君子兰未成熟胚离体培养的研究

邓小敏

（抚顺市农业特产学校，辽宁 抚顺 113123）

君子兰为石蒜科君子兰属多年生草本植物，叶、花、果均具有很高的观赏价值[1]。君子兰种子具有成熟期长、育种周期长、分株繁殖倍率低等特点。为缩短种子生育期，增加其繁殖系数，本实验通过研究未成熟胚离体的培养，探索出更加适用于君子兰未成熟胚快速繁殖的培养基和外植体。

1 材料与方法

1.1 供试材料

君子兰“油匠”品种为4 年生植株，温室盆栽，正常管理。

1.2 培养基和培养条件

以MS 为基本培养基，附加不同浓度的NAA、2，4-D 和BA，蔗糖30g·L-1，琼脂6g·L-1，pH 值为5.8。培养温度为（25±1）℃，每天光照时长为12 h，光照强度为2 000 lx。

1.3 试验方法

比较不同激素对未成熟胚愈伤组织的诱导、分化及直接成芽的影响。将果实置于流水下冲洗，将在超净工作台上剥离出的种子浸泡于70%酒精中消毒10 s，再取出种胚接种在下列8种培养基上：①MS+NAA 1 mg·L-1+BA 1 mg·L-1；②MS+NAA 1 mg·L-1+BA 2 mg·L-1；③MS+NAA 0.5 mg·L-1+BA 2 mg·L-1；④MS+NAA 0.5 mg·L-1+BA 1 mg·L-1；⑤MS+2，4-D 1 mg·L-1+BA 1 mg·L-1； ⑥MS+2，4-D 2 mg·L-1+BA 1 mg·L-1；⑦MS+2，4-D 1 mg·L--1+BA 2 mg·L-1；⑧MS+2，4-D 2 mg·L-1+BA 2 mg·L-1。

比较不同胚龄对未成熟胚诱导再生的影响。将授粉后110 d、130 d、150 d 未成熟胚接种在MS+NA A 0.5 mg·L-1+BA 2 mg·L-1的培养基上。

2 结果与分析

2.1 不同激素及浓度配比对未成熟胚离体培养的影响

将“油匠”未成熟胚接种到表1 中的8 种培养基上，20 d 后观察到：接种在NAA 和BA 组合的4 种培养基上的胚20 d 后膨大变绿，能直接再生成芽，其中在MS+NAA 0.5 mg·L-1+BA 1 mg·L-1培养基上芽的再生率为86.05%，明显高于其他三种培养基中芽的再生率，而且其中有32 个外植体形成的再生芽形成了丛生芽。接种在2，4-D 和BA 组合的4 种培养基上的胚有愈伤组织产生，其中在MS+2，4-D 1 mg·L-1+BA 2 mg·L-1培养基中的愈伤组织诱导率最高，达到73.47%。通过继代培养能分化出苗，其中在MS+2，4-D 1 mg·L-1+BA 1 mg·L-1培养基上的分化率最高，为42.86%。NAA 利于未成熟胚再生成芽，2，4-D 利于未成熟胚愈伤组织的诱导。

2.2 不同胚龄对未成熟胚诱导再生的影响

将授粉后110 d、130 d 和150 d 的未成熟胚（图1）接种在同一种培养基上，不同胚龄对未成熟胚离体培养的影响见表2。结果表明：授粉后110 d 的未成熟胚能诱导产生愈伤组织，诱导率达到41.86%，但是再生成芽的数量相对较少；授粉后130 d 的未成熟胚能再生成芽，再生率最高，达到92.31%，其中有32 个外植体形成了丛生芽；授粉后150 s 的未成熟胚能分蘖成苗，但是由于成熟度相对较高，再生成苗的丛生苗数量少。

表1 不同激素及浓度配比对君子兰未成熟胚离体培养的影响Tab.1 Effects of different hormones and concentration ratio on in vitro culture of immature embryos of Kaffir lily

表2 君子兰未成熟胚不同胚龄对离体培养的影响Tab.2 Effects of immature embryo age on in vitro culture of Kaffir lily

3 结论

实验发现，未成熟胚在附加了2，4-D 的培养基上生成的愈伤组织诱导率高，而在附加了NAA 和BA 的培养基上更容易形成小苗及丛生芽。未成熟胚在未加2，4-D 的培养基上易于诱导出丛生芽，其中在MS+NAA 0.5 mg·L-1+BA 1 mg·L-1培养基中生成的丛生芽再生率达到86.05%，在附加了2，4-D 和BA 的培养基上生成淡黄色愈伤组织，其中在MS+2，4-D1 mg·L-1+BA 2 mg·L-1培养基中生成的愈伤组织诱导率最高，达到73.47%。

证实了未成熟胚的胚龄不同，愈伤组织的诱导情况不同。授粉后110 d的未成熟胚能诱导出愈伤组织，授粉后130 d 以上的未成熟胚直接诱导产生苗并形成丛生芽，授粉后150 d 的未成熟胚不能形成愈伤组织，而长成小苗。授粉后130 d 的未成熟胚再生率最高，达到92.31%。