健脾理肺通便方治疗功能性便秘疗效及对肠道菌群的影响

2020-10-14蒋天媛张秋云刘绍能张荣王东方张易从刘瑞华周文强

中国中医药信息杂志 2020年9期

关键词：杆菌属双歧菌群

蒋天媛，张秋云，刘绍能，张荣，王东方，张易从，刘瑞华，周文强

论著·临床研究

健脾理肺通便方治疗功能性便秘疗效及对肠道菌群的影响

蒋天媛1，张秋云1，刘绍能2，张荣2，王东方2，张易从2，刘瑞华2，周文强2

1.首都医科大学中医药学院，北京 100069；2.中国中医科学院广安门医院，北京 100053

观察健脾理肺通便方治疗功能性便秘（FC）脾肺气虚、胃肠气滞证的疗效，以及对患者肠道菌群的影响。选取2019年4－12月中国中医科学院广安门医院脾胃病科门诊FC脾肺气虚、胃肠气滞证患者20例，口服健脾理肺通便方4周。记录治疗前后患者便秘症状分级、中医症状评分；留取治疗前后新鲜粪便样本，基于16S rRNA细菌检测技术鉴定肠道菌群，采用生物信息学分析方法对患者治疗前后粪便样本进行测序评估与物种注释分析、群落组成分析、组间差异性检验及LEfSe多级物种差异判别分析。通便疗效临床痊愈率为50.00%（10/20），中医疗效临床痊愈率为45.00%（9/20）。与治疗前比较，患者各项中医症状评分下降（＜0.05）。测序后获得1 687 426条有效序列，经聚类分析，治疗前后分别有76、119个特征OTUs；治疗前特征性物种在科水平为Tannerellaceae和气球菌科Aerococcaceae，在属水平为志贺菌属Escherichia-Shigella、副拟杆菌属Parabacteroides、Odoribacter、Lachnospiraceae_FCS020_group、Eubacterium_brachy_group（LDA＞2），其中LDA分值最高的物种为志贺菌属Escherichia-Shigella（LDA＝4.25）。治疗后的特征性物种，在目水平为双歧杆菌目Bifidobacteriales，在科水平为双歧杆菌科Bifidobacteriaceae、红蝽杆菌科Coriobacteriaceae、肠球菌科Enterococcaceae，在属水平有双歧杆菌属Bifidobacterium、柯林斯菌属Collinsella、Fusicatenibacter、肠球菌属Enterococcus、链球菌属Streptococcus（LDA＞2），其中LDA分值最高的物种为双歧杆菌属Bifidobacterium（LDA＝4.17）。健脾理肺通便方可明显改善FC脾肺气虚、胃肠气滞证患者便秘情况，并可调节肠道菌群，治疗后志贺菌属Escherichia-Shigella丰度降低，双歧杆菌属Bifidobacterium丰度升高。

健脾理肺通便方；功能性便秘；脾肺气虚；胃肠气滞；肠道菌群；临床研究

功能性便秘（functional constipation，FC）临床以排便间隔延长、排便费力、便质干硬、大便黏滞等为主要表现，且无器质性病变，可见于各个年龄段[1]。长期便秘可导致口臭、痔疮、肛裂，甚至增加结直肠恶性病变几率[2]，引发心血管事件[3]，严重损害患者生存和生活质量。有研究显示，肠道菌群失调可能是多种慢性胃肠道疾病的发病原因，FC患者肠道菌群结构与健康群体存在明显差异[4]，且肠道菌群功能与肠道动力关系密切[5]。中医药治疗FC具有疗效明显、不良反应少、停药不易反弹、费用低等优势。笔者张秋云根据临床经验制定健脾理肺通便方治疗FC脾肺气虚、胃肠气滞证取得较好疗效[6]。本研究通过便秘症状分级和中医症状评分评价健脾理肺通便方对FC患者的通便疗效和中医疗效，并通过16S rRNA细菌检测技术及生物信息学方法，分析治疗前后患者肠道菌群情况，探讨健脾理肺通便方对肠道菌群的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年4－12月中国中医科学院广安门医院脾胃病科门诊FC脾肺气虚、胃肠气滞证患者20例。其中男6例，女14例；年龄32～75岁，平均年龄（53.70±14.51）岁；病程最短6个月，最长20年，平均病程（6.43±5.39）年；体质量指数（BMI）19.53～25.28 kg/m2，平均（22.08±1.76）kg/m2。本研究经中国中医科学院广安门医院伦理委员会审查批准（2019-084-KY）。

1.2 西医诊断标准

参照罗马Ⅳ标准[7]。排除肠道及全身器质性因素、药物及其他原因导致的便秘并符合以下标准：（1）必须符合下列至少2个症状：①至少25%的时间排便感到费力；②至少25%的时间排便为块状便或硬便（布里斯托粪便性状量表1型、2型）；③至少25%的时间排便有不尽感；④至少25%的时间排便有肛门直肠梗阻或阻塞感；⑤至少25%的时间排便需要手法辅助（如用手指协助排便、盆底支持）；⑥每周自发性排便少于3次。（2）不使用泻药时很少出现稀便。（3）不符合便秘型肠易激综合征的诊断标准。诊断之前症状出现至少6个月，且近3个月症状符合以上诊断标准。

1.3 中医辨证标准

参照《功能性便秘中西医结合诊疗共识意见（2017年）》[1]及《中药新药临床研究指导原则（试行）》[8]制定脾肺气虚、胃肠气滞证中医辨证标准。主症：排便间隔延长，排便费力，大便干硬或大便黏滞；次症：疲惫乏力，纳呆少食，神疲懒言，腹胀；舌脉：舌淡苔薄白，脉沉细或脉细弱。具备主症1项，次症2项，参考舌脉即可辨证。

1.4 纳入标准

①符合上述西医诊断标准及中医辨证标准；②年龄18～75岁；③近1个月未使用抗生素、益生菌类药物；④近6个月经结肠镜检查排除肠道器质性病变；⑤患者对本研究知情并签署知情同意书。

1.5 排除标准

①有胃肠道手术史者；②合并心血管疾病、糖尿病、肿瘤、神经系统疾病者；③妊娠或哺乳期妇女；④BMI＜16.0 kg/m2或＞30.0 kg/m2；⑤预计试验期间有外出计划。

1.6 治疗方法

予健脾理肺通便方（黄芪15 g，白术30 g，枳实10 g，厚朴10 g，瓜蒌30 g，虎杖10 g，当归10 g，苦杏仁6 g。中国中医科学院广安门医院中药房采购饮片），水煎服，每日1剂，每次200 mL，早晚餐后30 min口服。疗程4周。

1.7 观察指标

1.7.1 便秘症状分级

参考相关文献[7-9]及课题组专家意见，进行便秘分级。①排便间隔延长：＜3 d排便1次为无，3～4 d排便1次为轻度，5～6 d排便1次为中度，≥7 d排便1次为重度。②排便费力：排便正常为无，排便稍觉费力为轻度，须努挣才能排出大便为中度，临厕努挣仍不能排大便（须使用其他排便辅助方法）为重度。③大便干硬：便质正常为无，大便稍干、条状为轻度，大便干燥成块为中度，大便干结如羊粪状为重度。④大便黏滞：大便通畅无黏滞为无，大便稍黏滞但每次能排净为轻度，大便黏滞且每次排便不净为中度，大便严重黏滞且反复如厕为重度。

1.7.2 中医症状评分

参考相关文献[1，8]及课题组专家意见确定中医症状评分。主症：排便间隔延长、排便费力、大便干硬、大便黏滞，按症状无、轻、中、重分别计0、2、4、6分；次症：疲惫乏力（症状无或消失为无，肢体稍倦可坚持轻体力工作为轻度，四肢乏力勉强进行日常工作活动为中度，全身无力终日不愿活动为重度）、纳呆少食（症状无或消失为无，食欲差饭量减少1/3以内为轻度，食欲差饭量减少1/3～1/2为中度，食欲差饭量减少1/2以上为重度）、神疲懒言（症状无或消失为无，精神略差为轻度，精神疲倦不欲言语为中度，精神疲倦懒于言语为重度）、腹胀（症状无或消失为无，腹胀偶尔出现为轻度，腹胀经常出现为中度，腹胀总出现为重度），按症状无、轻、中、重分别计0、1、2、3分。各项症状评分之和为中医症状积分。

1.7.3 菌群检测及分析

收集患者治疗前后新鲜粪便样本，取中段粪便于灭菌灭酶冻存管（Corning/康宁，规格2.0 mL），1 h内置于-80 ℃冰箱保存待检测。粪便样本采用16 S rRNA细菌检测技术鉴定肠道菌群，分析治疗前后菌群结构和差异性。

16 S rRNA细菌检测：首先使用E.Z.N.A.®soil试剂盒（Omega Bio-tek，Norcross，GA，U.S.）对样本进行基因组DNA抽提，DNA浓度和纯度利用NanoDrop2000进行检测，利用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取质量。用338F（5’-ACTCCTACGGGA GGCAGCAG-3’）和806R（5’-GGACTACHVGGG TWTCTAAT-3’）引物对V3-V4可变区进行PCR扩增（PCR仪：ABI GeneAmp®9700型）。扩增程序：95 ℃预变性3 min，27个循环（95 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s），最后72 ℃延伸10 min。扩增体系为20 μL，4 μL 5*FastPfu 缓冲液，2 μL 2.5 mmol/L dNTPs，0.8 μL引物（5 μmol/L），0.4 μL FastPfu聚合酶；10 ng DNA模板。使用2%琼脂糖凝胶回收PCR产物，利用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit （Axygen Biosciences，Union City，CA，USA）进行纯化，Tris-HCl洗脱，2%琼脂糖电泳检测。利用QuantiFluor™-ST（Promega，USA）检测定量。根据Illumina MiSeq平台（Illumina，San Diego，USA）标准操作规程将纯化后的扩增片段构建PE 2*300的文库。

生物信息学分析：先对原始数据进行过滤处理并得到优化序列；在去除嵌合体序列后，进行OTU聚类分析并对OTU的代表序列作分类学分析。基于OTU聚类分析结果及分类学信息，对各分类水平上的群落结构进行统计分析。基于美吉生物云平台（https://cloud.majorbio.com/）分别进行物种注释与评估、物种组成分析、组间差异性检验、LEfSe多级物种差异判别分析。

1.8 疗效标准

1.8.1 通便疗效标准

参考相关文献[8-9]及课题组专家意见制定通便疗效标准。临床痊愈：排便时间恢复正常且排便感及便质无异常；显效：至少1个便秘症状减轻2个级度以上或至少1个恢复正常，排便间隔时间72 h内；有效：至少1个便秘症状减轻1个级度以上，即由重度降为中度，或由中度降为轻度；无效：排便情况无改善。

1.8.2 中医疗效标准

参考相关文献[8]及课题组专家意见制定中医疗效标准。疗效指数（N）＝（治疗前积分－治疗后积分）÷治疗前积分×100%。临床痊愈：主症、次症消失或基本消失，N≥95%；显效：70%≤N＜95%；有效：30%≤N＜70%；无效：N＜30%。

1.9 统计学方法

2 结果

2.1 通便疗效及中医疗效

通便疗效临床痊愈率为50.00%（10/20），中医疗效临床痊愈率为45.00%（9/20），见表1。

表1 FC患者通便疗效及中医疗效（例）

项目例数临床痊愈显效有效无效通便疗效2010820 中医疗效20 9650

2.2 中医症状评分比较

与治疗前比较，治疗后中医症状评分降低，差异有统计学意义（＜0.05）。见表2。

表2 FC患者治疗前后中医症状评分比较（±s，分）

2.3 测序质量评估及物种注释分析

测序数据经优化后，共获得1 687 426条有效序列，有效序列范围为26 836～54 155条，平均42 186条。由OUT水平和属水平上的Shannon指数可看出，样本肠道菌群多样性指数均大于2.23，实际OTUs数目均大于300，且稀释曲线趋于平缓，表明测序结果可反映当前样本所包含的多样性，继续增加测序深度已无法检测到尚未发现的新OTUs。见图1、图2。

图1 各样本OTU水平Shannon稀释性曲线

图2 各样本属水平Shannon稀释性曲线

基于物种组成分析，对2组样本进行聚类，得到OTUs水平和属水平差异韦恩图。在OTUs水平2组样本共有621个相同OTUs，治疗前有76个特征OTUs，治疗后有119个特征OTUs。在属水平，共有225个相同菌属，治疗前有30个特征菌属，治疗后有19个特征菌属。

2.4 肠道菌群组成结构分析

统计2组样本在门水平、属水平丰度＞1.00%的物种，并绘制柱状图。在门水平，2组样本的优势菌门均为厚壁菌门Firmicutes、拟杆菌门Bacteroidetes、变形菌门Proteobacteria、放线菌门Actinobacteria，其中厚壁菌门占比最高，治疗前后分别为59.00%、61.23%，见图3。在属水平，菌落结构依次为拟杆菌属Bacteroides、粪杆菌属Faecalibacterium、Agathobacter、Blautia、志贺菌属Escherichia- Shigella、[Eubacterium]_hallii_ group、Subdoligranulum、普雷沃菌属Prevotella_9、罗斯菌属Roseburia、双歧杆菌属Bifidobacterium等，见图4。

图3 基于门水平2组样本肠道微生物群落结构

图4 基于属水平2组样本肠道微生物群落结构

在属分类水平上，对前20位的物种进行统计分析，采用群落热图展示治疗前后不同菌属的丰度变化。治疗后，丰度相对升高的菌属有Faecalibacterium、普雷沃菌属Prevotella_9、双歧杆菌属Bifidobacterium等；相对降低的菌属有Lachnoclostridium、瘤胃球菌属[Ruminococcus]_torques_group、志贺菌属Escherichia-Shigella等。见图5。

图5 基于属水平2组样本肠道微生物群落热图

2.5 物种差异性分析

采用Wilcoxon秩和检验，对2组样本属水平物种进行差异性分析，结果提示，治疗后双歧杆菌属Bifidobacterium丰度升高，志贺菌属Escherichia-Shigella丰度降低，差异有统计学意义（＜0.05）。见图6。

图6 基于属水平2组样本肠道微生物物种丰度比较

采用LEfSe多级物种差异判别分析寻找治疗前后的特征性物种（LDA＞2表示差异有统计学意义[10]），LDA分值越大，代表物种丰度对差异效果影响越大。结果显示，治疗前的特征性物种，在科水平为Tannerellaceae和气球菌科Aerococcaceae，在属水平为志贺菌属Escherichia-Shigella、副拟杆菌属Parabacteroides、Odoribacter、Lachnospiraceae_ FCS020_group、Eubacterium_brachy_group，其中LDA分值最高的物种为志贺菌属Escherichia-Shigella（LDA＝4.25）。治疗后的特征性物种，在目水平为双歧杆菌目Bifidobacteriales，在科水平为双歧杆菌科Bifidobacteriaceae、红蝽杆菌科Coriobacteriaceae、肠球菌科Enterococcaceae，在属水平有双歧杆菌属Bifidobacterium、柯林斯菌属Collinsella、Fusicatenibacter、肠球菌属Enterococcus、链球菌属Streptococcus，其中LDA分值最高的物种为双歧杆菌属Bifidobacterium（LDA＝4.17）。见图7。

图7 LEfSe分析LDA柱形图

3 讨论

FC的病理机制复杂多样，主要包括遗传学特征（饮食、肠道微生态等）、动力/肠道传输异常、内脏敏感性降低、肠神经系统紊乱等[11]。有研究显示，FC多伴有肠道菌群结构和丰度改变。较早有学者发现FC患者粪便中双歧杆菌属和乳酸杆菌属含量显著降低，潜在致病菌和/或真菌增多[12]。2017年一项大样本研究显示，FC患者肠道菌群以拟杆菌属、罗斯菌属、粪球菌属含量相对减少，普拉梭菌属含量相对增多为特点[13]。

健脾理肺通便方中黄芪、白术为君，健脾肺之气、推动气机升降；枳实、厚朴、虎杖为臣，通降肠腑，助运大肠，其中虎杖既能泄浊通降，又无涩肠之弊；当归、瓜蒌、苦杏仁为佐药，当归合黄芪、白术，取“血能生气”，补血以助补气之用，且有润肠通便之能，杏仁苦温宣肺，梳理肺肠气机，助大肠传导，合瓜蒌润肠以增通便之效。全方通补兼顾，祛邪而不伤正，共奏补气、泄浊、通便之功。用药剂量大体遵循《中华人民共和国药典》[14]要求，大剂量使用白术可达补气健脾通便之用[15]。有研究发现，高剂量白术配方颗粒可显著升高小鼠肠道菌群中双歧杆菌丰度，降低致病菌含量[16]。体外研究表明，黄芪水提液可有效提高双歧杆菌含量[17]。动物实验研究发现，纳米级中药黄芪可促进大鼠肠道内双歧杆菌﹑乳酸杆菌含量上升，并降低肠球菌﹑肠杆菌含量，使大鼠肠道菌群比例恢复正常[18]。临床研究显示，枳术黄芪汤可增加肠道厌氧菌（双歧杆菌、乳酸）数量，降低需氧菌（肠杆菌、肠球菌）数量，进而改善气虚便秘患者的症状[19]。本研究显示，该方对FC脾肺气虚、胃肠气滞证患者便秘情况具有改善作用；与治疗前比较，患者治疗后排便间隔缩短，排便费力程度、大便干硬、大便黏滞程度减轻，疲惫乏力、纳呆少食、神疲懒言、腹胀等症状改善。

治疗前后门水平上组间物种差异性分析提示，拟杆菌门Bacteroidetes、厚壁菌门Firmicutes、变形菌门Proteobacteria构成比例差异无统计学意义（＞0.05）。在属水平，热图提示治疗后Faecalibacterium、双歧杆菌属Bifidobacterium、普雷沃菌属Prevotella_9丰度上升，与既往文献[20]相符。通过LEfSe多级物种差异判别分析发现，志贺菌属Escherichia-Shigella是治疗前的特征性菌属，双歧杆菌属Bifidobacterium为治疗后的特征性菌属，提示二者可能对治疗有重要意义。

双歧杆菌是现已认识到的人体重要的益生菌之一，也是人体肠道正常菌群中的优势菌种，粘附和定植于肠道黏膜上皮细胞后，发挥营养、抗感染、免疫调节等多种作用，也对排便活动正常进行有重要意义。有研究通过检测大鼠小肠肌电活动发现了特定菌群与肠道动力间的关系，Bifidobacterium bifidum可缩短迁移性肌电复合体周期[21]，促进肠道蠕动，推进排便活动。Bifidobacterium lactis HN019可增强肠道推进性收缩的振幅，抑制非推进性收缩，调节结肠运动模式[22]，促进排便活动。结肠‎‎黏蛋白（层）被覆于肠上皮表面，是肠屏障重要组成部分，可作为润滑剂协助粪团通过，而黏蛋白减少、黏液层厚度降低可见于便秘患者或模型动物[5]，研究发现，含有Bifidobacteria的VSL#3益生菌配方可以促进大鼠结肠‎‎黏蛋白2‎‎基因‎‎表达，促进黏蛋白‎‎分泌[23]，推进粪便排出。另外，双歧杆菌的代谢产物中含有多种有机酸[24]，主要为乙酸、乳酸和甲酸，可刺激人体肠道壁，促进肠道蠕动，利于排便。同时有机酸含量升高可增加肠道内渗透压，利于水分由低渗透压处进入肠道内高渗透压处，产生通便效果[25]。

志贺菌属Escherichia-Shigella作为治疗前的特征性菌群，属条件致病菌，主要来源于胃肠道。有研究表明，FC患者经合生元治疗后，属水平上，Faecalibacterium、Prevotella_9丰度增加，Escherichia- Shigella丰度降低，与患者便秘症状改善结果一致[26]。有研究通过检测小肠肌电活动发现，该菌属可延长MMC周期，对肠道蠕动产生明显抑制作用，可导致排便异常[20]。

综上，健脾理肺通便方对改善FC脾肺气虚、胃肠气滞证患者便秘症状和其他伴随症状有较好效果，并对患者肠道菌群有一定调节作用，可使双歧杆菌属Bifidobacterium丰度升高、志贺菌属Escherichia- Shigella丰度降低。本研究初步探索了健脾理肺通便方治疗FC脾肺气虚、胃肠气滞证的疗效及治疗前后的特征性菌属，但存在一定局限性，如样本量过少、研究中心少，今后应进一步扩大样本量，增加研究中心，以期得出更可靠的研究结果。

[1] 李军祥,陈誩,柯晓.功能性便秘中西医结合诊疗共识意见(2017年)[J].中国中西医结合消化杂志,2018,26(1)：18-26.

[2] GUÉRIN A, MODY R, FOK B, et al. Risk of developing colorectal cancer and benign colorectal neoplasm in patients with chronic constipation[J]. Aliment Pharmacol Ther,2014,40(1)：83-92.

[3] BASSOTTI G. Being constipated：a bad omen for your cardiovascular system?[J]. Atherosclerosis,2016,245：240-241.

[4] ZHU L, LIU W, ALKHOURI R, et al. Structural changes in the gut microbiome of constipated patients[J]. Physiol Genomics,2014, 46(18)：679-686.

[5] DIMIDI E, CHRISTODOULIDES S, SCOTT S M, et al. Mechanisms of action of probiotics and the gastrointestinal microbiota on gut motility and constipation[J]. Adv Nutr,2017,8(3)：484-494.

[6] 蒋天媛,张秋云.张秋云用健脾理肺法治疗功能性便秘经验[J].北京中医药,2019,38(10)：1015-1017.

[7] 柯美云,方秀才,侯晓华.罗马Ⅳ功能性胃肠病——肠-脑互动异常[M].北京：科学出版社,2017：643-644.

[8] 郑筱萸.中药新药临床研究指导原则(试行)[M].北京：中国医药科技出版社,2002：29-31.

[9] 刘绍能,刘慧敏,李游,等.益气润肠方治疗功能性便秘的临床疗效观察[J].北京中医药,2013,32(4)：287-289.

[10] 王海瑜,钱唐亮,康天伦,等.肠道菌群与类风湿关节炎寒热证型的相关性研究[J].中国中医药信息杂志,2020,27(6)：44-49.

[11] LANGILLE M G, ZANEVELD J, CAPORASO J G, et al. Predictive functional profiling of microbial communities using 16S rRNA marker gene sequences[J]. Nat Biotechnol,2013,31(9)：814-821.

[12] KHALIF I L, QUIGLEY E M, KONOVITCH E A, et al. Alterations in the colonic flora and intestinal permeability and evidence of immune activation in chronic constipation[J]. Dig Liver Dis,2005, 37(11)：838-849.

[13] MANCABELLI L, MILANI C, LUGLI G A, et al. Unveiling the gut microbiota composition and functionality associated with constipation through metagenomic analyses[J]. Sci Rep,2017,7(1)：9879.

[14] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社,2015.

[15] 章慧.生白术与枳实配伍治疗慢传输型便秘的临床研究[D].南京：南京中医药大学,2017.

[16] 鄢伟伦,王帅帅,任霞.白术对小鼠肠道菌群调节作用的实验研究[J].山东中医杂志,2011,30(6)：417-419.

[17] 戴宇青,蒋月,张燕,等.黄芪对双歧杆菌生长的影响及其抗黑色素瘤作用研究[J].药物生物技术,2017,24(3)：200-205.

[18] 孙立群,梁金花,高月娟.探讨纳米级中药黄芪对溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群失调的调整作用[J].中国中医急症,2012,21(8)：1263-1265.

[19] 李巧霞.枳术黄芪汤对消渴病便秘(气虚证)患者肠道菌群的影响[J].湖北民族学院学报(医学版),2018,35(4)：86-88.

[20] 黄林生,祝琦,高仁元,等.合生元治疗慢性功能性便秘的疗效及对肠道菌群结构的影响研究[J].中国全科医学,2018,21(8)：908-913.

[21] HUSEBYE E, HELLSTRÖM P M, SUNDLER F, et al. Influence of microbial species on small intestinal myoelectric activity and transit in germ-free rats[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2001,280(3)：G368-380.

[22] DALZIEL J E, ANDERSON R C, PETERS J S, et al. Promotility action of the probiotic bifidobacterium lactis HN019 extract compared with prucalopride in isolated rat large intestine[J]. Front Neurosci,2017,11：20.

[23] CABALLERO-FRANCO C, KELLER K, DE SIMONE C, et al. The VSL#3 probiotic formula induces mucin gene expression and secretion in colonic epithelial cells[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2007,292(1)：G315-322.

[24] SCOTT K P, MARTIN J C, DUNCAN S H, et al. Prebiotic stimulation of human colonic butyrate-producing bacteria and bifidobacteria, in vitro[J]. FEMS Microbiol Ecol,2014,87(1)：30-40.

[25] VAN DER WERF M J, VENEMA K. Bifidobacteria：genetic modification and the study of their role in the colon[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2001,49(1)：378-383.

[26] HUANG L S, KONG C, GAO R Y, et al. Analysis of fecal microbiota in patients with functional constipation undergoing treatment with synbiotics[J]. Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37(3)：555-563.

Efficacy ofPrescription for Functional Constipation and Effects on Intestinal Flora

JIANG Tianyuan1, ZHANG Qiuyun1, LIU Shaoneng2, ZHANG Rong2, WANG Dongfang2,ZHANG Yicong2, LIU Ruihua2, ZHOU Wenqiang2

To investigate the clinical efficacy ofPrescription in the treatment of functional constipation with TCM syndrome differentiation of spleen-lung qi deficiency and stomach-bowel qi stagnation, and effects on intestinal flora.Totally 20 patients diagnosed as FC with spleen-lung qi deficiency and stomach-bowel qi stagnation who admitted to Guang’anmen Hospital from April 2019 to December 2019 were selected as study subjects. All patients were treated withPrescription for 4 weeks. Constipation symptoms degrees and TCM syndrome scores were recorded before and after treatment. Biological analysis methods were used to carry out sequencing evaluation and species annotation analysis, community composition analysis, group difference test, LEfSe multi-level species difference discriminant analysis before and after treatment.The clinical cure rate of laxative effect was 50.00% (10/20), and the clinical cure rate of TCM was 45.00% (9/20). Compared with before treatment, TCM symptom scores were significantly reduced (<0.05). After sequencing, 1 687 426 effective sequences were obtained. After cluster analysis, there were 76 and 119 characteristic OTUs before and after treatment respectively. The characteristic species before treatment were Tannerellaceae and Aerococcaceae at the family level, and Escherichia-Shigella, Parabacteroides, Odoribacter, Lachnospiraceae_FCS020_group, Eubacterium_brachy_group at the genus level (LDA>2). Among them, the species with the highest LDA score was Escherichia-Shigella (LDA=4.25). The characteristic species after treatment were Bifidobacteriales at the order level, Bifidobacteriaceae, Coriobacteriaceae, and Enterococcaceae at the family level, and Bifidobacterium, Collinsella, Fusicatenibacter, Enterococcus, and Streptococcus at the genus level (LDA>2), among which the species with the highest LDA score was Bifidobacterium (LDA=4.17).Prescription can significantly relieve constipation in patients of FC with spleen-lung qi deficiency and stomach-bowel qi stagnation and regulate intestinal flora. The abundance of Escherichia-Shigella has decreased and the abundance of Bifidobacterium has increased after treatment, which may play an important role in the treatment.

Prescription; functional constipation; spleen-lung qi deficiency; stomach-bowel qi stagnation; intestinal flora; clinical study