对比实时荧光定量PCR检测TB-DNA与痰涂片在肺结核诊断中的应用

姜赵华 肖勇武

【摘要】目的：对比实时荧光定量PCR检测TB-DNA与痰涂片在肺结核诊断中的应用。方法：选择我院2016年10月-2019年10月敦煌市医院收治的6230例门诊和住院拟行肺结核筛查的患者为研究对象，均采用TB-DNA与痰涂片两种方式检测，其中TB-DNA运用实时荧光定量PCR检测技术，应用金标准对两种检查技术的准确性加以评价。结果：纳入本次研究的6230例肺结核筛查者采用金标准共检出455例，占比7.30%，TB-DNA检出437例，灵敏度为96.04%，特异度为99.68%;痰涂片检出382例，灵敏度为83.95%，特异度为98.75%，TB-DNA检出率、灵敏度、特异度均较痰涂片检测显著提高（P<0.05）。结论：肺结核采用TB-DNA实时荧光定量PCR检测诊断具有较高的诊断准确性，其敏感性较痰涂片方法显著增加，有助于早期诊断肺结核，减少漏诊率，值得推广。

【关键词】实时荧光定量PCR检测;TB-DNA;痰涂片;肺结核

[中图分类号]R521;R440   [文献标识码]A   [文章编号]2096-5249（2020）15-0-02

胸部X线、CT等影像学检查为肺结核早期诊断最常见的检查方式，但临床进一步确诊还需结合实验室检查结果，并根据信息综合评估[1]。以往临床多采用痰液培养检查，至痰抗酸杆菌或抗酸杆菌培养呈阳性便可确诊，但鉴于部分患者临床症状不明显，胸部影像学也不典型的特点，结核杆菌常发生某些生物学特性的变异，常规予以痰涂片检查或痰液培养，结核杆菌往往不能完全检出[2-3]。此外，痰液中含菌量较少时，或者肺部病灶呈局灶性改变等因素影响下，单独痰液涂片病原菌的检出率不高，临床对高灵敏度检测方式需求迫切。本文进一步分析了TB-DNA实时荧光定量PCR检测在肺结核疾病诊断中的应用价值，以为临床诊断肺结核提供更为可靠的参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择我院2016年10月～2019年10月敦煌市医院收治的6230例门诊和住院拟行肺结核筛查的患者为研究对象，其中男3120例，女3110，年龄28～64岁，平均年龄（47.64±2.51）岁，所有患者均应用痰涂片与TB-DNA实时荧光定量PCR检测两种方式实施检测，同时与检测金标准进行比对，分析检测一致性，同时探究两种检测方式的灵敏性以及特异性。

1.2仪器与方法 （1）仪器与试剂：本次研究所应用仪器为全自动医用pcr分析仪（SLAN-96P），所应用试剂为由圣湘生物公司提供的结核分枝杆菌核酸检验试剂盒，采取的方法为pcr荧光探针法。（2）TB-DNA实时荧光定量PCR检测方法如下：采集患者清晨痰液，将5ul处理好的痰样本、阴性对照、阳性对照、阳性参考品和40ul的PCR-mix至PCR反应管中，然后应用SLAN-96P予以DNA扩增。特异性与敏感性采用如下标准予以评价，总结荧光定量PCR扩增后的曲线的规则性，如曲线呈对数方式增长，Ct值≤39，且内标检测为阳性，结果判定为阳性，Ct值>40或CT值无显示，且内标检测为阳性，结果判定为阴性，此外，CT值介于39-40之间，且扩增曲线以对数方式增长，则需要对样本进行重复测定，如仍显示Ct值介于39～40之间，则结果判定为阴性。（3）痰涂片检测方法如下：指导患者收集清晨痰液，常规方法涂片后予以抗酸抗菌染色，并于显微镜高倍镜下观察菌落，100倍高倍镜视野下发现菌落为3个或以上，则检测结果为阳性，否则为阴性。

1.3统计学分析 采用SPSS 24.0统计学软件处理数据，计数资料用（n，%）表示，χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

纳入本次研究的6230例肺结核筛查者采用金标准共检出455例，占比7.30%，TB-DNA检出437例，灵敏度为96.04%，特异度为99.68%;痰涂片检出382例，灵敏度为83.95%，特异度为98.75%，TB-DNA检出率、灵敏度、特异度均较痰涂片检测显著提高（P<0.05）。见表1.

3 讨论

肺结核在我国的发病率呈现逐年增加态势，早期诊断有助于尽早制定联合用药方案，对于改善肺结核患者预后具有一定价值[4]。目前临床用于诊断肺结核的方法较为多样，但早期筛查与诊断的精准性仍是临床关注的重要课题。以往临床多采取痰涂片檢测法，在肺结核诊断中，发挥了一定的价值，具有操作简单，出具结果迅速等优势，但该检测存在一定的主观性，且对涂片、染色等步骤的要求较高，操作不规范，则会导致误差出现，进而影响检测的准确性。培养皿为痰培养的主要培养器材，致病菌菌落的培养成为了临床诊断的金标准，但在实际运用中发现，菌群培养的周期较长，且对于肺部以外其他器官的检测过程繁琐[5-6]。通过实践应用发现，TB-DNA实时荧光定量PCR检测在结核病的诊断中获得了良好收效，通过荧光化学物质对PCR循环产物的检测，能够有效定量分析样品中某种特定DNA的序列，大大提高了PCR的敏感性与特异性。本次研究结果提示TB-DNA运用实时荧光定量PCR技术检测的灵敏度与特异度均处于较高水平。值得注意的是，该方法虽然提高了检测的准确性，但仍有一定的漏诊几率，因此，尚不能将其作为肺结核明确诊断指标，但该检测手段对于早期筛查与预防指导，仍具有较高价值。

综上，肺结核采用TB-DNA实时荧光定量PCR检测诊断具有较高的诊断准确性，其敏感性较痰涂片方法显著增加，有助于早期诊断肺结核，减少漏诊率，值得推广。

参考文献

[1] 张梅. 痰涂片和TB-DNA及血清抗PPD-IgG在肺结核感染诊断中的联合应用[J]. 国际检验医学杂志， 2016， 37（4）： 504-505

[2] 陈蕾， 王凤平， 徐俊驰， 等. 非结核分枝杆菌病实验室诊断方法分析及临床应用[J]. 中国实验诊断学， 2019， 23（6）： 935-939.

[3] 李苏梅， 包紫薇， 唐佩军， 等. 荧光定量PCR对痰涂片阴性肺结核的临床诊断价值[J]. 临床肺科杂志， 2018， 23（6）： 977-979.

[4] 郭俊红， 武春燕， 董正伟， 等. CT引导下肺穿刺活检标本行PCR检测诊断肺结核的临床价值[J]. 中国防痨杂志， 2018， 40（11）： 1159-1163.

[5] 宁静， 于莉， 陈军. TB-IGRA定量试验诊断肺结核感染的临床应用分析[J]. 军事医学， 2017， 41（1）： 77-78.

[6] 高丽， 代佳伟， 谢祺， 等. 结核感染T细胞斑点试验在结核病诊断中的应用评价[J]. 国际流行病学传染病学杂志， 2018， 45（2）： 108-111.