老年脑卒中合并抑郁患者血清miR-26b和BDNF的表达关系研究

李晓峰 张文瑛 梁铁生

脑卒中是一种急性脑血管疾病，多因脑部血管破裂或血管阻塞脑组织缺血造成，是老年人群体中的多发症状，具有高死亡率、高致残率特点，随着人口老龄化发展，脑卒中发病率逐年上升[1]。脑卒中后抑郁是脑卒中后最常见并发症之一，病情较重者会有轻生念头，对脑卒中患者的术后康复具有负面影响[2]。临床主要通过家人、社会关爱、接受心理治疗以及药物治疗，脑卒中后抑郁的发病机制尚不明确。脑源性神经细胞营养因子(brain derived neurotrophic factor，BDNF)是体内含量最多的神经营养因子，在增加突触可塑性、促进神经发生过程中发挥重要作用，研究显示，其与脑卒中后抑郁发病密切相关[3]。研究表明，miRNA在脑卒中后抑郁中发挥重要作用[4]，miR-26b是新近发现对神经元、血管再生具有作用的miRNA[5]，但其在脑卒中后抑郁研究较少，通过miRanda网站预测结果显示miR-26b与BDNF具有结合位点，因此本研究主要通过研究miR-26b与BDNF在老年脑卒中后抑郁患者血清内表达关系以及临床意义，为脑卒中后抑郁的防治提供新思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年8月至2018年8月本院神经内科首次确诊的脑卒中入院治疗患者95例作为研究对象，在确诊14 d后根据汉密尔顿抑郁量表评分标准[6]将患者分为合并抑郁症组41例(≥20分)与未合并抑郁症组54例(<8分)并检测患者NIHSS评分[7]。其中合并抑郁症组男29例，女12例；年龄50～81岁，平均年龄(61.37±5.12)岁；出血性脑卒中者3例，缺血性脑卒中38例；短暂性脑缺血发作7例，可逆性神经功能障碍9例，进展性卒中14例，完全性卒中11例。未合并抑郁症组男37例，女17例；年龄50～81岁，平均年龄(61.49±5.96)岁；短暂性脑缺血发作11例，可逆性神经功能障碍12例，进展性卒中9例，完全性卒中22例。纳入标准：无遗传倾向性疾病；经头部MRI或CT确诊脑卒中。排除标准：入院24 h内死亡或家属放弃治疗的；多脏器受损者；合并其他恶性肿瘤者。另选取同一时期体检健康者56例作为对照组，其中男42例，女14例；年龄50～81岁，平均年龄(62.04±6.02)岁。3组性别比、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。所有研究对象知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 血清标本收集：脑卒中患者于入院14 d分组后次日清晨、对照组于体检当日抽取空腹肘部静脉血5 ml，平均分成2份，均在-4℃、3 000 r/min条件下离心20 min，取上清在-80℃冰箱中保存待测。

1.2.2 实时荧光定量PCR法(real-time fluorescence quantitative PCR)检测血清miR-26b表达:取其中一份血清标本，按照Trizol试剂盒操作说明书提取血清总RNA，使用反转录酶试剂盒Superscript Ⅲ将RNA反转录为cDNA。采用荧光定量试剂盒并进行实时荧光定量PCR检测血清miR-26b表达水平，程序为95℃预热30 s，95℃ 15 s，60℃ 15 s，72℃ 15 s，以上3个步骤重复40次。miR-26b以U6为内参基因，引物序列见下表，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，反应结束后收集数据，并对所得数据Ct值进行分析，采用2-ΔΔCt算法计算miR-26b相对表达量。见表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.2.3 酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测血清BDNF水平:取另一份血清标本，使用人脑源性神经细胞营养因子(BDNF)试剂盒(ELISA)(上海康朗生物科技有限公司)检测血清BDNF水平，严格按照操作说明书操作。

2 结果

2.1 3组一般资料比较 3组性别比、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，与未合并抑郁症组相比，合并抑郁症组NIHSS评分显著升高(P<0.05)。见表2。

表2 3组一般资料比较

2.2 3组受试者血清miR-26b和BDNF水平比较 3组血清miR-26b、BDNF水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较，未合并抑郁症组血清miR-26b、BDNF水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)，合并抑郁症组血清miR-26b水平显著升高(P<0.05)，血清BDNF水平显著降低(P<0.05)；与未合并抑郁症组比较，合并抑郁症组miR-26b显著升高(P<0.05)，BDNF水平显著降低(P<0.05)。见表3。

表3 3组受试者血清miR-26b和BDNF表达情况

2.3 老年脑卒中合并抑郁患者血清miR-26b与BDNF水平相关性分析 Pearson分析显示，老年脑卒中合并抑郁患者血清miR-26b与血清BDNF水平呈负相关(r=-0.604，P<0.05)。见图1。

图1 血清miR-26b与BDNF水平相关性分析

2.4 ROC法评价血清miR-26b和BDNF水平对脑卒中并发抑郁的预测作用 ROC曲线显示，血清miR-26b水平预测老年脑卒中患者发生抑郁的曲线下面积为0.807，截断值为1.35，敏感度为68.3%，特异性为87.0%。血清BDNF水平预测老年脑卒中患者发生抑郁的曲线下面积为0.900，截断值为11.91 ng/ml，敏感度为87.8%，特异性为88.9%。见图2。

图2 血清miR-26b、BDNF水平预测老年脑卒中患者发生抑郁的ROC分析

2.5 影响脑卒中后抑郁危险因素logistics回归分析 将是否发生抑郁做为因变量，以性别、NIHSS评分、miR-26b、BDNF为自变量并进行多因素Logistic回归分析，结果显示NIHSS评分>27、血清miR-26b水平≥1.35、BDNF≤11.91 ng/ml是影响老年脑卒中患者合并抑郁的危险因素。见表4。

表4 多元回归分析

3 讨论

BDNF是神经营养家族中一员，在海马体与皮质中含量较高，通过与其受体结合，激活细胞内信号传导通路，启动基因转录，参与促进神经元生长、调节突触可塑性等生理活动[8]。Eker等[9]通过观察脑卒中后患者汉密顿抑郁量表与BDNF水平关系，得出BDNF水平与卒中后抑郁程度相关。王恒飞[10]研究表明，脑卒中后抑郁患者血清BDNF水平显著降低。本研究中，脑卒中后抑郁患者血清BDNF水平显著低于健康者与脑卒中未合并抑郁患者，未合并抑郁患者与健康人血清BDNF水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，提示患者血清BDNF水平下降可能与卒中后抑郁发生有关。经ROC曲线分析，血清BDNF水平预测脑卒中患者发生卒中后抑郁曲线下面积为0.900，特异性敏感度均>80%，对脑卒中患者抑郁发生的具有一定预测价值，截断值为11.91 ng/ml，提示老年脑卒中患者血清BDNF水平<11.91 ng/ml时极可能发生卒中后抑郁，需提前进行干预治疗。

microRNA是一类长约20个核苷酸的非编码小RNA，在生命活动发挥着重要作用[11]。近年研究表明，microRNA在神经元的生成及脑源性神经营养因子生成中扮演重要角色。miR-26b位于人染色体12q14.1[12]，研究显示，miR-26b在神经分化中发挥着重要作用。本研究中，脑卒中合并抑郁患者血清miR-26b表达水平显著低于健康者与脑卒中未合并抑郁患者，而未合并抑郁患者与健康者miR-26b水平比较差异无统计学意义，提示miR-26b可能参与脑卒中后抑郁发生进程。通过miRanda网站预测结果显示软件预测miR-26b与BDNF具有结合位点，且本研究通过Pearson分析发现二者在脑卒中合并抑郁患者血清中表达具有负相关关系，提示miR-26b高表达可能通过下调BDNF表达，参与脑卒中患者抑郁发生进程，但具体机制尚未阐明。进一步ROC曲线分析可知，血清miR-26b预测脑卒中患者发生抑郁曲线下面积为0.807，截断值为1.35，提示血清miR-26b水平高于1.35时脑卒中后抑郁的可能性较高，但其特异性为87.0%，敏感度仅为68.3%，低于BDNF的预测效果，可能由于miR-26b不是影响脑卒中后抑郁的发生的直接原因，而是通过其他因子影响抑郁发生，可作为脑卒中后抑郁的辅助预测指标。研究显示，血清miR-26b高于1.35，血清BDNF低于11.91 ng/ml均是影响脑卒中后发生抑郁的危险因素，此外，NIHSS评分也是脑卒中后抑郁的危险因素[13]。

综上所述，老年脑卒中后抑郁患者血清miR-26b高表达，血清BDNF低表达，二者呈负相关，miR-26b可能通过负调控BDNF表达发挥作用。检测脑卒中患者血清miR-26b、BDNF水平对抑郁发生具有一定预测作用。但本研究也存在一定不足，选用研究样本较少，需进一步扩大样本。