不同月份晋北地区沙棘叶总黄酮含量比较分析

刘 荣,翟贵喜,贾艳红

(1.山西省岢岚县王家岔乡综合服务中心，山西 岢岚 036300；2.山西山阳生物药业有限公司，山西 岢岚 036300；3.山西省岢岚县林业局，山西 岢岚 036300)

沙棘(HippophaerhamnoidesL.)胡颓子科沙棘属植物，又名醋溜、酸刺，在西藏被称作“达日布”。在我国主要分布于西北、华北、东北及西南等地区，是我国三北防护林的先锋树种，属药食同源植物。沙棘富含多酚类化合物、维生素、脂类化合物、萜类、甾体类化合物、多糖类化合物、蛋白质、多肽、氨基酸类化合物等活性成分。而多酚类化合物中，又以黄酮类化合物为主，主要成分是山奈酚、槲皮素、异鼠李素和杨梅素4种苷元及其苷类。研究表明，沙棘黄酮的药理作用包括抗血栓形成、降血脂、抗动脉粥样硬化、降血压、降血糖、增强免疫功能、抗肿瘤、抗菌、抗辐射等。沙棘黄酮广泛存在于沙棘的果实、籽和沙棘叶中，特别是沙棘叶中黄酮类远大于其它部位。山西是我国沙棘资源最丰富的省区之一，野生沙棘林总面积40×104km2以上，以晋北沙棘为主。笔者对不同月份晋北沙棘叶总黄酮含量进行了比较分析，以期为深入研究及科学有效利用沙棘资源提供参考依据。

1 材料与仪器

1.1 试验材料

2019年5月至9月在山西省忻州市岢岚县神堂坪乡野生沙棘林采集沙棘叶，共采8批(5月中旬、5月下旬、6月中旬、6月下旬、7月中旬、7月下旬、8月中旬、9月中旬)。70 ℃干燥后粉碎过40目筛置于干燥器中备用。

芦丁标准品购自中国食品药品检定研究院(批号100080-201610)。

无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂购自国药集团化学试剂有限公司，均为分析纯，实验用水为超纯水。

1.2 试验仪器

723N可见分光光度计，上海佑科仪器仪表有限公司；FA1004N电子分析天平，上海箐海仪器有限公司；WP-UP-LH-10型实验室超纯水机，四川沃特尔水处理设备有限公司；HWS-24电热恒温水浴锅，上海齐欣科学仪器有限公司；恒温鼓风干燥箱，上海琅玕实验设备有限公司；还有粉碎机、干燥器、容量瓶(50 mL，10 mL)、锥形瓶、移液管、比色管(10 mL，25 mL)、烧杯、玻璃棒等。

2 试验方法

2.1 标准曲线

准确称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准品40 mg，用70%乙醇溶解并定容至100 mL，制得储备液，浓度为0.4 mg/mL.分别吸取0.0 mL,0.2 mL,0.4 mL,0.6 mL,0.8 mL,1.0 mL,1.2 mL,1.4 mL标准品于10 mL比色管中，加5%亚硝酸钠1.0 mL，混匀放置6 min.加入10%硝酸铝1.0 mL，混匀放置6 min.加入4%氢氧化钠4 mL，再加入70%乙醇水溶液定容至刻度，摇匀，放置15 min.以相应的试剂为空白对照，在确定最大波长510 nm处测定不同浓度标准品的吸光值(亚硝酸钠-硝酸铝比色法)。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制芦丁标准曲线。

2.2 样品处理

分别取8份干燥粉碎后的沙棘叶粉各10.000 g于8个250 mL具塞锥形瓶中，瓶子编号1～8.加入95%乙醇150 mL，在70 ℃水浴中加热提取45 min，冷却至室温，过滤，锥形瓶、滤渣以及滤纸用少量95%的乙醇洗涤至滤液无色。最后用95%的乙醇定容到100 mL容量瓶中，再取5 mL定容到50 mL容量瓶中，作为供试品溶液。

2.3 样品测定

取供试品溶液3 mL于25 mL比色管中，分别加5%亚硝酸钠1.0 mL，混匀放置6 min.加入10%硝酸铝1.0 mL，混匀放置6 min.再加入4%氢氧化钠4 mL，70%乙醇水溶液定容至刻度，摇匀，放置15 min,在510 nm下测定吸光度。对照标准曲线公式分别计算出各供试品溶液的浓度，每个样品重复测定3次。

式中：ω——总黄酮含量，%；

c——样液中总黄酮浓度，mg/mL；

V——样液体积，mL；

n——稀释倍数;

m——沙棘叶粉质量，g.

3 结果与分析

3.1 标准曲线的制作

测定芦丁标准溶液的吸光度值，结果见表1.根据表1绘制标准曲线，见图1.

由图1可知，芦丁在0.008 mg/mL～0.056 mg/mL浓度范围内呈良好线性关系。标准曲线的回归方程为y=10.146 0x+0.007 9(R2=0.999 2).

表1 芦丁浓度与吸光度关系

图1 芦丁标准曲线

3.2 不同采摘期沙棘叶总黄酮含量比较

不同采摘期沙棘叶总黄酮含量测定结果，见第28页表2.并对测定结果进行比较，见图2.

图2 不同时期沙棘叶总黄酮含量变化

表2 不同采摘期沙棘叶总黄酮含量测定

从表2和图2可知，晋北沙棘在不同月份沙棘叶总黄酮含量有明显差异。5月中下旬到6月中旬呈现增长趋势，6月下旬略有下降，7月下旬开始骤降，9月中旬达到最低。结合植物生长环境条件变化分析，总黄酮是植物生长代谢过程中的代谢产物，受外界环境光照、水分等影响，以及内部植物发育阶段酶的调节和遗传机制的控制，不同发育阶段总黄酮含量不同。5月份是沙棘叶生长旺盛阶段，总黄酮含量增长迅速。6月中旬沙棘叶初步长成，总黄酮合成量达到最高，之后生长发育慢慢变缓，总黄酮含量开始下降。到9月份时生长发育基本停止，总黄酮合成量达到最低。

4 结论

笔者以岢岚县沙棘叶为试材，对不同月份以及旬期的沙棘叶总黄酮含量做了测定及对比分析，发现晋北沙棘叶总黄酮含量在6月中旬最高。考虑6月下旬沙棘叶已基本生长成型，不影响后期沙棘果结果。因此，建议想要充分利用沙棘叶资源，采摘期最好选在6月中下旬。