盐酸纳洛酮口腔速溶膜的制备及其体外释放研究Δ

王 镜，王 宇，朱君君,2，刘 肖，袁海龙#

(1.空军特色医学中心药学部，北京 100142； 2.成都中医药大学药学院，四川 成都 611137)

盐酸纳洛酮(naloxone hydrochloride，NXH)合成于1963年，1971年在美国被应用于临床，1990年在我国正式上市[1]。NXH是一种纯粹的特异性阿片受体拮抗剂，自身不具有活性，但能对各类阿片受体产生较强的竞争性拮抗作用。相关医学研究结果表明，临床上各种类型的休克大部分属于内啡肽所产生的刺激作用，NXH能够改善休克，缩短患者的病程，极大地降低死亡率[2]。但NXH首过效应严重，口服几乎无效[3]。目前临床常用的剂型有注射剂[4]、舌下片剂[5]和鼻腔喷雾剂[6-7]，但都存在着使用不便、患者依从性差等缺点。口腔速溶膜剂(orodispersible film，ODF)是一种新型药物传递系统[8]，使用时将其置于舌下，在唾液的冲刷下实现药物的快速崩解释放，口服顺应性强，没有堵塞喉咙的危险，特别适合吞咽困难的患者，如老年人、婴幼儿[9]以及急性酒精中毒等患者，且膜载药物经舌下黏膜直接吸收，可避免首过效应[10]。相较于其他剂型，ODF具有携带方便、无需水送服[11]、生产成本低、制备工艺简单及服用剂量准确等优势。本研究采用溶剂浇铸法[12]制备NXH-ODF，通过单因素试验法筛选处方及用量，并对其含量均匀度和体外释放度进行考察，为NXH的剂型开发提供一种新的思路。

1 材料

1.1 仪器

DF-101D型集热式恒温磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限责任公司)；FA1104B型电子天平(上海越平科学仪器有限公司)；BT125D型电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；电子数显千分尺(桂林广陆数字测控股份有限公司)；DHG-9070 A型电热恒温鼓风干燥箱(北京陆希科技有限公司)；ZRS-8G型智能溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司)；KQ-300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；LC-20AD型高效液相色谱仪(日本岛津公司)。

1.2 药品与试剂

NXH原料药(批号：20150326，上海沪源医药有限公司)；羟丙基甲基纤维素(HPMC，包括HPMC-E5、E15、E30和E50，安徽山河药用辅料股份有限公司)；低取代羟丙基纤维素(L-HPC，湖州展望药业有限公司)；羧甲基淀粉钠(CMS-Na，安徽山河药用辅料股份有限公司)；微晶纤维素(MCC，北京凤礼精求商贸有限公司)；可溶性淀粉(天津市福晨化学试剂厂)；丙二醇(湖南尔康制药股份有限公司)；甘油(浙江遂昌惠康药业有限公司)；聚乙二醇400(PEG-400，天津市光复精细化工研究所)；吐温80(天津市光复精细化工研究所)；十二烷基硫酸钠(SDS，上海国药集团化学试剂有限公司)；泊洛沙姆188(P188，北京凤礼精求商贸有限公司)；甲醇、乙腈均为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 NXH-ODF的制备

采用溶剂浇铸法制备NXH-ODF。称取1.8 g的成膜材料于烧杯中，加入10 ml蒸馏水，60 ℃下加热搅拌，充分溶胀，冷却后得到无色透明胶液，备用。称取处方量的上述胶液、增塑剂(丙二醇、甘油和PEG-400)、表面活性剂(吐温80、 P188和SDS)及崩解剂(L-HPC、CMS-Na、MCC和可溶性淀粉)混合均匀后依次加入NXH 5 mg、阿司帕坦5 mg、柠檬黄1.5 mg和水2.5 ml，混合均匀，静置脱气后平铺于玻璃板上，铺膜面积为50 cm2，晾至流动性消失后放入40 ℃的恒温干燥箱，完全干燥后，脱膜，切割为2 cm×2 cm的膜片。

2.2 评价指标

2.2.1 膜剂外观评价：对制备的NXH-ODF的表面光滑程度、卷曲程度及切割时边缘是否破损进行评价[13]。

2.2.2 膜剂厚度的测定：在切割为2.0 cm×2.0 cm大小的NXH-ODF上随机选取3个点用电子数显千分尺测其厚度并计算平均值[14]。

2.2.3 崩解时间的测定：参考文献方法[15]，将2.0 cm×2.0 cm大小的NXH-ODF放入装有适量蒸馏水的直径为13.5 cm的培养皿中，以膜片接触水时开始计时，每10 s轻微摇动1次，至膜片完全崩解为崩解时间，试验重复3次，取平均值。

2.3 处方筛选

2.3.1 成膜材料HPMC的筛选：试验对成膜材料HPMC的4种型号进行了筛选，即HPMC-E5、HPMC-E15、HPMC-E30和HPMC-E50，对其膜外观，膜厚度和崩解时间进行比较，结果见表1。成膜材料选择HPMC-E30时外观良好，不易卷曲，结合厚度与崩解时间，确定HPMC-E30为NXH-ODF的成膜材料。

表1 成膜材料HPMC的筛选结果Tab 1 Screening results of film-forming materials of HPMC

2.3.2 增塑剂的筛选：对于口腔速溶膜剂，加入合适的增塑剂可增加膜韧性，防止在脱膜时导致膜破损，同时便于膜剂的使用和贮存。试验筛选了三种常用的增塑剂，即丙二醇、甘油和PEG-400，结果见表2。综合外观、厚度和崩解时间的结果，选择丙二醇为增塑剂。

表2 增塑剂的筛选结果Tab 2 Screening results of plasticizers

2.3.3 崩解剂的筛选：良好的崩解性能是优质膜剂的重要评价指标之一，试验筛选的崩解剂为L-HPC、CMS-Na、MCC和可溶性淀粉，结果见表3。崩解剂为CMS-Na时，外观良好，厚度最优，崩解时间较短，故选择CMS-Na为崩解剂。

表3 崩解剂的筛选结果Tab 3 Screening results of disintegrant

2.3.4 表面活性剂的筛选：表面活性剂是速溶膜剂的重要组成部分之一，试验筛选的表面活性剂为吐温80、P188和SDS，结果见表4。综合筛选结果，选择吐温80作为表面活性剂。

表4 表面活性剂的筛选结果Tab 4 Screening results of surfactant

2.4 处方用量的考察

在筛选出最佳处方的基础上，参考文献方法[12，16]并进行预试验，对处方中HPMC-E30、丙二醇、CMS-Na和吐温80的用量进行考察。

2.4.1 HPMC-E30用量的筛选：固定处方NXH 5 mg，丙二醇70 mg，CMS-Na 15 mg，吐温80 15 mg，阿司帕坦5 mg、柠檬黄1.5 mg和水2.5 ml。考察不同HPMC-E30用量对NXH-ODF外观、膜厚度和崩解时间的影响，结果见表5。综合膜外观、厚度和崩解时间结果，确定HPMC-E30最佳用量为180 mg。

表5 HPMC-E30用量的筛选结果Tab 5 Screening results of HPMC-E30 dosage

2.4.2 丙二醇用量的筛选：固定处方NXH 5 mg，HPMC-E30 180 mg，CMS-Na 15 mg，吐温80 15 mg，阿司帕坦5 mg、柠檬黄1.5 mg和水2.5 ml。考察不同丙二醇用量对NXH-ODF外观、膜厚度和崩解时间的影响，结果见表6。丙二醇为70 mg时，膜外观和崩解时间最佳，厚度符合要求，确定丙二醇最佳用量为70 mg。

表6 丙二醇用量的筛选结果Tab 6 Screening results of propylene glycol dosage

2.4.3 CMS-Na用量的筛选：固定处方NXH 5 mg，HPMC-E30 180 mg，丙二醇70 mg，吐温80 15 mg，阿司帕坦5 mg、柠檬黄1.5 mg和水2.5 ml。考察不同CMS-Na用量对NXH-ODF外观、膜厚度和崩解时间的影响，结果见表7。CMS-Na用量为10 mg时膜外观与崩解时间最优，厚度较优，确定CMS-Na最佳用量为10 mg。

表7 CMS-Na用量的筛选结果Tab 7 Screening results of CMS-Na dosage

2.4.4 吐温80用量的筛选：固定处方NXH 5 mg，HPMC-E30 180 mg，丙二醇70 mg，CMS-Na 10 mg，阿司帕坦5 mg、柠檬黄1.5 mg和水2.5 ml。考察不同吐温80用量对NXH-ODF外观、膜厚度和崩解时间的影响，结果见表8。结合外观、厚度和崩解时间的结果，确定吐温80最佳用量为10 mg。

表8 吐温80用量的筛选结果Tab 8 Screening results of tween 80 dosage

2.4.5 处方验证：盐酸纳洛酮口腔速溶膜的最终处方组成为(质量分数)，NXH(1.8%)，HPMC-E30(63.9%)，丙二醇(24.8%)，CMS-Na(3.6%)，吐温80(3.6%)，阿司帕坦(1.8%)，柠檬黄(0.5%)。以最优处方平行制备3批NXH-ODF，结果显示，该处方制备的膜剂表面光滑、厚度适中且韧性较好，3批NXH-ODF的崩解时间分别为(37.27±4.31)、(43.20±4.86)和(39.68±6.55)s，体外溶散效果较好。

2.5 含量均匀度及体外释放度测定

2.5.1 色谱条件：参考相关文献[17-18]，选择色谱柱Inertsil®ODS-3柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇-乙腈-0.02%磷酸二氢钾水溶液(V∶V∶V=1∶1∶8)；流速为1.0 ml/min；进样量为20 μl；柱温为30 ℃；检测波长为230 nm。

2.5.2 标准曲线：精密称取NXH原料药2.00 mg,置于25 ml容量瓶中，加入蒸馏水超声溶解并定容，得80 μg/ml的储备液。分别精密吸取NXH储备液适量，稀释得到质量浓度为2.4、6.0、9.6、12.0、18.0和24.0 μg/ml的系列样品溶液，以质量浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程Y=10 277X-9 075.7，R2=0.999 5，表明NXH在2.4～24.0 μg/ml质量浓度范围内线性关系良好。对专属性、精密度、重复性、稳定性及加样回收率进行考察，结果均符合要求。

2.5.3 含量均匀度测定：按照《中华人民共和国药典》含量均匀度检查法，取10片NXH-ODF，计算NXH-ODF的含量均匀度。结果显示，其含量均匀度为A+2.2S<15.0，符合要求。

2.5.4 体外释放度考察：参照《中华人民共和国药典：四部》(2015年版)“通则0931”第二法，桨法。以100 ml的蒸馏水为溶出介质，转速为100 r/min，温度为(37±0.5)℃，将2片2 cm×2 cm大小的NXH-ODF投放到溶出介质中，分别于0.5、2、5、10、30 min和1 h取样1 ml(同时补充同温同体积的溶出介质)，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液进样分析，计算累积释放度并绘制体外累积释放度曲线，平行试验3次，结果见图1。NXH-ODF能快速释放，在10 min内累积释放度达到(97.44±2.28)%。

图1 体外累积释放度曲线Fig 1 In vitro cumulative release

3 讨论

相关文献报道，HPMC具有良好的成膜性能，常用于膜剂的制备[19-20]。本研究对HPMC的不同型号进行了筛选，确定HPMC-E30为最佳的成膜材料。为提高患者的顺应性，常需添加矫味剂以改善膜剂口感。阿司帕坦为人工合成的矫味剂，甜味纯正，甜度为蔗糖的227倍，且无毒无害，已被多个国家使用，故选用阿司帕坦作为矫味剂[21-22]。柠檬黄作为着色剂，可改善膜剂的外观，提高患者的顺应性。

为降低患者膜剂服用时的口腔异物感，膜片的体积常很小，这导致膜剂载药量极低。本研究的模型药物NHX临床使用剂量较小，约为5～10 μg/kg，契合膜剂载药量要求。同时，舌下具有丰富的静脉血管，通过舌下吸收可避免首过效应。以最优处方制备的NXH-ODF能在40 s内快速崩解，并具有良好的体外性质，因此，NXH-ODF的研制具有一定的临床价值。