蒸馏酒及其配制酒中氰化物测定方法的改进

李雪春

(贵州省疾病预防控制中心，贵州 贵阳 550004)

氰化物在自然界中广泛存在，是严重危害食品安全的剧毒化合物，是酒类测量中的一项重要指标[1-5]。木薯、高粱、玉米等是含有氰甙配醣体的植物，作为原料酿造制作出的酒常能检出氰化物[6-8]，我国《食品安全国家标准蒸馏酒及其配制酒》(GB 2757-2012)规定蒸馏酒及其配制酒中氰化物的质量浓度不能超过8.0 mg/L(按100%酒精度折算)[9]。氰化物的检测方法主要有分光光度法、色谱法、离子选择电极法、气相色谱法等[10-17]，目前中华人民共和国国家标准《食品安全国家标准 食品中氰化物的测定》(GB 5009.36-2016)第一法采用异烟酸-吡唑啉酮分光光度法[18-19]，该方法调节pH后易超过所限体积，检测过程中试样和标准溶液常产生浑浊，严重影响测定结果。为解决以上问题，该试验在国标的基础上优化样品处理条件，使缓冲溶液加入后pH值即达到检测要求，消除浊度干扰，建立一套准确、快速、可靠的蒸馏酒及其配制酒中氰化物检测方法，结果满意。

1 实 验

1.1 仪器与试剂

VIS-723N可见光分光光度计，北京瑞利分析仪器公司；ZSBB-724电热恒温水浴锅，上海智慧城分析仪器制造有限公司；98-1-B型电子调温电热套，天津市泰斯特仪器有限公司。

氰标准溶液(GBW(E)080241，50 mg/L)购置中国计量科学研究院，乙酸锌、酒石酸、氢氧化钠、无水磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钠、异烟酸、吡唑啉酮、无水乙醇、氯胺T均为分析纯，试验用水为超纯水。

磷酸盐缓冲液：称取34.0 g无水磷酸二氢钾和35.5 g无水磷酸氢二钠溶于纯水并稀释至1000 mL；异烟酸-吡唑啉酮溶液：称取1.5 g异烟酸溶于24 mL 20 g/L NaOH溶液中，加水至100 mL，另取0.25 g吡唑啉酮，溶于20 mL无水乙醇中，合并上述两种溶液，混匀，临用时现配；氯胺T溶液：称取1 g氯胺T溶于水中，并稀释至100 mL，临用时现配。

1.2 实验方法

1.2.1 样品处理

取1.00 mL样品，于10 mL具塞比色管中，加2 g/L NaOH溶液至5.0 mL，放置10 min。若酒样浑浊或有色，取25.0 mL试样于250 mL全玻璃蒸馏瓶中，加100 mL纯水和1～2 g固体酒石酸迅速蒸馏，收集馏出液于10 mL 2 g/L氢氧化钠溶液中，收集至50 mL，取蒸馏液2.00 mL于10 mL具塞比色管中，加2 g/L NaOH溶液至5.0 mL。于试样中加入2 mL磷酸盐缓冲液，置恒温水浴25～30 ℃中，加0.2 mL氯胺T溶液，混匀后放置3 min，然后加入2 mL异烟酸-吡唑啉酮溶液，加纯水至10 mL，混匀置恒温水浴37 ℃中放置30 min，取出待测样品过0.22 mm水系滤头过滤，用1 cm比色皿以零管调节零点，于638 nm波长处测量吸光度。

1.2.2 定性定量方法

取浓度为50 mg/L氰化物标准溶液2.00 mL，用2 g/L NaOH溶液定容至100.00 mL，配制成1 mg/L的标准储备液。分别取1 mg/L氰化物标准储备液0、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 mL于10.0 mL具塞比色管中，加2 g/L NaOH溶液至5.0 mL，配制成含氰化物0、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 μg的标准系列。按样品处理方法测量氰化物标准系列的吸光度，以氰化物含量为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。通过标准曲线计算出所取试样中氰化物含量，除以取样量得到试样中氰化物的质量浓度，并折算为100%酒精度时的质量浓度。

2 结果与讨论

2.1 氢氧化钠浓度和缓冲溶液用量的选择

中华人民共和国国家标准《食品安全国家标准 食品中氰化物的测定》(GB 5009.36-2016)第一法为使酒中氰化物检测过程中显色反应的pH控制在要求范围内，用乙酸溶液和氢氧化钠溶液对样品溶液和标准溶液的pH进行调节，导致体积过量及溶液浑浊的现象影响了最终的检测结果。在氰化物检测过程中，要求显色反应的pH控制在6.8～7.5范围内，低于或高于此范围，吸光度均显著降低[20]，为避免因调节pH而导致体积过量及溶液浑浊问题，通过对氢氧化钠溶液浓度和缓冲溶液用量条件的选择，省略调节pH这一步骤，满足pH要求，进行以下试验。将试样分为两组，每组各为5个含1.0 μg的标准溶液和5个1.00 mL样品。第一组每个试样中加入1 g/L NaOH溶液至5.0 mL，第二组每个试样中加入2 g/L NaOH溶液至5.0 mL。在各组的5个标准溶液和5个样品中分别加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL磷酸盐缓冲液，测量其pH值，结果见表1。

表1 加入不同体积磷酸盐缓冲液时样品的pH值

由表1结果表明，样品和标准溶液选用2 g/L NaOH溶液定容后加入2 mL磷酸盐缓冲液，可使酒中氰化物检测过程中显色反应的pH控制在要求范围内，省略了对pH的调节，减少浑浊，克服体积过量的问题，以达到取得满意结果的目的。用该法测量10份不同样品的pH值，均在要求范围内。

2.2 反应温度的选择

将6个含1.0 μg的标准溶液分别在20、25、30、35、40、45 ℃水浴中反应，按样品处理后测量吸光度分别为0.355、0.379、0.377、0.368、0.348、0.337。水浴温度为25～30 ℃时吸光度比较稳定，故选择水浴温度25～30 ℃为反应温度。

2.3 蒸馏体积比的选择

对于浑浊或有色的样品，含挥发性有机物较多，液相体积越小，挥发性有机物越易蒸出，蒸出的试样颜色越深，显色反应后越易产生浑浊，越易干扰测定；而液相体积越大，蒸馏所耗费的时间越多，故对蒸馏相比进行试验。分别取5次50 mg/L氰化物标准溶液0.50 mL于预先装有25 mL纯水的蒸馏瓶中，此蒸馏瓶中含氰化物25.0 μg，蒸馏前分别加入225、175、140、100、75 mL纯水，使蒸馏瓶中液相与气相的体积比为1∶1、1∶1.5、1∶2、1∶3、1∶4，按样品处理方法对不同相比蒸馏试样测定其吸光度相差较小，故相比对氰化物的蒸出率影响较小。通过对实际有色样品的蒸馏试验，选择1∶3的相比，即加入100 mL纯水，既能减小有机物的蒸出，又能减小蒸馏时间。试验中同时加入1～2 g固体酒石酸足以在样品中达到饱和，保证蒸馏瓶内液体为酸性。

2.4 检出限、定量下限和线性关系

按定性定量方法得，在0.1～5.0 mg/L范围内，氰化物的线性方程为y=0.33x-0.014，相关系数为r=0.9991。按国际理论与应用化学家联合(IUPAC)规定，以扣除空白值后的与0.01吸光度相对应的浓度值为检出限，0.02吸光度相对应的浓度值为最低检测限[21]，得酒中氰化物的检出限为0.07 mg/L，最低检测限为0.1 mg/L，满足检测要求。

2.5 样品分析

根据方法的线性范围，分别取含氰化物的样品0.1、0.3、0.5 mL样品各6份，用纯水定容至1 mL，按样品前处理方法进行测定，计算得相对标准偏差(RSD%)为3.3%～2.9%。分别再在0.1 mL样品加入1.00 μg氰化物标准、0.3 mL样品加入2.00 μg氰化物标准，用纯水将定容至1 mL，按样品前处理方法进行测定，计算得加标回收率为95.0%～97.0%，精密度和准确度满足测定要求(结果见表2)。在做加标回收试验时，应选择含氰化物的样品作为本底，在不含氰化物的样品中加标，样品会消耗加入的氰化物，影响回收试验结果。

表2 精密度和回收率实验结果(n=6)

3 结 论

按中华人民共和国国家标准《食品安全国家标准 食品中氰化物的测定》(GB 5009.36-2016)第一法操作，常出现体积过量和溶液浑浊的问题，严重影响了检测结果。本检测方法通过试验确定缓冲溶液加入量，使pH控制在要求范围内，解决了体积过量问题；比色前用滤头对试样进行过滤，解决了试样浑浊问题。试验结果表明，本方法测定蒸馏酒及其配制酒中氰化物，解决了检测过程中试样体积过量、易浑浊的问题，在灵敏度、精密度、准确度上都能满足检测要求。