左炔诺孕酮片近红外定性模型的建立和应用

库文娟

（黄冈市公共检验检测中心 湖北黄冈 438000）

1 前言

左炔诺孕酮片的主要成分是左炔诺孕酮，属于一种短效避孕药，通过抑制排卵和阻止受精卵着床，发挥速效避孕作用，适用于女性紧急避孕。近年来，在市场上有不法分子为经济利益所驱动，制售假冒的左炔诺孕酮片，从外观、包装上很难区分真伪。通过采集市场上流通的8个厂家、10种商品名的左炔诺孕酮片，建立定性模型，可快速、准确的鉴别该药的真伪。

2 仪器与材料

2.1 仪器与试药

Matrix-F近红外光谱仪（配有光纤探头测样附件，铟加砷检测器，OPUS5.0光谱分析软件，德国Bruker公司）；Waters高效液相色谱仪（2998二极管阵列检测器，Empower色谱工作站）；左炔诺孕酮、醋酸甲地孕酮对照品（中国食品药品检定研究院）；乙腈（色谱纯）。

2.2 样品

共收集了8个厂家、24个批次的左炔诺孕酮片，均通过实验室检验，其中，2批经实验室检验证实为假冒产品。

3 方法和结果

3.1 样品的法定检验结果

按照《中国药典》2015版左炔诺孕酮片鉴别项下的方法[1]，对收集的样品进行定性分析。

3.1.1 色谱条件和系统适用性试验

色谱条件：色谱柱：Dionex 4.6 mm×250 mm C18柱；检测波长：240 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；流动相：乙腈-水（70∶30）。理论塔板数按左炔诺孕酮峰计算应不低于2 000，左炔诺孕酮峰与醋酸甲地孕酮峰的分离度应符合要求。

3.1.2 样品制备

供试品溶液和对照品溶液制备：取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成每1 mL中约含75 g的溶液，过滤，取续滤液作为供试品溶液。另取左炔诺孕酮对照品，同法制备。

3.1.3 检测结果

分别取供试品溶液、对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，详见图1～图4。结果显示，17批正品主峰保留时间与对照品溶液主峰保留时间一致，1批伪品在与对照品相应保留时间处，未检出谱峰。

图1 系统适用性试验

图2 左炔诺孕酮对照品色谱图

3.2 模型的分组

将收集的24批左炔诺孕酮片分成2组，其中，12批组成训练集样本（包括1批假药），用于建立定性鉴别模型；另外12批组成验证集样本，用于评估模型的有效性。

3.3 近红外光谱的采集与处理

左炔诺孕酮片均为铝塑包装，将光纤探头隔铝塑抵住药片，在12 000～4 000 cm-1区间扫描，分辨率为8 cm-1，扫描次数为32次，将24批左炔诺孕酮片分成训练集和验证集样本，每批采集10张原始图谱，并求出其平均光谱，用于建立模型和验证模型。

图5 左炔诺孕酮片近红外原始光谱图

图3 正品色谱图

图4 伪品色谱图

3.4 谱段和预处理方法的选择

一般来说，12 000～9 000 cm-1和 4 500～4 000 cm-1区间属于噪音干扰较大的波数范围。比较真假左炔诺孕酮片，原始光谱区别不明显，但通过一阶导数加矢量归一法对光谱进行预处理后，发现在7600～5400cm-1内存在较大差异，因此选择此谱段建立模型，详见图5、图6。

3.5 算法

图6 二阶导数+矢量归一化法光谱区别图

OPUS5.0光谱分析软件软件提供了2种定性分析的基本算法，即标准算法和因子化法。因子化法，即对谱图进行因子分析，得到相应的因子谱以及各光谱的得分值，再对各光谱在因子谱得分空间上的分布计算距离。本模型涉及的厂家较多，不同厂家样品之间存在差异，选择因子算法，能够将正品和伪品分开，标准偏差S达到1.457 286。

3.6 建立模型

用求得的平均光谱建立定性模型，详见表1。

表1 左炔诺孕酮片定性鉴别模型

3.7 模型的评价与验证结果

用该模型对训练集样本12个批次120张光谱以及对验证集样本12个批次120张光谱图进行验证，该模型能够正确识别正品，对伪品也可作出正确的判断。验证结果与法定检验结果一致，未出现误判的情况，详见图7、图8。

图7 定性模型对正品的测试结果

图8 定性模型对假药的测试结果

3.8 模型的应用

在药品检测模型运行过程中，本文对左炔诺孕酮片定性模型筛查辖区内经营的北京紫竹药业有限公司、东北制药集团沈阳第一制药有限公司等公司生产的左炔诺孕酮片药品进行检测，未发现可疑样品，日后将密切关注市场上的左炔诺孕酮片，进一步评价该模型的有效性。

4 讨论

在国家药品监督管理局信息平台查询可知，目前全国共有10个厂家生产该药品，有0.75mg和1.5mg 2种规格。该模型对收集到的8个厂家的样品都能够很好的识别，应用范围广。左炔诺孕酮片是计生药品，假药不能达到避孕的效果，甚至可能对服用者的身体造成极大的伤害，因此，左炔诺孕酮片定性模型具有很强的实用性。

近红外光谱法属于无污染和无损伤低碳环保检测技术，样品不须进行预处理，不使用有毒有害试剂，扫描过程迅速，在医药领域得到了广泛的应用[4]。中国食品药品检定研究院也将近红外光谱技术作为快检车的主要技术支撑，目前，快检车模型数据库中没有左炔诺孕酮片的相关模型。传统的检测方法操作复杂，耗时较长。利用近红外光谱法，只需要几分钟即可鉴别左炔诺孕酮片的真伪。将该方法作为现场筛查的手段，可以大大提高抽样的靶向性和命中率，可以在药品检测车上加以推广[5]。

目前市面上发现的假冒左炔诺孕酮片多为仿冒北京紫竹药业有限公司的“毓婷”左炔诺孕酮片，随着不法分子造假手段的不断变化，能否区别出现的新型假药有待进一步验证。