不同提取方法对益气复脉胶囊中五味子醇甲和五味子乙素含量的影响

王立鹏

摘要：目的 考察不同溶媒对益气复脉胶囊中五味子醇甲和五味子乙素含量的影响。方法 用水提-乙醚萃取、乙酸乙酯超声、甲醇超声提取。结果  五味子醇甲在0.2084µg～2.084µg范围内峰面积值与进样量呈良好的线性关系（r=0.9998）其平均回收率为100.24%，RSD为0.91%;五味子乙素在0.1996µg～1.996µg范围内峰面积值与进样量呈良好的线性关系（r=0.9997）其平均回收率为99.77%，RSD为0.69%。结论 其中用甲醇超声提取效率最高，该方法简便、准确，分离效果好。

关键词：益气复脉胶囊;五味子醇甲;五味子乙素;HPLC

益气复脉胶囊由红参、麦冬、北五味子等药味加工而成。具有益气复脉、养阴生津;改善冠状动脉循环、降低心肌耗氧量之功效。用于气阴两亏，心悸气短，脉微自汗，冠心病、心绞痛和衰老等症[1]。北五味子具收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效[2]，采用不同提取溶媒，用HPLC法测定益气复脉胶囊中五味子醇甲和五味子乙素的含量。

一、 仪器与试药

（一）仪器

高效液相色谱仪LC-20AT，SPD-20A紫外检测器;电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司，型号BS224S，d=0.1mg）微量分析天平（湘仪天平仪器厂，型号TG332A，d=0.01mg）

（二）试药

五味子醇甲對照品（110857-200709）、五味子乙素对照品（110765-200804）均由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用;甲醇为色谱纯（SIGMA公司）;其余试剂为分析纯，水为超纯水;益气复脉胶囊为安康正大制药有限责任公司生产（批号 20130104，20130306，20130512）

二、 方法与结果

（一）色谱条件

色谱柱： Inertsil ODS-SP（4.6x150mm，5µm），柱温： 30℃，流动相：甲醇-水（63：37），流速：1.0mL.min-1，检测波长：254nm。精密吸取对照品溶液、供试品溶液10µL注入色谱仪。理论板数按五味子醇甲峰计，不得低于3000。图谱如下：

（二）对照品溶液的制备

分别精密称取五味子醇甲和五味子乙素对照品适量，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1mL含五味子醇甲20.84µg，含五味子乙素19.96µg的混合对照品液。

（三） 供试品溶液的制备

1.提取溶剂及提取方法的考察  分别用乙酸乙酯加热回流1h、乙酸乙酯超声处理30min、乙醚超声处理30min及甲醇超声处理30min，结果发现甲醇超声提取最为完全，故选择甲醇作为提取溶剂。

2. 制备方法   取本品20粒，倾出内容物，称取约0.75g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，超声处理30min，滤过，取续滤液，微孔滤膜滤过，即得。

（四） 线性关系的考察

精密称取五味子醇甲对照品10.42mg、五味子乙素对照品9.98mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取2、4、6、8、10和20µL，在上述色谱条件下测得峰面积。以浓度为横坐标（X）以峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，并对测得数据进行回归分析，得回归方程：五味子乙素  Y=266091.7X+1469.1，r=0.9997。结果表明五味子乙素在0.1996～1.996µg范围内呈良好的线性关系。五味子醇甲 Y=110171.6X+77.33，r=0.9998。结果表明五味子醇甲在0.2084～2.084µg范围内呈良好的线性关系。

（五）精密度试验

精密吸取同一混合对照品溶液10µL，连续进样6次，分别以五味子醇甲和五味子乙素峰面积计算，RSD分别为0.51%和0.78%。

（六） 稳定性试验

取供试品溶液分别在0、4、8、12、16、20、24h进样，五味子醇甲和五味子乙素峰面积RSD分别为0.21%和0.46%，表明样品在24h内稳定。

（七）加样回收率试验

取已知含量的益气复脉胶囊样品（20130104），研细，精密称取约0.38g，平行称样6份，分别精密加入五味子醇甲和五味子乙素混合对照品溶液适量，精密加入甲醇适量，使加入液体总量为20mL，超声处理30min，滤过，取续滤液，微孔滤膜滤过，即得。按供试品溶液方法进样，测定含量，计算回收率。

（八） 样品测定

取益气复脉胶囊3批（批号 20130104，20130308，20130612），按2.3项下方法处理，进样测定，结果见表3。根据测定结果，暂定其每粒含五味子醇甲及五味子乙素分别不得低于0.3mg和0.04mg。

三、讨论

原质量标准为水溶解后取续滤液，用乙醚萃取5次，萃取液用水洗涤2次，水洗液再用乙醚萃取1次，挥干乙醚液，60～80℃减压干燥，残渣加甲醇溶解并转移定容至10mL量瓶。该方法操作步骤多，易造成目标成分损失，故在制备供试品溶液时，我们对提取方法及提取溶媒分别进行了考察，分别对乙酸乙酯回流1h，甲醇超声30min，乙酸乙酯超声30min，乙醚超声30min进行了对比。结果表明：甲醇超声30min提取率较高，五味子醇甲及五味子乙素的提取率比其他提取方法分别高30%和100%以上。且有较好的分离度;乙醚超声提取30min次之;乙酸乙酯回流1h和乙酸乙酯超声30min提取率较低，而且二者结果接近，故选择甲醇超声30min的提取方法最为合理。

参考文献：

[1]《国家药品监督管理局 药品标准 新药转正标准》[S].第18册.194-195

[2]中国药典2010年版一部[S].一部.2010：61-62