维生素D和PLGF在妊娠期糖尿病患者中的表达及对妊娠结局及新生儿的影响

高翠玲 陈井丽

河南省郑州市第七人民医院(450006)

妊娠期糖尿病(GDM)是妊娠期间程度不一的糖耐量紊乱[1-2]。发病机制为胰岛素抵抗与β细胞功能缺陷诱发糖代谢紊乱[3-4]。有文献报道维生素D缺乏会诱发胰岛β细胞功能衰退,导致胰岛素抵抗,具体作用机制仍在研究[5]。另有研究指出,胎盘生长因子(PLGF)在子痫前期可作用于滋养细胞,发挥抑制作用,但PLGF在高糖基础中表达的调控情况有待研究[6]。本文重点探讨维生素D和PLGF在妊娠期糖尿病患者中的表达及对妊娠结局及胎儿的影响。

1 资料和方法

1.1 一般资料

以2018年1月－2019年3月本院产科分娩的GDM孕妇85例为GDM组,另选择同期定期产前检查的健康孕妇80例为对照组。纳入标准：①GDM诊断符合《妊娠期糖尿病诊治标准》[7]与《中国2型糖尿病防治指南》[8]中GDM诊断标准；②年龄20～50岁；③单次、首胎妊娠、胎龄30～33周。排除标准：①服用对维生素D影响的药物；②GDM高危因素包括糖尿病家族史、妊娠前超重或肥胖、多囊卵巢综合征；③合并严重心肺功能不全等慢性疾病。孕妇均自愿参与本研究且签署知情同意书,本研究经本院伦理委员会审核批准。

1.2 方法

所有受试者首次入院第3天清晨空腹抽取静脉血离心分离血清,全自动生化仪(美国贝克曼库尔特公司,AU5800贝克曼全自动生化仪)检测血糖浓度；高效液相色谱仪(上海仪电分析仪器有限公司,LC210高校液相色谱仪)检测血清中维生素D水平；酶联免疫吸附法检测PLGF水平。待胎盘娩出后,收集母体面中心处绒毛组织,取出面积约1cm×1cm×1cm,无菌氯化钠液0.9%漂洗胎盘组织表层血迹,一块存放冻存管中,另一块10%甲醛固定操作后石蜡包埋,切片,苏木精伊红染色,置光镜中观察胎盘组织形态变化。Western Bolt法提取胎盘组织蛋白,调整浓度到1μg/μl,同时抽取20μl添加十二烷基苯磺酸钠-聚丙烯酰胺完成电泳,然后添加偏氟乙烯膜上,5%脱脂牛奶封闭1h后,一抗4℃中过夜；二抗室温孵育1h,ECL试剂发光显影。链霉菌抗生物素过氧化物酶法处理石蜡切片,2%乙二胺四乙酸溶液煮沸抗原高压热修复,滴加3%H2O2阻断内源性过氧化物酶,室温15 min,滴加一抗4℃过夜,DAB显色苏木精复染封固,计算PLGF平均灰度值(OD),以平均值计算PLGF相对含量。

1.3 观察指标

①记录两组维生素D和PLGF水平变化；观察两组胎盘HE染色结果、PLGF蛋白表达水平及光密度值；以妊娠期糖尿病患者维生素D、血清PLGF水平[9]分为正常组(维生素D≥30ng/ml、PLGF＞100pg/ml)与不足组(维生素D＜29ng、PLGF＜100pg/ml),比较两组妊娠结局(早产、胎儿宫内窘迫、剖宫产和产钳助产)与新生儿情况(高胆红素血症、巨大儿、早产儿和新生儿窒息)。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组一般资料比较

GDM组85例,年龄(25.6±3.6)岁,孕周(31.6±0.7)周,孕前体质指数(BMI)(20.3±0.5)kg/m2；对照组80例,年龄(25.1±3.5)岁,孕周(31.5±0.7)周,孕前BMI(20.5±0.5)kg/m2。两组年龄、孕周和孕前BMI无差异(P＞0.05)。

2.2 两组血清维生素D和PLGF比较

GDM组血清维生素D(17.15±4.51 ng/ml)和PLGF水平(72.05±21.55 pg/ml)均低于对照组(43.08±3.97 ng/ml、132.36±22.78 pg/ml)(均P＜0.05)。

2.3 两组胎盘HE染色

400倍光镜下观察,GDM组胎盘绒毛大小无均匀性,见密集绒毛血管分布,绒毛滋养细胞仪单层为主,合体滋养细胞与细胞滋养细胞呈现为低表达。对照组中胎盘绒毛均匀,合体滋养细胞与细胞滋养细胞正常分布。见图1(见封三)。

2.4 两组PLGF蛋白表达水平及OD值

GDM组胎盘中PLGF蛋白相对表达(1.02±0.76)高于对照组(0.78±0.64)(P＜0.05),见图2、图3；免疫组织化检测PLGF在胎盘中的原位表达,GDM组PLGF阳性表达(2.97±1.12)高于对照组(1.75±0.97)(P＜0.05),见图4(见封三)、图5。

图2 PLGF western blot检测结果

图3 PLGF Western blot检测结果统计学分析图

图5 两组胎盘组织中PLGF蛋白表达

2.5 GDM组维生素D、血清PLGF与不良妊娠结局及新生儿

GDM组中,维生素D、血清PLGF不足组53例,正常组33例。不良妊娠结局发生率不足组高于正常组(P＜0.05),见表1。

表1 维生素D、PLGF与不良妊娠结局及新生儿并发症[例(%)]

3 讨论

有报道认为,维生素D缺乏与2型糖尿病密切相关。既往文献报道,于大鼠下丘脑位置将维生素D活化为25(OH)D3后,大鼠葡萄糖耐受性显著升高,胰岛素敏感性上升,认为维生素D有良好的食欲与血糖调控作用[10-12]。人与大鼠均主要通过下丘脑调控血糖水平,通过联合下丘脑调控中枢的维生素D受体进一步增强胰岛素受体对胰岛素敏感性,提高对葡萄糖的耐受性,实现血糖水平的稳定状态[13]。有学者发现,孕妇维生素D缺乏与GDM发生具有相关性,维生素D缺乏的群体出现GDM的风险达到正常群体的2倍。因此可针对孕妇适当补充维生素D,调节血浆维生素D水平[14-15]。本研究中,GDM组血清维生素D和PLGF水平低于对照组,进一步提示GDM孕妇中维生素D与PLGF水平的异常。在产前检查时针对GDM孕妇应重视其维生素D和PLGF水平筛查,避免对妊娠结局及胎儿造成不良影响。

PLGF主要在胎盘组织中表达。有研究报道,PLGF表达异常会影响胎盘的正常功能,血流动力学发生变化,母体营养物质供应下降或中断,严重的会诱发胎儿窒息、早产甚至母婴死亡[16-19]。本文GDM组孕妇胎盘中的PLGF蛋白相对表达水平高于对照组,PLGF阳性表达高于对照组,提示GDM患者胎盘组织中PLGF呈高表达,具体原因有待研究。本研究对妊娠期糖尿病患者维生素D、PLGF水平异常对妊娠结局与新生儿的影响进行分析,结果显示不足组不良妊娠结局及新生儿不良发生率均高于正常组,提示GDM孕妇血清维生素D不足、PLGF下降均可能导致不良妊娠结局发生。

综上所述,GDM患者应在妊娠早期时定期检测血清维生素D水平,不足时应及时补充维生素D,调控PLGF蛋白水平,以减少不良妊娠结局发生。