UPLC 法同时测定人参香皂中8 种人参皂苷

李彦超，曲正义，王英平，张瑞※

（1.吉林农业大学人参新品种选育与开发国家地方联合工程研究中心，吉林 长春 130112；2.南京中医药大学，江苏 南京 210046；3.中国农业科学院特产研究所，吉林 长春 130122）

人参（Panax ginseng C. A. Mey）是五加科人参属多年生草本植物，其喜阴耐寒，对土壤的要求极高，我国东北地区土壤肥沃、气候适宜，因此，人参在东北山区被大面积栽培。人参具有悠久的药用历史，在我国历代中医药学著作中，许多都有关于人参的描述，人参以根部入药，自古就被称为补气的灵药，具有复脉固脱、补脾益肺、生津、安神等功效。现代科学研究证明，人参的主要有效成分是人参皂苷[1]。自20 世纪80 年代人参便被应用于化妆品中，随着科技的不断进步和人们物质生活的不断提高，人们越来越崇尚绿色健康的生活日用品，人参便成为了重要的植物化妆品原料。人参花蕾提取物（人参总皂苷）具有体外清除羟基自由基的能力[2]；张智萍等[3]研究发现，人参果提取物保湿性优于甘油和透明质酸，且较后两者保湿效果持续时间更长；贾越光等[4]研究发现，人参皂苷对络氨酸酶具有抑制作用，从而达到美白的效果。此外有研究表明，人参具有养发、育发防脱、抑制头屑等功效[5]。人参香皂作为人参类化妆品已逐步被消费者所接受和认可，并占据着较大的市场，拥有巨大的商业潜力。

人参皂苷作为人参香皂的标志性成分，可作为评价人参香皂质量好坏的指标。然而，我国目前对人参香皂中人参皂苷的添加量仍然没有统一的标准，鲜见人参香皂中人参单体皂苷检测方法的研究。因此，本研究采用超高效液相色谱法（UPLC）测定人参香皂中单体皂苷 Rg1、Re、R f、Rb1、Rc、Rb2、Rb3 和 Rd 的含量，为人参香皂中这8 种单体皂苷检测提供一种稳定、方便的方法，也为人参香皂的质量控制提供理论支撑。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与材料

ACQUITY 超高效液相色谱仪（美国 Waters 公司）；HH-6 型数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）；电子天平（上海梅特勒－托利多仪器有限公司）。色谱纯乙腈（美国费舍尔公司）；超纯水（美国Millipore公司）；其他试剂均为分析纯（天津津腾实验设备有限公司）；D101 大孔吸附树脂（沧州宝恩吸附材料科技有限公司）；人参皂苷 Rg1、Re、Rf、Rc、Rb1、Rb2、Rb3、Rd标准品（中国药品生物制品检定所）；5 种人参香皂（购于淘宝网店）。

1.2 试验方法

1.2.1 混合标准品溶液的制备 用电子天平精密称取8 种人参皂苷标准品，配制成人参皂苷 Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd 含量分别为 0.33、0.32、0.31、0.30、0.33、0.35、0.30、0.32 mg/mL 的混合标准品溶液。

1.2.2 供试品溶液的制备 用小刀将人参香皂切成直径不大于1 mm 的细小颗粒，在100 mL 具塞锥形瓶中加入精密称取的5.00 g 香皂，并加入100 mL 无水乙醇，使用超声波每次30 min，提取3 次。将所得全部提取液用旋转蒸发仪减压浓缩，得到少量提取液，60 ℃水浴蒸发剩余液体，加入蒸馏水30 mL 使其充分溶解，滴加0.1 mol/L 盐酸至pH 值约为7。将含有提取物的水溶液加入D101 大孔吸附树脂，静态吸附5 h，湿法装柱后用500 mL 蒸馏水洗脱并弃去洗脱液，然后用500 mL 质量分数为 80% 的乙醇洗脱并收集，减压浓缩，得少量浓缩液，60 ℃水浴蒸干，将其溶于无水乙醇并转移到10 mL容量瓶中，再滴加无水乙醇至刻度线，上下反复振荡均匀即得。5 种人参香皂供试品溶液均用同样方法得到。

1.2.3 色谱条件 ACQUITY UPLC BEH C18 色谱柱（2.1 mm 50 mm，1.7m）；用乙腈-0.05%磷酸水溶液（A）作为流动相，梯度洗脱：0～3 min，17% → 19% A；3～4min，19%→21%A；4～5min，21%→26%A；5～9min，26% → 27%A；9～12 min，27% → 32%A；12～15 min，32% →43%A。检测波长为203 nm；柱温为35 ℃；进样量为2L；流速为 0.5 mL/min。

1.2.4 标准曲线的绘制 用无水乙醇将混合标准品溶液稀释成不同浓度，并按顺序进样，在“1.2.3”项下的色谱条件下测定峰面积，以人参皂苷峰面积为纵坐标、人参皂苷浓度为横坐标绘制标准曲线，见图1。

图 1 标准品UPLC 色谱图Fig1. UPLC chromatogram map of reference substance

2 结果与分析

2.1 标准曲线的绘制

按“1.2.4”方法绘制标准曲线，得到回归方程分别如下：

Rg1：Y=922 000X+1 870（r=0.999 9）

Re：Y=1 460 000X+3 640（r=0.999 9）

Rf：Y=838 000X+1 120（r=0.999 9）

Rb1：Y=791 000X+1 820（r=0.999 8）

Rc：Y=658 000X+706（r=0.999 9）

Rb2：Y=952 000X=2 340（r=0.999 9）

Rb3：Y=1 200 000X+2 340（r=0.999 9）

Rd：Y=4 870 000X+1 020（r=0.999 9）。

人参皂苷 Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd 的线性范围分别是0.103 130～0.330 000、0.010 000～0.320 000、0.009 688～0.310 000、0.009 375～0.300 000、0.010 313～0.330 000、0.010 938～0.350 000、0.009 375～0.300 000、0.010 000～0.320 000 mg/mL。

2.2 精密度

在“1.2.3”项下的色谱条件下将混合标准品溶液连续进样 6 次，得到人参皂苷 Rg1、Re、Rf、Rb1、Rd、Rc、Rb2、Rb3 的色谱峰 面积，其 RSD 分别是0.87%、0.94%、0.67%、1.32%、1.83%、0.81%、1.69%、0.76%，表明该仪器具有良好的精密度。

2.3 重复性

将同一份样品按“1.2.2”项下的方法配制成6 份供试品溶液，在“1.2.3”色谱条件下进样检测，结果发现人参皂苷 Rg1、Re、Rf、Rb1、Rd、Rc、Rb2、Rb3 含量分别为0.722、1.060、0.042、0.358、1.740、0.274、0.311、0.373 mg/g，RSD 分别为0.42%、0.42%、3.61%、2.44%、1.52%、0.73%、1.88%、0.97%，表明该试验方法具有良好的重复性。

2.4 稳定性

取同一份供试品溶液，1 d 内每隔4 h 按“1.2.3”项下的色谱条件进样测定，得到人参皂苷 Re、Rg1、R f、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd 色谱 峰面积的 RSD 分别是0.30%、0.40%、2.63%、2.05%、0.94%、1.33%、0.69%、1.37%，表明该供试品能在24 h 内保持稳定状态。

2.5 加样回收率

准确称取一定量的人参皂苷对照品添加到已知含量的人参皂样品中，按“1.2.2”项下的方法配制得到供试品溶液，在“1.2.3”项下的色谱条件下测定，试验结果如表 1 所示。从表 1 可以看出，Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd 的平均回收率分别为93.47%、94.89%、83.53%、86.84%、90.88%、78.59%、83.30%、91.10%，RSD 分别为1.24%、1.56%、1.46%、1.90%、1.81%、2.96%、1.90%、1.74%，表明该方法准确、可靠，可用于人参香皂中8 种人参皂苷的含量测定。

表1 加样回收率Table 1 Recovery rate （n=8）

2.6 样品含量测定

每种人参香皂供试品溶液，在“1.2.3”项下的色谱条件下进行测定，试验结果如表2 所示。由表2 可知，不同香皂品牌中各人参单体皂苷含量差异较大，其可能原因是在香皂制备过程中多为碱性高温条件，部分人参单体皂苷在该条件下发生降解[6]，故检测含量较少，且不同原料的添加也可能影响人参单体皂苷的含量[7]。

表2 人参香皂中8 种人参皂苷含量Table 2 The content of 8 ginsenosides in ginseng soap（mg/g）

3 结论与讨论

3.1 结论

本试验使用无水乙醇对人参皂中人参皂苷进行提取，并通过D101 大孔吸附树脂使人参皂中的油脂、脂肪酸钠等杂质与人参皂苷能够较好分离；采用UPLC法对人参香皂中8 种人参皂苷进行分析测定，该法检测速度更快、灵敏度和分离度更高、工艺稳定，为人参香皂的质量控制提供理论支撑。

3.2 讨论

人参香皂中可能添加人参粉、人参提取物等不同人参原料，且香皂中含有大量的脂肪酸钠，用水作为提取溶剂效果并不理想，且易产生大量泡沫，造成损失。为降低误差，故采用无水乙醇作为提取溶剂。

人参皂苷主要采用溶剂萃取法和大孔吸附树脂吸附纯化[8]。因为香皂的主要成分为高级脂肪酸钠，其性质较脂类有区别，故难以采用乙醚、石油醚等溶剂萃取分离，且易发生乳化，因此本试验采用D101 大孔吸附树脂对人参香皂中的人参皂苷进行纯化。香皂溶于少量水中呈胶状物，通过调节pH 至中性可以明显除去这一现象，有利于人参皂苷吸附在D101 大孔吸附树脂上。

使用超高效液相色谱法对人参香皂中8 种人参皂苷含量进行分析测定。本方法较HPLC 法检测时间更短，消耗样品更少，有利于人参香皂中各人参皂苷的快速检测，且精确度、重现性、回收率良好[9]。不同品牌的人参香皂产品制作工艺不同，可能添加人参的部位不同，同时添加量也存在差异，产品中人参单体皂苷含量差异较大。在香皂的制备过程中，控制制备条件和加入人参提取物的时间，有利于提高香皂成品中人参单体皂苷含量，对人参系列香皂的制备及质量控制具有参考价值。