突托蜡梅活性成分研究

李余先

突托蜡梅Chimonanthusgrammatus   M.  C.  Liu，为赣南地区特有民间药用植物，仅分布于江西省安远县部分乡镇[1]，民间用于防治感冒和流行性感冒，在赣南客家人群中发挥着重要的药用价值。当地养殖户时常在鱼塘中投放突托蜡梅叶用以防治鱼病发生，亦取得了良好效果，上述应用提示突托蜡梅叶中具有抑菌抗病的活性物质。汪涯[2]等已从突托腊梅叶中分离、鉴定四种具有抑菌活性的化合物。本研究近一步对其抗菌活性成分开展探究，为突托蜡梅产品开发提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

植物材料采自江西省安远县，经吉林农业科技学院张忠宝教授鉴定为突托蜡梅，大肠杆菌（Escherichia  coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus  aureus）为本实验室保存提供。柱色谱硅胶（200～300目，青岛海洋化工厂）TLC薄层板（青岛海洋化工厂）;Sephadex LH-20（Pharmacia  公司），其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器设备

Eyela旋转蒸发仪;高分辨质谱仪（MicrOTOF，瑞士Bruker公司）;BP211D电子天平（Sartorouius  公司）;YOKO-CS薄层色谱紫外检测器（武汉药科新技术公司，中国）。

1.3 方法

1.3.1 成分提取分离鉴定

取干燥的突托蜡梅叶粉碎（6.0kg），80%乙醇回流反复提取3次，乙醇用量20L/每次，合并提取液，减压浓缩得浸膏。加以水混悬浸膏，石油醚、乙酸乙酯依次萃取，石油醚萃取部位（71g）经正相硅胶柱色谱分离，石油醚-丙酮（100∶1-0∶1）梯度洗脱，TCL跟踪检测，合并后得8个组分Fr  A-H.  FrB经反相硅胶C8柱色谱，甲醇-水（30∶7-100∶0）梯度洗脱，TLC分析合并得5个组分（FrB1-FrB5），FrB4经过Sephadex  LH-20葡聚糖凝胶柱色谱，氯仿-甲醇（1∶1）洗脱，TLC分析合并等3个组分（FrB4-1-FrB4-3）。FrB4-2经HPLC（乙腈-水，洗脱）制备纯化得到化合物1（6.0mg），2（10.0mg），3（15mg）。NMR确定化合物3化学结构。

1.3.2 抑菌活性测定

MIC指标测定参考张凤梅[3]微量肉汤稀释法改进如下：制备浓度为10mg/mL化合物3抗菌液，-20℃贮存备用。挑取MH（A）培养基上过夜培养的单菌落置于MH培养基中，1.0麦氏比浊标准校准，1∶3稀释到108CFU/mL，再1∶100稀释为1×106  CFU/mL。将浓度为10mg/mL的抗菌药液稀释，取200uL置于无菌96孔板的第一孔内，第二孔至第六孔依次加入100uL  MH肉汤培养基，从第一孔移取100uL溶液加入第二孔，混匀，以此类推，第六孔稀释后弃去100uL。此时各孔药物浓度依次为10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL、0.3125mg/mL，第七孔加入阳性对照菌液，第八孔加入阴性对照培养基。

2 结果

化合物3黄色粉末。ESI-MS  m/z  345[M+H]+。1  H-NMR（CDCl3，500  MHz）δ：7.72（1H，d，J=8.5  Hz，H-6′），7.69（1H，s，H-2′），6.97（1H，d，J=8.5  Hz，H-5′），6.45（1H，br  s，H-8），6.36（1H，br  s，H-6），3.99（3H，s，-OMe），3.88（3H，s，-OMe），3.87 （3H，s，-OMe）。以上数据与文献 [4]报道一致，故鉴定其结构为 7，3'，4'-三甲氧基槲皮素，见图1。

MIC结果显示7，3’，4’-三甲氧基槲皮素对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度MIC一致，说明其对上述两种菌抑制强度无显著差异。

3 讨论

本研究从突托蜡梅叶的石油醚提取部位分离得到3个化合物，鉴定1个化合物，数据与文献对比确定为7，3’，4’-三甲氧基槲皮素。抑菌活性结果显示，该化合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较好的抑制作用，这与突托蜡梅的民间应用相符，为突托蜡梅的产品开发提供了实验参考。

參考文献

[1] 彭九生，肖忠优，刘光正，等.突托蜡梅生物学特性与种群分布初步 研究[J].江西林业科技，2002（1）：1-4.

[2] 汪涯，王凌云，邹峥嵘，等.突托蜡梅叶化学成分及其抑菌活性[J]. 食品科学，2013，34（19）.

[3] 张凤梅.一种晾晒烟及两种烟草添加机植物的植物化学成分与活性研究[D].云南大学，2018，12.

[4] 骆丽萍，成凡钦，季龙，等.毛酸浆的化学成分研究[J].中国中药杂志，2015，44（22）：4424.