结核感染T细胞实验在尘肺结核病临床快速诊断中价值分析

庞 菁，李 翔

（1.湖南师范大学医学院，长沙 410006；2.湖南省胸科医院，长沙 410013）

尘肺病是由于在职业活动中长期吸入生产性粉尘并在肺内潴留引起的以肺组织弥漫性纤维化为主的全身性疾病，肺结核为其最重要的并发症和主要的死因之一。据全国流调提示：尘肺人群结核合并率要远高于同年代的全国肺结核患病率的水平，最高为41倍，最低为4.6倍［1］。临床上把这两种病变复合共存的的特殊类型单列为尘肺结核［2］。由于尘肺结核是粉尘与结核菌协同作用引起的组织反应，病理基础复杂，在影像学上及临床表现上，改变了尘肺与肺结核两个病各自原有的特征，这给临床的早期诊断带来了很大的困难。本研究通过对155例尘肺结核患者和70例单纯尘肺患者分别进行结核感染T细胞实验（T-SPOT.TB）、结核抗体（TBAb）、结核菌素纯蛋白衍生物皮肤实验（PPD）、痰涂片检查等不同的检测结果进行分析，从而探讨T-SPOT在尘肺结核病临床快速诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2014年1月～2015年8月湖南省胸科医院门诊收治的疑似尘肺结核患者225例，在明确尘肺诊断的基础上，结合病史、根据临床表现、动态影像学观察、各项实验室结果及最后的追踪判断，在排除了其他疾病后，分为尘肺结核组与尘肺组。尘肺结核组患者155例：其中男123例，女32例，年龄在28～74岁，平均（52.94±15.52）岁；痰涂片找到抗酸杆菌7例，支气管刷检找到结核杆菌13例，涂阴但结核细菌培养阳性：5例，肺活检确诊为结核4例，结合病史、临床症状、体征、动态影像学观察、经抗结核治疗有效（临床症状改善，影像学复查提示病变吸收好转）而诊断的126例。尘肺组70例：其中男64例，女6例，年龄在26～77岁，平均（53.3±15.40）岁。均符合中华人民共和国卫生部尘肺病诊断标准（GBZ70-2009）。

1.2 方法两组患者全部进行T-SPOT.TB、痰涂片抗酸染色、PPD皮试、结核抗体检测，对两组检测结果进行统计学比较、分析。同时对155例尘肺结核患者按正常免疫/免疫缺陷者分组，分别进行T-SPOT.TB、PPD检测。

1.3 主要试剂T-SPOT.TB试剂盒由上海复星有限公司提供；痰涂片抗酸染色：采用的是荧光染色法，试剂由珠海贝索提供；TB-PPD试剂（结核菌素纯蛋白衍生物稀释试剂）由北京祥生物瑞制品有限公司提供；结核抗体试剂由北京健来喜有限公司提供。所有的操作均严格的按照试剂说明书规范的进行。

1.4 统计学方法所有数据均使用SPSS 13.0统计学软件进行数据处理，计量资料以均数± 标准差表示，组间比较采用采用χ2检验，组内比较采用配对卡法检验对各组检出阳性率进行统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组测试结果两组在年龄、性别方面无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。由表1可见，尘肺结核组T-SPOT阳性检出率为92.26%；AFB阳性检出率为12.90%；PPD皮，阳性检出率为68.39%；结核抗体阳性检出率为43.23% 。T-SPOT在尘肺结核组中阳性检出率显著高于其他检测方法，与其他方法相比较，其对尘肺结核病的灵敏度差异有统计学意义（P＜0.05）。单纯尘肺组T-SPOT特异性为：90.0%；AFB特异性为：100%；PPD特异性为：54.29%；结核抗体特异性为87.14%；T-SPOT在尘肺组特异性与结核抗体比较无明显差异（P＞0.05）；但高于PPD皮试的54.29%，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 T-SPOT、AFB、PPD、TB-Ab的灵敏度与特异性的比较

2.2 尘肺结核组免疫缺陷组人群与正常免疫人群T-SPOT、PPD皮试实验结果在尘肺结核组中T-SPOT在免疫缺陷组及正常免疫尘肺结核患者中检出率分别为86.2%和93.7%，两者差异无统计学意义（P＞0.05）。PPD皮试在免疫缺陷组及正常免疫尘肺结核患者中检出率分别为44.8%和73.8%两者差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 尘肺结核组免疫缺陷与免疫正常

3 讨论

尘肺病是一种最为多见的职业病，在我国占各种职业病的人数的75.11%以上［3］，结核病作为尘肺病最主要的并发症，不仅合并率高，一旦合并其死亡率也明显增高。因此尘肺结核病的早诊断，早治疗对患者至关重要。但因尘肺结核病缺乏典型的临床症状及体征，在影像学上也改变了尘肺和肺结核两个病各自原有的特征；痰涂片虽然有简便、快捷、低廉的优点，但检出率低，不能区分结核分枝杆菌和肺结核分枝杆菌；痰结核杆菌培养耗时太长一般需要2月左右，快速培养也需45天左右；结核抗体检测快速且费用低，特异性高，但其敏感性过低，容易漏诊。结核菌素试验易受卡介苗接种的影响和环境分枝杆菌间的交叉反应影响而假阳性高，而无法鉴别区分卡介苗接种后反应和结核分枝杆菌感染状态。这些给临床及时的诊治带来了很大的困难。

近年来，人们发现当个体受到结核分枝杆菌抗原刺激时，体内会产生结核分枝杆菌特异的记忆T淋巴细胞，并长期存在。当致敏淋巴细胞再次遇到同种抗原后就能产生r-干扰素。而T-SPOT.TB就是采用体外ELISPOT（酶联免疫斑点法）技术检测结核分枝杆菌两种特异性抗原：早期分泌性抗原靶蛋白6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP-10）两种抗原刺激外周血中特异性T淋巴细胞分泌r-干扰素，通过检测r-干扰素释放的量来诊断是否有结核感染。ESAT-6、CFP-10均来自结核分枝杆菌基因组RD1区域，它们仅存在于结核分枝杆菌复合群与4种非结核分枝杆菌（即堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌 、微黄分枝杆菌和苏加分枝杆菌）基因组中，卡介苗和其他非结核杆菌缺失［4］。因此该检查不受卡介苗影响，环境非结核分枝杆菌对其影响也很小，特异性高，且整个检测过程 约24～48小时即可。

本研究结果显示：在155例尘肺结核患者中，T-SPOT.TB阳性者为143例，其敏感性为：92.3%，结核菌素试验、结核抗体、痰涂片敏感性分别为：68.4%、43.3%、12.9%，T-SPOT.TB与这些方法比较灵敏度高有统计学意义。尘肺组患者共70例，T-SPOT.TB阳性者为7例，其特异性为90%；结核菌素皮试阳性者为32例，特异性为54.3%；结核抗体阳性者为9例，特异度为87.1%；痰涂片阳性者为0，特异性为100%；T-SPOT.TB特异性明显高于结核菌素皮试有统计学意义。T-SPOT.TB特异性与结核抗体的特异性比较无统计学意义，两者诊断意义相当。虽然血清结核抗体特异性高，且诊断快速、费用低，可作为结核的辅助诊断，但其敏感性低，容易漏诊。尘肺结核组免疫缺陷组人群与正常免疫人群T-SPOT.TB中阳性检出率分别为86.2%和93.7%，两者差异无统计学意义，结核菌素皮试阳性检出率分别为44.8%和73.8%。两者差异有统计学意义。说明T-SPOT.TB正常免疫组和免疫缺陷组均有良好的灵敏度；文献报道：免疫抑制状态不影响T-SPOT.TB敏感性，本研究与其相符［5］。PPD皮试结果受多种因素的影响，尤其在重症结核、营养不良、免疫状态低下的情况下易出现假阴性的结果，其原因可能是：细胞免疫功能减弱时，CD4+T淋巴细胞减少，导致PPD反应减弱，或无反应。而T-SPOT.TB受机体免疫功能及年龄等因素的影响较小［6］，的原因是T-SPOT.TB所检测的r-干扰素除由CD4+T淋巴细胞产生外，自然杀伤细胞及CD8+T淋巴细胞等也可产生，故对T-SPOT.TB检测影响小。文献报道：免疫抑制状态不影响T-SPOT.TB敏感性，本研究与其相符。

可见，T-SPOT.TB与痰涂片抗酸染色、PPD皮试、结核抗体检测相比较，虽其操作较复杂，成本较昂贵但其有较高的敏感性及特异性，受其他因素影响小，漏诊率低，因其检测时间仅需24～48小时，对缺乏典型的临床症状及体征，免疫力低下的尘肺结核患者的早期诊断有着重要的参考价值，提高患者的生存率，减少医疗纠纷。