枸杞多糖对衰老小鼠皮肤组织总抗氧化能力及脂褐质的影响

王彩霞

【摘 要】 目的：观察枸杞多糖对D-半乳糖致小鼠衰老的影响。方法：将50只1月龄昆明种雌性小鼠随机分为空白对照组、模型组、枸杞多糖低、中、高剂量组，每组10只。除空白组外其余各组均每日注射D-半乳糖造成亚急性衰老模型，给药组同时给予不同剂量的枸杞多糖。6周后检测小鼠皮肤组织中总抗氧化能力（T-AOC）活性和脂褐质（LF）含量。结果：枸杞多糖可增强衰老模型小鼠皮肤组织T-AOC活性（P<0.05），降低LF含量（P<0.05）。结论：枸杞多糖可通过提高衰老皮肤抗氧化物酶活性，降低氧化产物含量，从而达到延缓衰老的作用。

【关键词】 枸杞多糖;皮肤衰老;小鼠;总抗氧化能力;脂褐质

【中图分类号】R229 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）6-0007-03

Abstract：Objective To observe the effect of Lycium barbarum polysaccharide on D-galactose induced aging in mice.Methods 50 health Kunming and female mice were randomly divided into 5 groups-blank group，model group， low dose group，middle dose group and high dose group.In addition to the blank group， daily giving subcutaneous injection of D-galactose into the neck at other groups to establish subacute senile model. At the same time，each experimental group were coated for different dose Lycium barbarum polysaccharide. After 6 weeks the activities of total ant-ioxidation capability （T-AOC） and the content of lipofuscin （LF） in the skin in all groups were tested.Results Lycium barbarum polysaccharide could remarkably enhance the activities of T-AOC（P<0.05） and decrease the content of LF in the Skin tissue of senile mice（P<0.05）.Conclusion Lycium barbarum polysaccharide can protect against aging skin through increasing antioxidant enzyme activity and decreasing oxidative product content.

Key words：Lycium barbarum polysaccharide; Skin aging; Mouse; Total ant-ioxidation capability; lipofuscin

枸杞屬茄科落叶灌木，是我国传统的“药食同源”中药材，含有多种营养成分和微量元素[1] 。《神农本草经》曾记载：“枸杞久服，坚筋骨，轻身不老[2]”。枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharde，LBP）是从枸杞中提取出来的一种多糖，是枸杞发挥药效的主要成分之一[1]，因其具有多种生物活性越来越受到人们的关注。研究表明，枸杞多糖具有降血脂、降血糖、调节免疫、抗肿瘤、抑制细胞凋亡及延缓衰老等广泛的药理学作用[3]。本研究观察衰老模型小鼠皮肤组织中T-AOC活性和LF含量，从而探究枸杞多糖对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠皮肤衰老程度的影响。

1 仪器与材料

1.1 动物 KM 小鼠50只，雌性，体重（20±2）g，级别：SPF。实验动物均购自宁夏医科大学实验动物中心，分笼饲养，自由饮食，规律光照，无不良影响因素，适应性饲养1周后开始实验。

1.2 材料 D-半乳糖（银川祺宝生物有限公司），枸杞多糖（银川市农科院提供），总抗氧化能力（T-AOC）、脂褐质（LF）试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

1.3 仪器 ELx808全自动酶标仪（美国佰腾），DY89-Ⅱ电动玻璃匀浆机（上海将来实验设备有限公司），TDL-5-A型离心机（上海安亭科学仪器厂），测定仪器为722分光光度计（上海第三分析仪器厂），DK-420S型三用恒温水箱（上海精宏实验设备有限公司），BLG10电子秤（上海精科天美科学仪器有限公司）。

2 方法

2.1 动物分组、造模及给药 50只小鼠随机分为5组：空白对照组、模型组、枸杞多糖低、中、高剂量组，每组10只。模型组及给药组每日颈背部皮下注射D-半乳糖（1000mg/kg），建立亚急性衰老模型。空白对照组颈背部皮下注射等量生理盐水。低、中、高剂量组在注射 D-半乳糖的同时灌服枸杞多糖5mg/kg/d、10mg/kg/d、20mg/kg/d，给药容积20mL/kg。模型组、正常组灌服等量生理盐水。以上操作1次/d，连续42d。

2.2 取材及指标检测 连续给药42d后，小鼠断颈处死，速取小鼠背部两肩胛部之间脱毛区域的皮肤，面积为3cm×3cm，并迅速将取下的皮肤冰冻保存，待用。取脱毛后背部皮肤组织块0.5g左右，量筒量取该组织块9倍重量的预冷生理盐水匀浆，浆液以3500r/min的速度离心20min，取其上清液分别按照试剂盒说明书测定小鼠总抗氧化能力（T-AOC）及脂褐质（LF）含量。

2.3 统计学处理 实验数据用SPSS13.0统计软件进行处理，各组实验参数以表示，组间比较按方差分析进行显著性检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

3 结果

与空白对照组比较，模型组小鼠皮肤组织T-AOC活性明显降低（P<0.01），LF含量明显升高（P<0.01）。相对于模型组，枸杞多糖低、中、高剂量组小鼠皮肤T-AOC活性均显著升高（P<0.05，P<0.05，P<0.01），LF含量明显降低（P<0.05，P<0.01，P<0.01）。表明枸杞多糖低、中、高剂量均能提高衰老模型组小鼠皮肤组织T-AOC活性，降低LF含量。详见表1。

4 讨论

衰老是生命过程中正常而又复杂的生理现象，皮膚作为人体最大的器官，其衰老是人类生命历程中不可抗拒的规律[4]。皮肤老化分为时呈老化与光老化，前者是内源性因素所致，是衰老的根本，受遗传、内分泌等生理进化因素影响;后者是外源性因素所致，是皮肤衰老的重要影响条件，受紫外线、季节、生活压力、生活习惯、疾病等影响。皮肤衰老是内源性因素与外源性因素共同作用的结果。其显著特征是皮肤出现松弛及皱纹，暴露处皮肤粗糙、弹性降低、血管扩张、色素沉着、表皮角化不良等[5]。

现代医学对衰老的解释有不同学说，其中较为公认并得到广泛认可的是自由基学说，它认为皮肤衰老是自由基产生和消除发生障碍的结果。机体每天代谢时产生的自由基在正常情况下可被清除，但随着年龄的增长，氧自由基加速形成。自由基形成后，不断攻击细胞膜中的不饱和脂肪酸，形成过氧化脂质（Lipide Peroxide，LPO），后者则与膜脂、膜蛋白聚合，交联形成脂褐质（LF）并沉积于组织中，造成细胞功能障碍，加速细胞衰老[7]。因此，LF含量的高低间接反应了机体细胞受自由基损伤的严重程度。健康生物体内有抗氧化的酶系统和非酶系统，其中酶系统包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）等，非酶系统有VitE，生育酚，β胡萝卜素，谷胱甘肽，白蛋白等，这些物质均可及时处理氧自由基。因此，抗氧化力的测定引起人们的广泛关注。而总抗氧化能力（T-AOC）是一个全面反映皮肤组织抗氧化能力的良好指标，它的活力高低可全面反映皮肤组织中酶与非酶全部的抗氧化物。

研究结果显示，模型组小鼠皮肤细胞损伤，代谢紊乱，皮肤T-AOC活性明显降低，LF含量显著升高。枸杞多糖低、中、高剂量均可明显提高D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠皮肤组织T-AOC活性，降低皮肤组织LF含量，提示枸杞多糖能从一定程度上提高抗氧化能力，清除体内自由基，减轻或抑制脂质过氧化损伤，从而起到延缓衰老的作用。

参考文献

[1]苗婷婷，严青，王君洁，等.枸杞多糖抗衰老研究进展[J].亚太传统医药，2019，15（6）：178.

[2]郑棋月，任建武.枸杞多糖延缓衰老的研究进展[J].中国园艺文摘，2014，12：48.

[3]汪建龙.枸杞多糖药理作用的研究进展[J].时珍国医国药，2005，16（10）：1032.

[4]王明军，谭敏谊，刘洋，等.养颜驻颜口服液改善皮肤衰老的作用研究[J].中药材，2017，40（3）：716.

[5]朱华伟，葛亚中，汪晓凌，等.复方美姿力口服液对D-半乳糖联合紫外线照射致皮肤衰老裸鼠模型的影响[J].中药材，2019，42（3）：667.

[6]孙程，王冬东，张辉靠，等.茶树提取物经皮给药对衰老小鼠皮肤的影响[J].中成药，2017，39（8）：1693.

[7]敖拉哈.衰老与自由基[J].老年医学与保健，1999，5（2）：112.

（收稿日期：2019-12-09 编辑：刘斌）