冠心病合并慢性心力衰竭病人血清鸢尾素、微小RNA-133与心功能指标的相关性

周明敏，方子美

冠心病(CHD)是一种冠状动脉慢性炎症性疾病，由糖脂代谢紊乱和血管内皮损伤引起[1]。慢性心力衰竭(CHF)是心脏结构重构和功能减退的慢性病变过程，是多种心血管疾病的终末期表现[2]。鸢尾素(irisin)是由肌肉细胞分泌的一种肽类激素，可促进白色脂肪向棕色脂肪转变，参与能量代谢和糖脂代谢[3]。微小RNA-133(miR-133)包括miR-133a、miR-133b，主要表达于心肌和骨骼肌，与心脏细胞凋亡、心肌重构等有关[4]。本研究探讨血清鸢尾素、miR-133与CHD合并CHF病人心功能指标的相关性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年5月—2018年5月我院心内科收治的CHD合并CHF病人109例作为研究对象，均经冠状动脉造影、心电图及心肌酶学检查确诊。纳入标准：符合世界卫生组织(WHO)关于缺血性心脏病的命名和诊断标准[5]；符合2007年《慢性心力衰竭诊断治疗指南》[6]。排除标准：瓣膜性心脏病、严重肝肾等脏器功能障碍、糖尿病、感染性疾病、恶性肿瘤、免疫系统疾病。入选的109例病人作为CHD+CHF组，男58例，女51例；年龄45～79(61.28±8.45)岁；根据美国心脏病协会(NYHA)心功能分级：Ⅱ级36例，Ⅲ级41例，Ⅳ级32例；体质指数(24.57±8.11)kg/m2。选取同期我院收治的CHD稳定型心绞痛心功能代偿病人50例作为CHD组，男27例，女23例；年龄47～77(59.01±9.64)岁；体质指数(25.03±8.55)kg/m2。选取同期到我院进行健康体检的正常人群50名作为对照组，男28名，女22名；年龄46～78(59.86±9.78)岁；体质指数(24.98±8.64)kg/m2。3组一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 检测指标及方法

1.2.1 血清鸢尾素水平检测 于清晨抽取所有研究对象4 mL空腹静脉血，以3 000 r/min离心10 min，获得血清。鸢尾素采用酶联免疫吸附法检测，试剂盒来自上海臻科生物科技有限公司。

1.2.2 血清miR-133水平检测 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测。采用总RNA提取试剂盒(TRIzol法)提取总RNA，试剂盒来自BioTNT，样品纯度合格样品标准：A260/A280≥1.8～2.0。逆转录试剂盒及实时荧光定量PCR试剂盒购自宝生物公司。本研究所需miR-133a、miR-133b、内参U6的上游、下游引物均购自上海生工公司。PCR反应条件：92 ℃ 60 s，92 ℃ 60 s，56 ℃ 60 s，74 ℃ 60 s，设置为36个循环。采用2-△△Ct法来计算miR-133a、miR-133b相对表达量。重复3次，取平均值。

1.2.3 心功能指标 采用荷兰Philips Ie33超声检测仪检查心功能指标左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)。

2 结 果

2.1 3组血清鸢尾素、miR-133表达水平比较 CHD+CHF组和CHD组血清鸢尾素明显低于对照组(P<0.05)，miR-133a、miR-133b表达量明显高于对照组(P<0.05)；CHD+CHF组血清鸢尾素明显低于CHD组(P<0.05)，miR-133a、miR-133b表达量明显高于CHD组(P<0.05)。详见表1。

表1 3组血清鸢尾素、miR-133水平比较(±s)

2.2 CHD+CHF组不同心功能分级病人血清鸢尾素、miR-133表达水平比较 随着心功能分级的提高，CHD+CHF组血清鸢尾素逐渐降低，miR-133a、miR-133b表达量逐渐升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 CHD+CHF组不同心功能分级病人血清鸢尾素、miR-133水平比较(±s)

2.3 3组心功能指标比较 CHD+CHF组和CHD组LVEF明显低于对照组，LVEDD明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；CHD+CHF组LVEF明显低于CHD组，LVEDD明显高于CHD组，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表3。

表3 3组心功能指标比较(±s)

2.4 CHD+CHF组不同心功能分级病人心功能指标比较 随着心功能分级的提高，LVEF逐渐降低(P<0.05)，LVEDD逐渐升高(P<0.05)。详见表4。

表4 CHD+CHF组不同心功能分级病人心功能指标比较(±s)

P<0.05。

2.5 CHD+CHF组病人鸢尾素、miR-133与心功能指标的相关性分析 Pearson相关性分析显示，鸢尾素与LVEF呈正相关(r=0.601，P<0.01)，与LVEDD呈负相关(r=-0.562，P<0.01)；miR-133a、miR-133b与LVEF呈负相关(r=-0.481，P<0.01；r=-0.456，P<0.01)，与LVEDD呈正相关(r=0.437，P<0.01；r=0.422，P<0.01)。详见表5。

表5 CHD+CHF组鸢尾素、miR-133与心功能指标的相关性分析

3 讨 论

CHD是一种严重威胁人类健康和生命安全的心血管疾病，老年人群CHD合并CHF的发病率不断提高，其发病机制与糖尿病、血脂异常、高血压、炎症反应等均有关[7]。CHF是各种心脏病导致心功能不全的终末期阶段，主要表现为心脏功能与结构的改变。

作为一种肌肉因子，鸢尾素是Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5在蛋白酶水解下分解后，进入血液循环形成的多肽[8]。有动物实验表明，鸢尾素可诱导白色脂肪向棕色脂肪转变，提高能量代谢，减轻小鼠体重，有利于缓解糖耐量异常和胰岛素抵抗[9]。莫显刚等[10]研究表明，心力衰竭病人循环鸢尾素水平降低，血清鸢尾素浓度与肌酐、稳态胰岛素评估模型胰岛素抵抗、LVEDD及NYHA心功能分级呈负相关，与LVEF、三酰甘油及高密度脂蛋白胆固醇呈正相关，可能参与心力衰竭的糖脂代谢紊乱。

miRNA是一类单链非编码小分子 RNA，在人体内的表达和分布具有高度的组织或细胞特异性，其中miR-133就可特异性表达于心脏的心肌细胞，在心肌细胞凋亡、心肌发育、心肌纤维化等调控过程中起重要作用[11]。徐振宇等[12]研究表明，CHF病人血清miR-133a、miR-133b表达量随心功能分级提高而升高，且与左房内径(LAP)、左心室右壁厚度(LVPW)、左室质量指数(LVMI)均呈正相关。张雪莲等[13]研究表明，miR-133a和miR-133b在CHF病人血清中表达量升高，与心肌重构和心脏功能密切相关。Carè等[14]研究发现，通过抑制体内miR-133a表达可引发心肌肥厚，而在体外过表达miR-133a则可阻止心肌肥厚的发生。因此，miR-133与心脏功能有密切关系。

本研究结果表明，CHD+CHF组和CHD组血清鸢尾素明显低于对照组，miR-133a、miR-133b表达量明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；CHD+CHF组血清鸢尾素明显低于CHD组，miR-133a、miR-133b表达量明显高于CHD组，差异均有统计学意义(P<0.05)。说明鸢尾素、miR-133a、miR-133b与CHD病人密切相关，同时还可能参与CHF过程。随着心功能分级的提高，CHD+CHF组血清鸢尾素逐渐降低(P<0.05)，miR-133a、miR-133b表达量逐渐提高(P<0.05)。提示鸢尾素、miR-133a、miR-133b与心功能分级明显相关。Pearson相关性分析显示，鸢尾素与LVEF呈正相关，与LVEDD呈负相关；miR-133a、miR-133b与LVEF呈负相关，与LVEDD呈正相关。提示鸢尾素、miR-133a、miR-133b与CHD+CHF病人的心功能密切相关，分析其可能原因是胰岛素抵抗参与多种心血管疾病(如高血压、CHD、2型糖尿病等)的发病机制，当机体的血清鸢尾素水平降低时，可使胰岛素抵抗加剧，从而导致糖、脂质的代谢发生紊乱，进而引发或加剧动脉粥样硬化的进程，从而参与心脏重构。而有研究表明，miR-133能结合于RhoA基因转录产物，使RhoA基因表达和细胞分化周期蛋白表达降低，减少心肌纤维合成，提高结缔组织生长因子表达，进而引起心肌细胞的增殖异常。

综上所述，血清鸢尾素、miR-133可有效反映CHD合并CHF病人的心功能情况，有利于评估心室重构情况。