昆明地区5 284 例孕妇地中海贫血基因检测分析

唐 健，吕梦欣，何建萍，罗胜军，党峰博，钱 源，罗 兰

（1） 昆明市妇幼保健院医学遗传与产前诊断科，云南昆明 650031；2） 昆明医科大学第一附属医院，云南省检验医学重点实验室，云南昆明 650032；3） 昆明医科大学细胞生物学与医学遗传学系，云南昆明 650500）

地中海贫血（以下简称地贫） 是由于珠蛋白肽链合成障碍而引发的溶血性贫血，属于常染色体隐性遗传病，全球约有1.5%的人为地贫基因携带者[1]。目前对地贫尚无有效的根治方法，中重度地贫患儿出生后，终生只能依靠定期输血、祛除铁、脾脏切除、药物治疗、预防并发症等常规治疗维持生命[2]。因此，进一步做好婚前检查、孕前检查、产前筛查、产前诊断等地贫防控工作，避免中重型地贫患儿的出生，是提高出生人口质量与素质的重要举措之一[3]。

地贫基因诊断是检测地贫基因携带者的有效方法[4]，也是地贫防控体系中的重要检测手段。云南省地贫防控项目启动较晚，虽然开展了一些区域性的流行病学调查，但覆盖范围和调查的样本量均较为有限，尚缺乏系统的资料。因此，本研究对昆明地区孕妇人群进行地贫基因诊断，以深入了解昆明地区地贫基因突变谱分布特点，填补昆明地区孕妇地贫基因突变谱的空白，为昆明地区地贫防控体系的构建创造有利的条件。

1 对象与方法

1.1 研究对象

本研究经医院伦理委员会同意，选自2019 年1 月至6 月来昆明市妇幼保健院进行常规产检的5 284 名孕妇，在自愿签署23 型我国常见地贫基因型检测知情同意书后，采集外周静脉血3 mL，EDTA-K2 抗凝备用。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA 提取 采用亚能生物技术（深圳） 有限公司提供的全血DNA 提取试剂盒进行DNA 提取，操作过程按试剂盒说明书进行。

1.2.2 基因诊断 采用亚能生物技术（深圳） 有限公司提供的地中海贫血基因检测试剂盒（PCR-反向点杂交法），操作先按说明书进行基因扩增，然后对扩增产物进行23 型常见地中海贫血基因型（SEA、-α3.7、-α4.2、αCSα、αQSα、αWSα、41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、βEM、IVS-I-1M、IVS-I-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM 和CAPM）DNA 反向点杂交1.5～4 h、洗膜15 min、孵育30 min、3，3’，5，5’-四甲基联苯胺显色5 min、判读结果。

1.3 统计学处理

孕妇信息及检测结果经核实整理后采用SPSS软件进行统计学分析，计数资料以例数或百分率表示，将检测出的α-地贫、β-地贫、α 复合β 地贫三组随机区组设计资料采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

地贫基因检测结果：5 284 例孕妇中检出23 型常见地贫基因型共计313 例，地贫总携带率为5.92%，其中检出α-地贫229 例，携带率为4.33%，占地贫总携带数的73.16%；检出β-地贫80 例，携带率为1.51%，占地贫总携带数的25.56%；检出复合型地贫5 例，携带率为0.09%，占地贫总携带数的1.60%，见表1。对常见三种地贫基因型构成比进行χ2检验，所有格子理论频数均大于5，χ2=372.621，P=0.001，统计学具有显著性差异，可认为昆明地区地贫基因型以α-地贫为主，占总检出率的73.16%，较β-地贫和复合型地贫检出率高。

α-地贫的基因型检测结果显示：6 种常见基因型中，如表1 所示，αα/-α3.7型占地贫总携带数的44.09%；αα/--SEA型占地贫总携带数的16.93%；αα/-α4.2型占地贫总携带数的5.11%；αCSα/αα 型占地贫总携带数的2.88% ；-α3.7/-α3.7型占地贫总携带数的 0.96% ；--SEA/-α3.7型占地贫总携带数的 0.64% ；-α3.7/αWSα 型占地贫总携带数的0.32% ；αQSα/αα 型未检出。检出的α-地贫按携带率排序，前五位顺位排列依次为αα/-α3.7型、αα/--SEA型、αα/-α4.2型、αCSα/αα 型和-α3.7/-α3.7型，见图1A～图1E。

β-地贫的基因型检测结果显示：17 种常见基因型中，如表1 所示，βEM/N 型占地贫总携带数的6.71%；IVS-Ⅱ-654M/N 型占地贫总携带数的5.43%；CD17M/N 型占地贫总携带数的5.43%；-28M/N 型占地贫总携带数的0.64%；CAPM/N 型占地贫总携带数的0.64%；CD43M/N 型占地贫总携带数的0.32%；-32M/N 型占地贫总携带数的0.32%；其余8 种基因型未检出。检出的β-地贫按携带率排序，前五位顺位排列依次为βEM/N型、IVS-Ⅱ-654M/N 型、CD17M/N 型、CD41－42M/N 型和CD71-72M/N 型，见图2A～图2E。

复合型地贫的基因型检测结果显示：检出5 例复合型地贫，如表1 所示，2 例αα/--SEA复合βEM/N 型占地贫总携带数的0.64% ；1 例αα/-α3.7复合βEM/N 型占地贫总携带数的0.32%；1 例αα/-α3.7复合IVS-Ⅱ-654M/N 型占地贫总携带数的0.32%；1 例αCSα/αα 复合CD17M/N 型占地贫总携带数的0.32%，见图3A～图3D。

表1 地贫基因检测结果（%）Tab.1 Statistical table of gene detection results of thalassemia（%）

图1 α-地贫基因检测结果Fig.1 Results of α-thalassemia genetic test

图2 β-地贫基因检测结果Fig.2 Results of β-thalassemia genetic test

图3 αβ-地贫复合型基因检测结果Fig.3 Results of α-thalassemia combined β-thalassemia genetic test

3 讨论

地贫最早发现于地中海沿岸地区而得名，主要分布在东南亚、地中海沿岸地区以及热带与亚热带地区[5-7]，云南省与广西接壤，毗邻东南亚，是我国疟疾流行的主要区域[8]。有研究表明，疟疾选择压力使人类血红蛋白基因发生改变，导致地贫的高发病率[9]。地贫可分为α 地贫、β 地贫、γ 地贫、δβ 地贫等，以α 和β 地贫最为常见.中国α 地贫主要以-α3.7、SEA、-α4.23 种大片段缺失型以及αCSα、αWSα、αQSα3 种点突变型为主；β地贫主要以41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、βEM、IVS-I-1M、IVS-I-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM、CAPM等17 种点突变为主[10]。

本研究结果表明：昆明地区5 284 例孕妇中地贫携带率为5.92%，低于我国地贫发病率最高的广西[11]、广东[12]等地区，但高于福建[13]、湖南[14]等地区，这说明昆明地区地贫发病率也相对较高。在检出的地贫类型中，α-地贫携带者占73.16%（P＜0.01），β-地贫携带者占25.56% （P＜0.01）。地贫类型构成比经χ2检验具有显著性差异。这表明昆明地区的地贫防治干预应以α-地贫为主，同时也要兼顾β-地贫。

α-地贫的基因检测结果表明：昆明地区α-地贫常见的基因型以αα/-α3.7型最为多见，其后依次为αα/--SEA、αα/-α4.2和αCSα/αα。其中αα/-α3.7型占43.95%，这与云南本省[15]以及我国南方部分省份α-地贫基因携带中αα/--SEA基因型占首位的报道差异较大[16-18]，这可能与这些文献报道中基因检测样本均选取血液学筛查阳性的样本有关。有研究表明，αα/-α3.7型一般血液学表现为正常或者轻度贫血[19-20]，当αα/-α3.7型血液学表现为正常时，地贫防控中血液学筛查则为假阴性，若与αα/--SEA型婚配，有1/4 的概率会生育Hb H 型地贫患儿。因此，αα/-α3.7基因型携带者的及时检出对地贫防控有着积极的促进作用。

β-地贫的基因检测结果表明：昆明地区β-地贫常见的基因型以βEM/N 最为多见，其后依次为IVS-Ⅱ-654M/N、CD17M/N、CD41-42M/N 基因型，这与朱宝生[15]报道的βEM/N（CD26G ＞A）在云南省人群中的第一顺位突变基因型一致。海南和广东地区人群检出的β 珠蛋白突变基因第一顺位均为CD41-42M/N[10，17]，而贵州和广西人群检出的β 珠蛋白突变基因第一顺位为CD17M/N[10]，这提示昆明地区人群的β 珠蛋白突变谱与我国南方其他地区有所不同。

复合型地贫的基因型检测结果表明：昆明地区复合地贫携带率为1.6%，与黄道连[21]在广东中山市检出的复合型地贫携带率1.58%接近。有研究表明，在地贫高发区，复合型地贫携带率越高越易形成恶性循环，生育中重型地贫患儿的概率越高[22]，因此，应高度重视对复合型地贫携带者的婚育指导。

综上所述，昆明地区孕妇人群地贫携带率为5.92%，其中α-地贫占73.16%，以αα/-α3.7型最为常见；β-地贫占25.56%，以βEM/N 最为常见；复合型地贫占1.60%。这提示昆明地区人群的地贫基因突变谱与我国南方其他地区有所不同，多 见αα/-α3.7、αα/--SEA、βEM/N、IVS-Ⅱ-654M/N、CD17M/N 这5 种基因型。在孕妇中进行地贫基因携带者的基因检测，是高风险胎儿进行产前地贫基因诊断的重要前提，也是昆明地区地贫防控体系构建的重要参考依据。