康视明合剂降糖治疗视网膜病变的实验研究

2020-10-12沈艳婷林柳兵徐燕丰钱春美

世界中医药 2020年17期

沈艳婷林柳兵徐燕丰钱春美

摘要目的：探讨康视明合剂对糖尿病大鼠血糖、尿素氮、胰岛病理的影响。方法：应用链脲佐菌素（STZ）给大鼠造糖尿病模型，并连续灌胃6个月，观察胰腺病理改变并检测胰岛素、血糖、尿素氮。结果：模型组的胰岛数量减少，形态不规则，胰岛素水平低于正常组，但阳性药组与中药组改善胰岛数量、形态，胰岛素水平并不显著;模型组胰岛素水平明显低于正常组，但差异无统计学意义（P>0.05）。模型组中糖化血红蛋白水平与正常组比较，差异有统计学意义（P<0.05）;各给药组与模型组比较，除了高剂量组差异有统计学意义（P<0.05），其余组差异无统计学意义（P>0.05）。模型组中尿素氮水平与正常组比较，差异有统计学意义（P<0.05）;各给药组与模型组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：康视明合剂能直接降低血糖或作用于胰岛，防治视网膜病变，改善肾功能。

关键词康视明合剂;视网膜病变;糖尿病;血糖;胰腺;病理;尿素氮，糖化血红蛋白

Abstract Objective：To investigate the effect of Kangshiming Mixture on blood glucose， urea nitrogen， pathology of pancreas in diabetic rats. Methods：Diabetes was induced in rats by injection of STZ， and the rats were treated for 6 months by gavage. The pathological changes of the pancreas， insulin， blood sugar and urea nitrogen were observed. Results：The number of pancreas islets in the model group was lower， with irregular shape. However， the positive medicine group and the Chinese medicine group improved the number and morphology of islets， and the insulin content was not significant; while the high-dose Chinese medicine group had a certain effect on the improvement of glycohemoglobin and urea nitrogen， among which there was a significant difference in glycohemoglobin. Conclusion：Kangshiming Mixture can reduce blood sugar directly or on the pancreas islets， prevent retinopathy and improve renal function.

Keywords Kangshiming Mixture; Retinopathy; Diabetes; Blood sugar; Pancreas; Pathology; Urea nitrogen; Glycosylated hemoglobin

中圖分类号：R289.5;R587.1文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.17.011

糖尿病是由遗传因素、免疫功能紊乱等各种致病因子作用于机体导致的代谢紊乱综合征。而一系列的代谢失调是由胰岛功能减退，胰岛素过度分泌等引发的。糖尿病最主要的特点是高血糖，且出现多尿、多饮、多食、消瘦，即“三多一少”的临床症状。一旦血糖控制不好，将会引发各种并发症，如：糖尿病足病、糖尿病肾病[1]、视网膜病变、糖尿病合并高血压等。其中的视网膜病变是糖尿病常见的严重并发症之一，是导致糖尿病患者失明的重要原因[2-4]。

康视明合剂作为院内制剂，前期在合剂的工艺研究及质量控制上都有一定的研究[5-6]，且在我院临床应用15年以上，对于视网膜萎缩、视网膜硬化等眼底疾病取得了良好的治疗效果。康视明合剂的前期研究是由我院眼科团队负责，旨在改善病患眼疾，提升视力，改善生命质量。研究显示，此制剂对病患眼疾症状及眼底病变有效，尤其是对非渗出型年龄相关性的黄斑变性有确切疗效[7]，而且在治疗糖尿病大鼠的视网膜病变上有一定疗效。是否通过作用胰岛或者直接降低血糖，改善视网膜病变，还是直接延缓视网膜病变？本实验继续探索康视明合剂通过降糖、改变胰岛形态等防治视网膜病变。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 SD大鼠，清洁级，雄性，250～270 g，共55只，于上海市中医医院实验动物房清洁级饲养。实验动物使用许可证号：SYXK（沪）2014-0019。实验期间，大鼠自由饮水、摄食，2 d换1次垫料，以保障正常的饲养环境。

1.1.2 药物康视明合剂为我院院内制剂，批号：20150805。链脲佐菌素（STZ），美国Sigma公司。

1.1.3 试剂与仪器

试剂：生理盐水（广东大冢制药有限公司，批号：20150301）。羟苯磺酸钙片（南京长澳制药有限公司，生产批号：20150506）。0.1 mol/L，pH值4.4的柠檬酸缓冲液自行配制。大鼠胰岛素（INS）酶联免疫分析试剂（批号：201601），大鼠糖化血红蛋白（GHb）酶联免疫分析试剂（批号：201601），尿素氮（BUN）测试盒（批号：20160120），以上试剂均购于南京建成。仪器：显微镜（上海史莱克，型号：Leica DM2500）。高速离心机[日本5200型（KUBOTA）]。电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂，型号：H.H.S254）。电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司，型号：DHG-9053A）。轮转式石蜡切片机（型号：KO-1508），电脑生物组织包埋机（型号：KD-BM II），购自浙江金华科迪仪器设备有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备参照《药理实验方法学》第3版中的链佐霉素建立糖尿病视网膜病变大鼠模型。将STZ溶于0.1 mol/L的柠檬酸缓冲液（pH4.4）中，配制成最终浓度为2%的溶液[8-9]。在造模前，所有实验大鼠均需要禁食12 h，每只大鼠按60 mg/kg的剂量给予腹腔注射，72 h后断尾测定血糖。（尿糖在+++以上，血糖高于16.7 mmol/L为成模标准）。除了正常组8只外，成模47只大鼠按照血糖高低，随机分组，模型组17只，阳性药对照组、中药高剂量组、中药低剂量组，每组10只。

1.2.2 给药方法成模分组后的第2天起，分别给予灌胃，1 mL/100 g，1次/d。正常组与模型组分别给予蒸馏水，阳性药对照组给予羟苯磺酸钙片溶液，中药高低剂量分别给予康视明合剂。

1.2.3 检测指标与方法血清检测如胰岛素水平检测、糖化血红蛋白水平检测[10]、尿素氮水平检测;胰岛素、糖化血红蛋白为酶联免疫分析法检测，尿素氮为比色法检测。饲养期间，每月尾尖取血测量1次血糖，6个月后处死，腹主动脉取血，离心血清。摘取胰腺、肾、肝等脏器，进行病理切片观察。

1.3 统计学方法采用SPSS 18.0统计软件处理数据，计量资料以均数±标准差（±s）表示，若正态分布并方差齐性，采用多组间F检验。否则，用秩和检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胰腺病理观察显微镜下观察正常组的胰腺腺泡与胰岛均完好，胰岛呈椭圆或圆形团状，外分泌腺与胰岛之间边缘清晰，胰岛细胞密度高，细胞分布均匀，形态规则。模型组的胰岛受损严重，周围界限界不清，形态不规则，有变小或萎缩状。为保证血糖平衡，胰腺需不断分泌过量的胰岛素，进入胰岛B细胞结构破坏期，且过度地分泌会造成胰岛B细胞功能下降。模型组中的胰岛细胞数明显减少，细胞分布稀疏不均匀，且胰岛细胞胞质内显示有空泡状。与模型组比较，阳性药组与高剂量组的胰岛细胞的完整性较好，边际较清晰，胰岛有变小。低剂量组的胰岛与模型比较，除了胰岛空泡状有所改变外，其余差异并不明显。见图1、图2。

2.2 康视明合剂对胰岛素的影响模型组胰岛素水平明显低于正常组，但差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.3 康视明合剂对糖血红蛋白的影响模型组中糖血红蛋白水平与正常组比较，差异有统计学意义（P<0.05）;各给药组与模型组比较，除了高剂量组差异有统计学意义（P<0.05），其余组差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

2.4 康视明合剂对尿素氮的影响模型组中尿素氮水平与正常组比较，差异有统计学意义（P<0.05）;各给药组与模型组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。

3 讨论

本实验采用的造模方法简单，通过一次性大剂量注射STZ，破坏胰腺B细胞，使细胞坏死。从而引起大鼠体内胰岛素水平的下调，随之血糖升高，但动物在饲养一个月后，精神萎靡，形体及其消瘦的大鼠将出现死亡情况。动物饲养到6个月时，视网膜内核层和神经细胞层才出现VEGF mRNA免疫阳性反应，糖尿病并发症视网膜病变更全面，肾病也随之出现[11]。

Unger[12]于1981年提出了糖尿病发病的“双激素学说”，此学说讲到胰岛A细胞及B细胞功能发生异常会引发糖尿病发病，即胰岛素分泌相对不足，胰升糖素分泌相对增高。胰岛素是胰岛B细胞分泌的一种多肽激素，其主要功能是刺激细胞对葡萄糖的利用而降低血糖，糖尿病时血糖升高就因B细胞功能缺陷引起。胰岛素抵抗的一个诱因是富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC），它是一种组织细胞分泌性基质蛋白[13-14]。其中，血糖升高虽是代谢障碍的重要指标，但不是发生并发症的唯一因素，降低血糖趋于正常化是不能降低糖尿病并发症的发生率。相对于胰岛素强化治疗，中药也起到一个长期保持血糖平稳发展的作用。参芪汤、益气养阴活血汤等中药可以降低血糖或减少尿蛋白，改善肾功能[15-16]。

康视明合剂由益气聪明汤化裁而成，主要含党参、当归、白芍、黄柏、葛根、苍术、灵芝、枳壳、柴胡、甘草等14味中药，具有益气升阳聪耳明目之功效，以益气养党参、黄芪甘温以补脾胃，为主药治其本;葛根、升麻、蔓荆子味辛性凉，合用入肝走胃，轻扬升发，鼓舞清阳，中气既足，清阳上升，则九窍通利，耳聪而目明;白芍养血敛阴，黄柏补肾生水，甘草甘缓以和脾胃，共佐补气升阳药，以免升发太过，使中气得到补益，清阳上升，肝肾受益，目障清除，共奏益气升清之功，主要用于治疗视神经萎缩视网膜动脉硬化等眼底疾患是防治视网膜病变。那康视明合剂是否能直接降血糖或是通过胰岛素的调控来控制血糖呢？本实验HE病理显示，康视明合剂对于胰岛的损伤作用，有一定的改善作用，主要表现在胰岛细胞胞质空泡性状有所减少，而对整个胰岛细胞数量、大小、边界、形态等改善作用并不明显。从胰岛素的水平数据来看，没有太大的影响。可能不是间接通过保护胰腺，促使胰岛分泌激素，降血糖。血糖的稳定有赖于胰升糖素与胰岛素的相互协调。本研究结果未显示中药制剂能促进胰岛素分泌的作用，是否有通过胰升糖素的抑制作用，本实验尚未显示。但从糖化血红蛋白指标看，康视明合剂对已持续升高的血糖较强的作用，且随着康视明合剂水平的升高，控制血糖的效果越是显著。可见，它可能通过直接降血糖，来控制血糖，减少糖尿病并发症。本研究只是从一些表观上初步发现康视明合剂与血糖有着直接联系，对胰升糖素的作用，需要在后期实验中进一步验证完善。

糖尿病患者最突出又直接的临床表现是高血糖，而持续维持在高血糖状态下，往往容易出现微循环血管、血液成分及血流动力学异常。而糖尿病患者中最常见的微血管病变是视网膜病变和肾脏损害。有研究表明，1型糖尿病患者視网膜病变与其肾功能关系很密切，其中肾功能异常的糖尿病患者发生视网膜病变的概率比肾功能正常的糖尿病患者高[17]。尿素氮是机体蛋白代谢的产物，有研究表明，2型糖尿病患者24 h血尿素氮与糖尿病患者发生糖尿病视网膜病变相关[18]。尿素氮水平随着糖尿病视网膜病变严重程度增加而升高[19]。康视明合剂高剂量能够明显的抑制尿素氮的分泌，减少肾损伤，降低糖尿病肾病的发生。且间接反映此模型可以使视网膜病变与糖尿病肾病共存，而康视明合剂在改善视网膜病变的同时，对肾病也有一定的治疗作用。后期实验将进一步深入研究此降血糖是主要通过调控哪些机制进行调控和治疗肾病的研究。

参考文献

[1]杨莉，徐玉秀，李小南，等.糖尿病合并肾病患者血液流变学检测的意义[J].吉林医学，2011，32（15）：2981.

[2]罗丽华，王艳玲.糖尿病视网膜病变的病理改变[J].临床和实验医学杂志，2008，7（6）：176-177.

[3]Sameen M，Khan MS，Mukhtar A，et al.Efficacy of intravitreal bevacizumab combined with pan retinal photocoagulation versus panretinal photocoagulation alone in treatment of proliferative diabetic retinopathy[J].Pak J Med Sci，2017，33（1）：142-145.

[4]Hwang DJ，Shin JY，Yu HG.Oral Administration of Cilostazol Increases Ocular Blood Flow in Patients with Diabetic Retinopathy[J].Korean J Ophthalmol，2017，31（2）：123-131.

[5]徐玥，周园明，许伟英，等.正交设计优化康视明合剂的提取工艺[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（13）：32-34.

[6]徐玥，蔡烽，张钦，等.康视明合剂质量标准的提高研究[J].中国药师，2014，17（2）：218-220.

[7]宋毅，朱莺.康视明合剂治疗年龄相关性黄斑变性临床疗效研究[J].云南中医学院学报，2014，37（2）：63-64，71.

[8]凌志红，徐格致，龚红华，等.实验性早期糖尿病鼠视网膜神经组织病理改变[J].中国眼耳鼻喉科杂志，2004，4（6）：347-349.

[9]庞东渤，符丽娟，刘学政.链脲佐菌素-糖尿病大鼠视网膜微血管病理改变[J].眼视光学杂志，2005，7（1）：47-49.

[10]姚建华.糖化血红蛋白测定在糖尿病诊断中的临床意义[J].兵团医学，2015，44（2）：25-27.

[11]李明新.早期大鼠实验性糖尿病视网膜病变模型的建立及观察[J].徐州医学院学报，2005，25（5）：436-440.

[12]Unger RH，Orci L.Glucagon and the A cell：physiology and pathophysiology（first two parts）[J].N Engl J Med，1981，304（25）：1518-1524.

[13]Kos K，Wilding JP.SPARC：a key player in the pathologies associated with obesity and diabetes[J].Nat Rev Endocrinol，2010，6（4）：225-235.

[14]Harries LW，McCulloch LJ，Holley JE，et al.A role for SPARC in the moderation of human insulin secretion[J].PLoS One，2013，8（6）：e68253.

[15]高斌，白淑英，李淑華，等.参芪汤对糖尿病大鼠视网膜血管形态改变的作用[J].中国中医药科技，2006，13（3）：159-160.

[16]赵建明.益气养阴活血汤治疗糖尿病性肾病蛋白尿40例[J].陕西中医，2013，34（9）：59-60.