经典名方沙参麦冬汤特征图谱及含量测定研究

2020-10-14陈薛静秦文杰薛慧清杨晓宁

中国中医药信息杂志 2020年9期

陈薛静，秦文杰，薛慧清，杨晓宁

陈薛静1，2，秦文杰2，薛慧清1，杨晓宁2

1.山西中医药大学，山西晋中 030619；2.北京振东光明药物研究院，北京 100085

按古籍方法制备沙参麦冬汤物质基准，建立特征图谱及指标成分检测方法，完善其质量控制体系。采用HPLC建立15批沙参麦冬汤物质基准的特征图谱，使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012A版）计算相似度，按2015年版《中华人民共和国药典》“甘草”项下方法测定15批物质基准中甘草苷的含量和转移率。以甘草苷为参照峰，沙参麦冬汤特征图谱共标定20个共有峰，指认出2个共有峰，15批物质基准相似度均大于0.9。15批物质基准甘草苷含量为0.053%～0.478%，转移率为38.92%～60.98%。本研究建立的方法所得数据真实可靠，可为沙参麦冬汤物质基准的质量控制奠定基础。

经典名方；沙参麦冬汤；物质基准；特征图谱；含量测定

沙参麦冬汤始载于清代吴鞠通《温病条辨》，由北沙参、麦冬、玉竹、天花粉、甘草、桑叶、白扁豆组成。沙参麦冬汤临床治疗呼吸系统疾病具有良好效果，可下调血清缺氧诱导因子-1α、诱导型一氧化氮合酶、血管生成素-2水平，用于治疗干咳、急性感染性疾病恢复期和肿瘤放化疗损伤等[1-4]。

沙参麦冬汤临床应用广泛，收录于国家中医药管理局发布的《古代经典名方目录（第一批）》[5]，其物质基准的开发研究应按照原处方及制法要求展开，并保证药材-饮片-物质基准的一致性，主要解决提取工艺和质量表征两方面的问题[6]，以期为其制剂的开发提供标准[7]。沙参麦冬汤方中药味较多，且成分多为糖类、蛋白质、黄酮类和皂苷类，本研究前期对方中各单味药水煎液进行DAD全波长扫描结果显示，君药（北沙参、麦冬）、臣药（玉竹、天花粉）、佐药（白扁豆）中成分在测定条件下响应值小，多数成分为末端吸收，且不同成分有不同的最大吸收波长，很难保证在同一波长条件下检测所有成分。因此，结合方义及临床疗效，选择煎煮后溶出率较高且检测结果稳定的甘草苷、甘草酸铵作为指标成分[8]，并采用波长切换法，以免影响色谱峰响应值及检测结果[9]。本研究建立沙参麦冬汤物质基准特征图谱，通过分析制备过程的量值传递关系，评价沙参麦冬汤物质基准制备工艺的合理性、可行性和质量检测方法的科学性。

1 仪器与试药

YD-A80型电砂锅，潮州市湘桥区雅德陶瓷五金电器厂；B-290型喷雾干燥机，瑞士BUCHI公司；KQ5200DE型数控超声波清洗机，昆山市超声仪器有限公司；Agilent 1260高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；YP1002N型电子天平（d＝0.01 g）、ME204/02型电子天平（d＝0.1 mg）、XSE205DU型电子天平（d＝0.01 mg），瑞士METTLER TOLEDO公司；Milli-Q型超纯水仪，美国MILLIPORE公司。

甘草苷对照品（批号111610-20160）、甘草酸铵对照品（批号111731-21720），中国食品药品检定研究院；乙腈、甲醇为色谱纯（默克公司）；磷酸为分析纯（北京化工厂）。15批沙参麦冬汤药物饮片来源见表1，经中国食品药品检定研究院张继主任药师鉴定，均符合2015年版《中华人民共和国药典》标准。

表1 15批沙参麦冬汤组方药物饮片来源信息

编号北沙参麦冬玉竹天花粉桑叶白扁豆甘草批号产地批号产地批号产地批号产地批号产地批号产地批号产地 S1YP1702内蒙古 YC1207四川 YP2201湖南 YP2401四川 YC1203广西 YC1603云南 YP1407内蒙古 S2YP1701内蒙古 YC0901山东 YP2606浙江 YP2410河北 YC1002江苏 YC0306四川 YP1302新疆 S3YP1001山东 YC1201四川 YP2202湖南 YP2406河北 YC1205广西 YC1605云南 YP0503甘肃 S4YP2012内蒙古 YC0902山东 YP2602辽宁 YP2901山西 YC0601云南 YC1604云南 YP0502甘肃 S5YP2008河北 YC1206四川 YP2601辽宁 YP2403四川 YC0602云南 YC1601云南 YP1406内蒙古 S6YP2007河北 YC0904山东 YP2609浙江 YP2409河北 YC3001安徽 YC1602云南 YP1502内蒙古 S7YP2006河北 YC1205四川 YP2002湖南 YP2407河北 YC0605浙江 YC0309四川 YP1405新疆 S8YP1002山东 YC1202四川 YP1901湖南 YP2802山西 YC1005江苏 YC0307四川 YP1304新疆 S9YP1705内蒙古 YC1208四川 YP2605辽宁 YP2701山西 YC1006江苏 YC0308四川 YP1301新疆 S10YP2010河北 YC1404湖北 YP2607浙江 YP2801山西 YC0603云南 YC0103云南 YP0501甘肃 S11YP1101山东 YC0905山东 YP1902湖南 YP2408河北 YC1006江苏 YC0310四川 YP1401新疆 S12YP1201山东 YC1203四川 YP2001湖南 YP2402四川 YC0606云南 YC0603云南 YP1404新疆 S13YP2011河北 YC1401湖北 YP2603辽宁 YP2405河北 YC0604云南 YC0605云南 YP1403新疆 S14YP1704内蒙古 YC1204四川 YP2608浙江 YP2702山西 YC1201广西 YC0602云南 YP1303新疆 S15YP1102山东 YC0903山东 YP2610浙江 YP2902山西 YC1004江苏 YC1601云南 YP1402新疆

2 方法与结果

2.1 物质基准制备

按照《古代经典名方中药复方制剂简化注册审批管理规定》[10]要求制备沙参麦冬汤物质基准。按古方剂量折合现代剂量1钱＝3.75 g，称取北沙参11.25 g、麦冬11.25 g、甘草3.75 g、玉竹7.50 g、桑叶5.63 g、天花粉5.63 g、白扁豆5.63 g，以1杯水300 mL计，加水5杯，浸泡30 min，煮至2杯，趁热过滤（100目），滤液精密吸取50 mL，测定出膏率，剩余滤液浓缩至100～200 mL，喷雾干燥，收集干燥粉末，即得。

2.2 特征图谱建立

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～30 min，3%～18%A；30～50 min，18%～30%A；50～60 min，30%～62%A；60～70 min，62～95%A）；检测波长：0～52 min，314 nm；52～59 min，252 nm；59～65 min，314 nm；流速：1.2 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：10 μL。

2.2.2 溶液制备

2.2.2.1 对照品溶液

精密称取甘草苷、甘草酸铵对照品适量，分别加50%甲醇制成每1 mL含甘草苷40.14 μg、甘草酸铵37.85 μg的溶液，摇匀，即得。

2.2.2.2 供试品溶液

精密称取沙参麦冬汤物质基准（编号S1）约2 g，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇溶液25 mL，称定质量，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇溶液补足减失的质量，用0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.2.2.3 单味药溶液

取北沙参、麦冬、玉竹、天花粉、桑叶、白扁豆和甘草各50 g，按“2.1”项下方法制备单味药物质基准，并按“2.2.2.2”项下方法制备，即得。

2.2.3 精密度试验

取“2.2.2.2”项下供试品溶液，连续进样6次，记录色谱图，以甘草苷为参照峰，各主要共有色谱峰的相对保留时间RSD＜1.0%，相对峰面积RSD＜5.0%，结果表明仪器精密度良好。

2.2.4 稳定性试验

取“2.2.2.2”项下供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h测定，记录色谱图，以甘草苷为参照峰，各主要共有色谱峰的相对保留时间RSD＜1.0%，相对峰面积RSD＜5.0%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.5 重复性试验

取沙参麦冬汤物质基准（编号S1），制备供试品溶液6份，连续进样，以甘草苷为参照峰，各主要共有色谱峰的相对保留时间RSD＜1.0%，相对峰面积RSD＜5.0%，结果表明该方法重复性良好。

2.3 部分共有色谱峰归属及相似度评价

将“2.2.2.2”“2.2.2.3”项下溶液分别注入高效液相色谱仪进行检测，记录色谱图，归属各色谱峰。结果表明，供试品溶液中2、4、19、20号峰为桑叶特征峰，8、9、13、14、16、17号峰为甘草特征峰，1号峰为除白扁豆外其他药物的共有峰，3号峰为除天花粉、甘草外其他药物的共有峰，5号峰为所有药物的共有峰，6号峰为白扁豆、甘草的共有峰，7号峰为除北沙参、天花粉外其他药物的共有峰，10、11、12号峰为玉竹、甘草的共有峰，15号峰为北沙参、甘草的共有峰，18号峰为桑叶、甘草的共有峰，见图1。

按“最优最差，剩余随机组合”方法组合方中各批次饮片（见表1），按“2.1”项下方法制备15批物质基准，并按“2.2.1”项下色谱条件检测。将15批特征图谱导入国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012A版），采用中位数法生成对照图谱，以峰面积较大、出峰时间相对稳定的8号峰甘草苷为参照峰，最终标定20个共有峰，指认甘草苷、甘草酸铵色谱峰，结果见图2。同时，计算15批物质基准相似度，结果均在0.9以上（见表2），说明15批沙参麦冬汤物质基准整体质量较为接近，符合要求。

注：8.甘草苷；17.甘草酸铵

表2 15批沙参麦冬汤物质基准相似度评价结果（r）

编号S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10S11S12S13S14S15对照 S11.0000.9310.9910.9880.9880.9350.9290.9350.9660.9560.8600.8760.8620.9050.8640.980 S20.9311.0000.9500.9560.9670.9660.9840.9870.9670.9630.9800.9830.9710.9900.9690.982 S30.9910.9501.0000.9980.9890.9560.9560.9440.9620.9460.8910.9010.8820.9220.8860.987 S40.9880.9560.9981.0000.9910.9640.9610.9470.9610.9490.9030.9100.8990.9280.8920.990 S50.9880.9670.9890.9911.0000.9660.9670.9710.9820.9770.9120.9340.9180.9530.9260.997 S60.9350.9660.9560.9640.9661.0000.9800.9480.9290.9230.9480.9510.9310.9460.9330.973 S70.9290.9840.9560.9610.9670.9801.0000.9780.9520.9470.9640.9770.9540.9760.9630.980 S80.9350.9870.9440.9470.9710.9480.9781.0000.9810.9800.9560.9810.9610.9910.9750.981 S90.9660.9670.9620.9610.9820.9290.9520.9811.0000.9920.9090.9400.9300.9620.9330.984 S100.9560.9630.9460.9490.9770.9230.9470.9800.9921.0000.9100.9460.9400.9660.9410.978 S110.8600.9800.8910.9030.9120.9480.9640.9560.9090.9101.0000.9820.9730.9680.9540.938 S120.8760.9830.9010.9100.9340.9510.9770.9810.9400.9460.9821.0000.9830.9900.9860.953 S130.8620.9710.8820.8990.9180.9310.9540.9610.9300.9400.9730.9831.0000.9730.9580.939 S140.9050.9900.9220.9280.9530.9460.9760.9910.9620.9660.9680.9900.9731.0000.9910.967 S150.8640.9690.8860.8920.9260.9330.9630.9750.9330.9410.9540.9860.9580.9911.0000.940 对照0.9800.9820.9870.9900.9970.9730.9800.9810.9840.9780.9380.9530.9390.9670.9401.000

2.4 甘草苷含量及转移率测定

按2015年版《中华人民共和国药典》“甘草”项下甘草苷测定方法[11]，测定15批沙参麦冬汤物质基准中甘草苷的含量，并计算其转移率。转移率（%）＝物质基准中甘草苷含量×物质基准的量÷（甘草饮片中甘草苷含量×甘草饮片用量）×100%。结果15批物质基准的甘草苷含量为0.053%～0.478%，转移率为38.92%～60.98%，平均转移率为50.02%，见表3。

表3 15批沙参麦冬汤物质基准中甘草苷含量及转移率测定结果

编号甘草饮片/g物质基准/g出膏率/%甘草苷含量/%转移率/%平均转移率/% 饮片物质基准 S130130.6434.643.870.45551.15 50.02 S230112.8033.360.450.06050.23 S330125.1038.273.240.41052.73 S430111.8633.902.950.35544.84 S530103.6227.792.330.37154.98 S630114.2934.731.330.18452.83 S730119.5033.010.620.07849.90 S830125.6432.470.660.07849.72 S930126.4138.230.640.09360.98 S1030 95.0030.333.070.47849.28 S1130116.1931.300.630.06841.55 S1230116.2332.200.760.08241.90 S1330103.2038.230.720.11555.13 S1430127.4034.630.580.05338.92 S1530123.3034.310.480.06656.18

3 讨论

沙参麦冬汤由7味药组成，其化学成分复杂。吴茵等[12]利用超高效液相色谱串联质谱法对沙参麦冬汤加水回流样品中9种代表成分进行含量测定，结果甘草苷、甘草酸铵含量均大于10 μg/mL，其余7种成分含量均小于1 μg/mL。本研究按照古籍方法制备沙参麦冬汤物质基准，采用HPLC波长切换法对其特征图谱进行研究，并对共有峰进行初步归属。通过对比文献及含量测定结果，最终选定峰型较好、响应值较高且较稳定的甘草苷作为参照峰。甘草苷具有丰富的药理学作用，可用于治疗咳嗽、心律失常、胃溃疡、肿瘤等，故将其作为质量控制的指标性成分[13-15]。由于该方中的7味药物质基础研究比较薄弱，可控的指标成分少且含量较低，后期需要结合新技术开展深入研究。

经典名方的开发要求把握药材-饮片-物质基准的一致性，这就需要整体把握药材来源、炮制、提取浓缩干燥工艺、质量控制及最终的物质基准[16-17]。本研究15批沙参麦冬汤物质基准的特征图谱中，共性与差异并存：主要色谱峰的整体面貌一致，相似度较高，但部分色谱峰的峰面积差异较大，说明产地、采收时间、批次不同的饮片对物质基准特征图谱中色谱峰的响应值有一定影响，也可能为饮片组合方式及配伍所致，有待进一步考察[18]。在经典名方的开发利用中，应尽量保证原料药材的一致性，并采用多种分析手段加强经典名方制备工艺及质量标准研究，以保证质量的可控性与稳定性。

本研究通过单因素考察确定最佳提取、浓缩、干燥工艺，实现了古今制备工艺的转化[19]；初步建立了沙参麦冬汤物质基准的特征图谱，方法学考察结果表明，重复性、稳定性良好；并初步对特征图谱色谱峰进行了归属，15批物质基准具有较高的相似性。今后研究拟建立更多指标成分，从而更全面地反映沙参麦冬汤的整体特征。

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Study on Characteristic Spectrum and Determination of Classic PrescriptionDecoction

CHEN Xuejing1,2, QIN Wenjie2, XUE Huiqing1, YANG Xiaoning2

To establish a method of characteristic spectrum and indicator component detection methods; To improve the qualitative control system according to the methods of preparation ofDecoction in ancient books.The method of characteristic spectrum of 15 batches material benchmark ofDecoction was determined by using HPLC. Similarity was calculated byGlycyrrhizin contents and transfer rates in 15 batches of material benchmark were determined according to the method of “Glycyrrhizae Radix et Rhizoma” in the.Setting glycyrrhizin as the reference peak, 20 common peaks were finally identified in the characteristic spectrum ofDecoction, and 2 common peaks were identified. The similarities of 15 batches of material benchmarks were higer than 0.9. The contents of glycyrrhizin in 15 branches were 0.053%‒0.478%, and the transfer rates were 38.92%‒60.98%.The data obtained by the method established in this study are true and reliable, which can lay the foundation for the qualitative control of the material benchmark ofDecoction.

classic prescription;Decoction; material benchmark; characteristic spectrum; content determination