不同类型的EBV感染患儿免疫功能与外周血sHLA-G的变化*

路瑞静，周喜友，江 凡，谢小红，周坤朋，王 丰

广东省深圳市宝安区妇幼保健院检验科，广东深圳 518102

EB病毒(EBV)感染的高发人群是婴幼儿，超过90%的婴幼儿发生过EBV感染，但患儿的临床表型复杂，多为潜伏期感染，与机体免疫功能异常相关[1]。根据感染类型，大致可分为3种：EBV相关淋巴组织细胞增生性噬血综合征(EBV-HLH)、慢性活动性EBV感染(CAEBV)和传染性单核细胞增多症(IM)[2]。研究显示，外周血EBV-DNA水平与疾病种类、疾病严重程度(含器官损害程度)紧密关联，而EBV-DNA水平可引发机体免疫功能改变，进而影响预后，严重时可导致死亡[3]。人类白细胞抗原(HLA)-G是非经典HLA-L类分子，可溶型HLA-G(sHLA-G)是HLA-G的一种类型，主要表达于胎盘组织、移植组织及感染组织。研究显示，病毒感染性疾病外周血sHLA-G呈高表达，sHLA-G具有调节细胞及体液免疫的功能[4]，但sHLA-G的表达在EBV感染中的报道较少。本文拟探讨儿童EBV感染不同临床疾病类型的免疫功能及sHLA-G的变化特点，试分析sHLA-G与免疫功能的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2017年4月至2018年10月本院收治并符合实验室病原学诊断标准的EBV感染患儿132例，男70例，女62例。根据不同临床类型分为EBV-HLH组(44例)、CAEBV组(46例)和IM组(42例)，选取同期体检健康的儿童作为对照组(35例)。各组受试者的性别、年龄、体质量和身高等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

1.2方法

1.2.1细胞免疫功能 抽取所有受试者的空腹静脉血，采用流式细胞仪(购自美国贝克曼库尔特公司)检测各组的淋巴细胞免疫表型CD3+、CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+/CD8+，淋巴细胞亚群检测配套试剂盒购自美国贝克曼库尔特公司。

1.2.2体液免疫功能 抽取所有受试者的空腹静脉血，采用免疫比浊法检测各组血清免疫球蛋白(Ig)M、IgG和IgA水平。

1.2.3sHLA-G检测 采用酶联免疫吸附测定法，严格按试剂盒说明书检测血浆sHLA-G水平，试剂盒购自四川新创生物科技有限公司。

2 结 果

2.1各组细胞免疫功能比较 与对照组比较，所有EBV感染组的细胞免疫功能均存在异常(P<0.05)，IM组CD3+T细胞水平升高(P<0.05)，CAEBV组和EBV-HLH组CD3+T细胞水平降低(P<0.05)。3组EBV感染中，EBV-HLH组CD4+T细胞水平最低(P<0.05)，IM组CD8+T细胞水平最高(P<0.05)，EBV-HLH组CD4+/CD8+最低(P<0.05)。见表2。

表1 各组一般情况比较

2.2各组体液免疫功能和sHLA-G水平比较 与对照组比较，所有EBV感染组的体液免疫功能均存在不同程度的异常(P<0.05)，EBV-HLH组IgA和IgG水平最低(P<0.05)，IgM水平最高(P<0.05)。与对照组比较，所有EBV感染组sHLA-G水平均升高，3组EBV感染中，IM组的sHLA-G水平最低(P<0.05)。见表3。

表2 各组细胞免疫功能比较

表3 各组体液免疫功能和sHLA-G水平比较

续表3 各组体液免疫功能和sHLA-G水平比较

3 讨 论

EBV感染多见于学龄前期儿童，但多数患儿无明显临床特征，即使出现上呼吸道的症状也并不典型[3]。流行病学显示，EBV感染多见于男性，提示EBV感染存在较明确的性别选择性，不同性别对EBV感染的灵敏度不同[5]。患者多为儿童，与儿童免疫系统发育不完善有关[6]。本研究结果显示，与健康儿童比较，EBV感染患儿普遍存在细胞免疫及体液免疫功能的异常，提示EBV感染防御过程中改善免疫功能较为重要。

同时，不同类型的EBV患儿的细胞免疫及体液免疫功能的异常也存在不同。本研究结果显示，IM类型的EB感染患儿的淋巴细胞增殖活性较强，CD3+、CD8+T细胞水平升高，CD4+/CD8+降低，提示IM类型的EB感染促使机体激活T淋巴细胞，与EBV感染B淋巴细胞导致机体免疫系统受损有关[7]。与对照组比较，CAEBV组CD3+、CD4+T细胞水平和CD4+/CD8+均降低，提示T淋巴细胞可能处于活性抑制状态，EBV-HLH组CD3+、CD4+T细胞水平和CD4+/CD8+降低，与EBV感染T淋巴细胞及自然杀伤细胞相关，T淋巴细胞及自然杀伤细胞被感染，细胞清除病毒感染细胞的能力降低或丧失，容易发生全血细胞减少等相关并发症[5]。各组患儿外周血IgA、IgG水平也降低，进一步证实EBV患儿的免疫功能降低，与研究报道相符[8]。

本研究结果显示，与对照组比较，EBV感染患儿外周血的sHLA-G水平升高，相关研究也显示受病毒感染的患者，如狂犬病毒和丙型肝炎病毒感染患者外周血sHLA-G水平较同龄健康者升高[9]。病毒可诱导感染神经元和相邻神经元高度表达sHLA-G进而逃逸宿主免疫监控，因此外周血sHLA-G可用于鉴别诊断病毒感染性疾病。同时，sHLA-G还可影响EBV感染患儿的免疫功能，EBV感染导致CD8+T细胞水平上调，其可结合上调Fas配体的表达及可溶性Fas的分泌，通过 Fas/Fas L途径来诱导活化的CD8+T细胞和自然杀伤细胞凋亡。EBV感染致使sHLA-G在外周血高表达，反馈性又可影响T淋巴细胞亚群活性。本研究结果显示，外周血sHLA- G高表达的同时，EBV感染患儿外周血的细胞免疫功能出现异常。研究表明，sHLA-G可采用直接和间接两种方式调节T淋巴细胞[7]，依靠T淋巴细胞上的抑制性受体直接发挥作用，与自然杀伤细胞表面的杀伤细胞Ig样受体(KIR)作用，抑制自然杀伤细胞的溶细胞功能；通过诱导机制或胞啃途径产生调节性T淋巴细胞，进而参与免疫耐受。通过凋亡机制导致自然杀伤细胞死亡而抑制自然杀伤细胞的溶细胞功能；作用于KIR而抑制CD4+T细胞增殖和诱导CD8+T细胞凋亡，下调CD4+及 CD8+T细胞的活性，抑制CD8+T细胞的杀伤溶解作用。

从细胞免疫角度看，sHLA-G具有抑制T淋巴细胞亚群活性的作用，EBV-HLH及CAEBV患儿机体的T淋巴细胞处于抑制状态，而IM类型的EB感染患儿机体的T淋巴细胞处于激活状态，CD3+和CD8+T细胞水平明显升高，报道显示IM类型的EB感染存在HLA-G基因多态性的现象[9]。本研究结果显示，与对照组比较，IM组sHLA-G水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)，血浆sHLA-G水平可作为IM的辅助诊断指标，但IM类型的EB感染中sHLA- G与T淋巴细胞的关系较为复杂，仍需要进一步分析论证[10]。

综上所述，不同类型的EBV感染均与免疫功能紊乱相关，sHLA-G水平均明显升高，IM类型的EBV感染患儿较为特殊，T淋巴细胞处于激活状态，体液免疫变化较小，sHLA-G水平有升高，但升高有限，检测细胞免疫、体液免疫功能及sHLA-G水平对鉴别IM类型的EBV感染具有重要意义。