠、头孢他啶、头孢曲松、头孢拉定和头孢哌酮）等药物进行治疗[49]。

（2）补充体液。强心、补液、补碱，缓解代谢性酸中毒。可选用糖盐水和5%碳酸氢钠混合静脉注射，20%石灰乳内服[54]。

（3）血清治疗。可选用羊速清、头孢和干扰素3 者混用[48]。

（4）中药预防。金银花20g，连翘20g，淡豆豉15g，桔梗15g，荆芥15g，竹叶20g，薄荷10g，牛蒡子15g，芦根30g，甘草5g，水煎取汁，内服[51]。

5 小结和展望

腐败梭菌病属于常发性疾病，危害较大，常造成家畜死亡，严重危害养殖户的经济利益。本文统计了国内近10 多年的发病报道，就腐败梭菌的生物学特性、致病性、临床症状及剖检症状，实验室诊断方法及防治等方面进行浅析，对腐败梭菌病有了一个较为系统的认识。目前国内大多使用联苗，所用培养基复杂，中国兽药监察所所制培养基可以简化工艺成本，取得较好效果，而在国外已经有α 类毒素疫苗出现[54]。针对腐败梭菌的研究，国内还未得到应有的重视，青海畜牧兽医研究所对腐败梭菌的PCR 鉴定、培养、产毒等方面进行了研究，中国兽医药品监察所对腐败梭菌在PCR 鉴定、血清学分型、疫苗及α 毒素分子克隆等方面进行了较为深入的研究，河北师范大学对腐败梭菌α 毒素基因克隆及表达也有研究[55-60]。但针对腐败梭菌病检测的快速检测方法尚未开发，ELISA 试剂盒及胶体金试剂条等快速检测诊断方法也急需建立。