苦杏仁药材及其饮片质量标准提高△

辛洁萍，王海丽，王敏，白玉莹，徐文娟，徐新房，魏锋，李向日*

1.北京中医药大学 中药学院/北京市中药品质评价重点实验室，北京 102488 2.中国食品药品检定研究院，北京 100050

苦杏仁为蔷薇科植物山杏PrunusarmeniacaL .var.ansuMaxim.、西伯利亚杏P.sibiricaL .、东北杏P.mandshurica(Maxim.) Koehne或杏P.armeniacaL .的干燥成熟种子。始载于《神农本草经》，汉代时出现燀制和炒制，而后逐渐出现了麸炒、药汁制和童便制等[1]，《中华人民共和国药典》(2015年版)(以下简称为《中国药典》)中收载了苦杏仁、燀苦杏仁和炒苦杏仁[2]。

《中国药典》是药品研制、生产、经营、使用和监督管理等均应遵循的法定依据，它的不断修订和完善对保证饮片质量，确保临床用药安全有效有重要的意义。随着研究的不断深入，《中国药典》中存在的不足之处也逐渐暴露。本课题组在研究的过程中发现苦杏仁的质量标准存在一些问题，虽然《中国药典》(2015年版)第一增补本中已对苦杏仁的【鉴别】项进行了完善和规范，但仍存在标准不完善以及含量限度不符合炮制特点的问题。

本研究对苦杏仁及其炮制品的显微鉴别、水分及含量测定进行研究，以期为苦杏仁的质量标准完善提供依据。

1 材料

1.1 仪器

高效液相色谱仪(Waters1525系统、Waters2487紫外检测器、Empower色谱工作站，美国Waters公司)；万分之一及十万分之一电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；FW100 高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)；电热鼓风干燥箱(DHG-9070A型，常州诺基仪器有限公司)；超声波清洗器(SB25-12DTDN型，宁波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 试药

苦杏仁苷对照品 (成都克洛玛生物科技有限公司，批号：CHB171011，纯度≥98%)；纯净水(娃哈哈)；乙腈、磷酸(色谱纯，美国Fisher公司)；甲醇、甲苯、氢氧化钾(分析纯，北京化工厂)。

苦杏仁、燀苦杏仁、炒苦杏仁从市场各收集20批，产地分布于河北、山东等地，编号SKR01～SKR20的样品为苦杏仁，编号DKXR01～DKXR20的样品为燀苦杏仁，编号CKXR01～CKXR20的样品为炒苦杏仁，经北京中医药大学李向日教授鉴定为正品，样品信息见表1。

表1 苦杏仁、燀苦杏仁、炒苦杏仁样品信息

续表1

2 方法与结果

2.1 显微鉴别

取苦杏仁样品于试管中，加入5%的氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压种皮离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取出至载玻片上，解剖针剥开种皮，并除去内种皮，取外种皮，以稀甘油装片观察，实验结果见图1。

注：A.类圆形；B.多边形。图1 苦杏仁(KXR05)外种皮细胞

2.2 水分

2.2.1水分测定方法的考察 为了确定挥发油性成分对水分测定是否有影响，本研究以炒苦杏仁为例，比较烘干法和甲苯法2种方法测定的水分结果，见表2。

表2 苦杏仁饮片烘干法与甲苯法水分测定结果 %

通过比较15批炒苦杏仁烘干法和甲苯法的水分测定结果，SAS进行数据分析，结果P<0.05，差异有统计学意义，说明苦杏仁中的挥发性成分对水分的测定有一定的影响，因此应采用甲苯法测定炒苦杏仁的水分，而炒苦杏仁是在燀苦杏仁的基础上进行炒的操作，挥发性成分损失最多，因此苦杏仁和燀苦杏仁也应采用甲苯法进行水分测定。

2.2.2水分测定 采用甲苯法分别对20批苦杏仁、燀苦杏仁和炒苦杏仁样品进行水分测定，测定结果见表3。

表3 苦杏仁饮片的水分 %

2.3 含量测定

采用《中国药典》2015年版中苦杏仁【含量测定】项下方法进行测定，各样品HPLC图见图2，测定结果见表4。

注：A. 苦杏仁苷；B. 苦杏仁；C. 燀苦杏仁；D. 炒苦杏仁。图2 苦杏仁各饮片的HPLC图

表4 苦杏仁各饮片中苦杏仁苷的质量分数%

3 结果与讨论

苦杏仁为止咳平喘的常用药，市场广泛流通，临床应用广，合理完善的质量标准对保证饮片的质量具有重要意义。

3.1 显微鉴别

《中国药典》2015年版中对于苦杏仁种皮外表皮细胞的表述为：种皮外表皮细胞浅橙黄色至棕黄色，常与种皮石细胞相连，类圆形，壁常皱缩。但市场反应苦杏仁的外种皮细胞除了类圆形的细胞外，还存在多边形的细胞。因此，对于苦杏仁外种皮细胞的形状需要进一步验证，以对苦杏仁的【鉴别】项进行完善。

采用水合氯醛装片，显微镜下观察苦杏仁外种皮，发现细胞重叠严重，分界不清晰。为清晰地观察到苦杏仁外种皮细胞的形状，本研究采用氢氧化钾解离组织装片法对苦杏仁样品进行显微观察。经解离剥去内种皮稀甘油装片后，显微镜下能清晰地观察到浅橙黄色、棕黄色的外种皮细胞，与石细胞相连，呈类圆形或多边形，细胞壁皱缩。因此，苦杏仁【鉴别】项对于苦杏仁外种皮细胞的表述需要进一步的完善，建议修改为：种皮外表皮细胞浅橙黄色至棕黄色，常与种皮石细胞相连，类圆形或多边形，壁常皱缩。

3.2 水分

苦杏仁为种子类药材，富含较多的油脂，易走油变质，水分的限定对保证苦杏仁饮片的质量有重要意义。《中国药典》2015年版中苦杏仁【检查】项下缺少对水分限制，对保障苦杏仁的质量存在一定问题，因此需要对“水分”项进行补充。烘干法是测定药材及饮片水分最常用的方法，适用于不含挥发性药材的水分测定，对于含挥发性成分的药材，常用甲苯法测定。研究发现，苦杏仁中含有挥发性成分，超声处理提取苦杏仁挥发油，收率最高可达4.62%[3]；微波照射-同时蒸馏萃取法提取苦杏仁挥发油，测得质量分数为4.5%，水蒸气蒸馏法测得挥发油的质量分数为1.15%[4]。因此挥发性成分的存在是否会对烘干法测定水分的结果产生影响需要进一步研究，本研究比较了烘干法和甲苯法测定水分，SAS对测定结果进行分析，结果P<0.05，差异有统计学意义，说明挥发性成分对水分的测定有一定影响，因此宜采用甲苯法进行水分测定。

通过对市售苦杏仁及其饮片的水分测定，苦杏仁的平均水分为3.6%，最高含水量为4.1%；燀苦杏仁的平均水分为3.5%，最高含水量为4.7%；炒苦杏仁的平均水分为3.2%，最高含水量为4.5%。参考《中国药典》2015年版项下籽仁类药材的水分限度标准，其中酸枣仁、核桃仁项下水分测定方法为《中国药典》2015年版四部通则0832第二法，限度分别为9.0%、7.0%，考虑到我国南北地域的差异，以及四季湿度的不同，因此建议将水分限度定为：苦杏仁不得超过7.0%(通则0832第四法)、燀苦杏仁不得超过7.0%(通则0832第四法)、炒苦杏仁不得超过6.0%(通则0832第四法)。

3.3 含量测定

苦杏仁的主要活性成分为苦杏仁苷，课题组前期研究发现，炒制可以促进L-苦杏仁苷向D-苦杏仁苷(以下简称“苦杏仁苷”)的转化，使苦杏仁苷含量显著增加[5]。而《中国药典》2015年版中对于苦杏仁的含量限度要求为：燀苦杏仁中苦杏仁苷含量不得少于2.4%，炒苦杏仁中苦杏仁苷的的含量不得少于2.1%[2]。炒苦杏仁中苦杏仁苷含量限度反而低于燀品，不符合炒苦杏仁的炮制原理。因此，炒苦杏仁的质量标准有待于规范。

所测20批市售燀苦杏仁样品中苦杏仁苷的平均质量分数为3.0%，炒苦杏仁的平均质量分数为3.4%，炒苦杏仁中苦杏仁苷较燀苦杏仁而言，平均含量较高。考虑到生产的实际情况，建议将炒苦杏仁的限度标准提高到与燀苦杏仁的一致，即炒苦杏仁中含苦杏仁苷(C20H27NO11)不得少于2.4%。

在对市售样品进行含量测定的过程中，发现有1批生苦杏仁和5批燀苦杏仁的苦杏仁苷含量不符合限度要求，生品不合格原因是样品中可见变质的种子和不成熟的果实；燀苦杏仁在于其燀制时间过长，苦杏仁苷溶解在水中，造成苦杏仁苷的流失，使其含量不达标。另外有1批炒苦杏仁样品的苦杏仁苷含量不符合新拟定的炒苦杏仁的苦杏仁苷含量限度标准，该批样品颜色较深、焦斑较多，分析其原因为炮制程度较深，造成成分分解，使得饮片质量下降。饮片的外观性状与其内在质量有一定关系，随着炮制程度的加深，饮片的外观性状发生了变化，其内在成分的含量也随之变化[6]。

本研究通过对苦杏仁及其饮片的显微鉴别、水分项以及苦杏仁苷含量的研究，分别对《中国药典》2015年版苦杏仁及其饮片的【鉴别】、【检查】和【含量测定】项的质量标准进行完善，为保证苦杏仁药材及其饮片的质量提供依据。