不同培养基配方对云芝生长状态影响的研究

云芝（Coriolus versicolor）状似云彩状，故名云芝。云芝有具有较强的保健治病作用，如能够抑制肝炎病毒的生长、加速受损肝组织的修复、抗氧化、提高机体免疫功能、抑制某些肿瘤细胞的生长等。对云芝的药理学研究表明：云芝提取物能提高 免疫细胞如NK 细胞、T 细胞、巨噬细胞、 LAK 细胞等杀伤病源微生物的能力，降低肿瘤细胞对免疫细胞的抑制作用。云芝在机体抗辐射能力和降低有害化学物对机体上损害方面也发挥了显著的作用，它减轻放射性射线对骨髓的伤害，减轻肿瘤化疗药物环磷酰胺对机体的伤害程度，通过抑制肿瘤细胞 DNA和RNA 的合成实现抑制肿瘤生长的作用。目前云芝被广泛用于临床，如云芝肝泰等，因此大规模开发云芝能够为一些以云芝作为原料的药物和保健品提供原料。而云芝的生长常受各种条件的制约，因此本文通过制备出含有不同配比的花生和大豆的4种培养基，通过观察云芝在4种不同培养基上的生长状态，分别对云芝的生长状态和生物量进行观察和测定，综合以上研究结果，最终确定适合云芝生长的培养基配方。

本研究从实际应用的角度，通过对云芝的生长状态和生物量进行观察和测定，，对云芝的培养基进行了研究，通过本研究，以期为云芝的液体深层发酵培养提供有价值的参考。

实验方法

实验材料。云芝够自于吉林农业大学菌物研究所

实验试剂。YPG培养基：胰蛋白胨 10 g/L，酵母提取物 5 g/L，葡萄糖 20 g/L（或麦芽糖15g/L），MgSO4 0.5 g/L，KH2PO4 1g/L。配制固体培养基时加琼脂粉15 g/L。110℃ 高压灭菌30min。

实验方法。

（1）云芝菌丝体的活化。在无菌条件下，用接种针挑取一小块菌丝体在超净工作台中接种于固体YPG培养基中，在26℃培养箱中培养5-7天，挑选出长势良好无污染的菌丝体作为初级菌种，活化后作为次级菌种保存于4℃冰箱中备用。

（2）配置不同成分配比的花生和大豆培养基

按如上配方配置好不同配比的花生和大豆液体培养基，分装，每瓶装250ml，110℃ 高压灭菌30min。

（3）云芝菌丝体在不同配比花生和大豆液体培养基中摇瓶培养。取上述配置好的4种培养基。将镊子灭菌后，取出菌丝体小块加入到不同成分配比的六种花生液体培养基和大豆液体培养基中，（每瓶加3-4块菌丝体小块）。将上述接种后的含有云芝菌丝体的花生和大豆液体培养基放置于26℃摇床中， 140rpm振荡培养5-7天。

（4）云芝菌丝体在4种不同成分配比的液体培养基中鲜重和干重的测定。分别取出4瓶菌丝体发酵液， -4℃，12000rpm离心20mim，弃上清，沉淀为发酵菌体。将菌体用蒸馏水冲洗3-5次，再用洁净的滤纸吸干多余水分。分别称取每瓶发酵液菌丝体的总重，求出每种菌种在每一配比的培养基中培养出菌丝体的重量平均值，记为平均鲜重；将上述菌丝体放置于恒温干燥烘干箱（65℃）进行烘干处理，测出烘干恒重时的重量，求出每种菌种在每一配比的培养基中培养出菌丝体的干重平均值，记为平均干重。

结果与分析

云芝在不同配比培养基中生长状态的观察。我们采取相同的培养条件，对云芝菌丝体在花生和大豆固体培养基中的生长状态进行了观察，发现云芝在大豆2号和花生2号培养基中的生长优于在1号培养基中生长状态，（结果如图1所示）；因此我们选择了2号培养基继续进行液体培养，通过比对可以看出云芝菌丝体在大豆液体培养基中生长状态明显优于花生液体培养基中生长状态。（结果如图2所示）

云芝在不同配比培养基中生物量的测定。我们选取了等量的不同配比的培养基对云芝菌丝体进行培养，我们发现固体培养基的平板培养后的云芝菌丝体的生长比摇瓶培养的生长要好；不同配比的大豆粉和花生粉的培养基中，云芝菌丝体鲜重明显不同，含大豆粉的培养基得到的菌丝体的鲜重均较高，而且2号培养基获得的云芝菌丝体的鲜重比1号培养基要高。平板培养获得的云芝菌丝体的鲜重结果为：大豆一号培养基约为208.67g/L，大豆二号培养基约为272.68g/L，花生一号约为180.88g/L，花生二号约为213.45g/L；摇瓶培养获得的云芝菌丝体的鲜重结果为：大豆一号培养基约为101.36g/L，大豆二号培养基约为138.65g/L，花生一号约为98.02g/L，，花生二号约为117.25g/L（结果如图3所示 ）。

实验结论

培养基的成分对于菌体的生长状态和生物量均会产生一定的影响，本研究通过加入不同量的大豆粉和花生粉来改变培养基的配方，我们的结果表明：培养基中的氮源配比不同对云芝的生长状态和生物量均产生了一定的影响，固体培养时得出结论为云芝在大豆2号和花生2号培养基中的生长优于在1号培养基中生长状态，对选择2号培养基的液体培养，结果表明云芝菌丝体在大豆液体培养基中生长状态要优于花生液体培养基中的生长状态。进一步的生物量测定表明：不同配比的大豆粉和花生粉的培养基中，云芝菌丝体鲜重明显不同，含大豆粉的培养基得到的菌丝体的鲜重均较高，而且2号培养基获得的云芝菌丝体的鲜重比1号培养基要高。

作者简介：宋笛（1982—），女，长春职业技术学院食品生物技术分院讲师，硕士研究生，主要研究方向为植物生物技术。