OSAC患者血清和腹腔积液中IL-6、IL-8、MMP-2和MMP-9水平与临床病理分期及预后的关系*

高翠红, 孙文杰，崔娇姣

(唐山市妇幼保健院，河北 唐山 063000)

卵巢癌是常见的女性生殖器官的恶性肿瘤，具有较高的发病率和死亡率，严重威胁着女性的健康。浆液性卵巢癌(OSAC)是卵巢恶性肿瘤中最常见的病理类型，由于癌症早期临床症状不明显,极易造成误诊，就医时大多患者处于癌症晚期[1]，这类患者极易出现腹腔积液，从而导致肿瘤的复发和转移[2-3]。细胞因子在卵巢癌的发生、发展过程中起着重要作用，其中以白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)的作用最为突出。IL-6和IL-8是具有多种生物学活性的细胞因子,在卵巢癌血清和腹腔积液中均有较高水平的表达[4-5]。有研究表明，基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)是一种可以降解细胞外基质的分泌性或跨膜性蛋白，可对肿瘤细胞微环境进行调节、促使细胞活性增加以及加快血管生成等参与肿瘤的侵袭过程。基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2, MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP-9)与肿瘤的转移相关，高表达于卵巢癌血清和组织中[6-7]。本实验通过研究细胞因子IL-6、IL-8、MMP-2和MMP-9在OSAC中的表达水平，探讨其在OSAC血清和腹腔积液中的水平变化及与肿瘤病理分期和预后的关系。

1 资料与方法

1.1资料、仪器及试剂

1.1.1一般资料 选取 2015年7月— 2019年7月接受手术治疗的OSAC患者(OSAC组) 56例，平均(48.3±14.2)岁；卵巢良性肿瘤(良性肿瘤组)32例，平均(45.5±12.7)岁。所有入组病例均经术后病理证实，术前均未行放化疗，没有使用免疫制剂及激素类药物。排除转移性卵巢恶性肿瘤及其他系统肿瘤、妇科炎症和免疫系统疾病，近期均无感染。

1.1.2病理分级和临床分期 OSAC组临床分期按 FIGO(2006年版)手术病理标准，Ⅰ和Ⅱ期 22 例，平均(46.2±10.7)岁；Ⅲ和Ⅳ期 34 例，平均(47.4±13.5)岁。组织分级分为高、中分化组 29 例，平均(44.8±15.2)岁；低分化组 27例，平均(46.4±14.1)岁。

1.1.3仪器和试剂 采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-6、IL-8 含量，试剂由上海圆创生物技术有限公司提供；MMP-2、MMP-9试剂盒由上海复星公司生产；采用双抗体夹心ELISA法检测，具体操作按说明书进行，酶标仪为美国Thermo公司生产。

1.2方法

抽取所有患者手术当日清晨空腹静脉血3 mL，放置于有分离胶的促凝试管中，3 500 r/min离心10 min后分离血清，置于-70 ℃冰箱保存备用。腹腔积液样本均于腹腔镜或开腹手术中获得，并3 500 r/min离心10 min，取上清液置于-70 ℃冰箱保存备用。采用ELISA法分别测定IL-6、IL-8、MMP-2和 MMP-9的含量，按照标准操作规程和试剂使用说明书操作，检测当日仪器状态稳定、质控在控，实验室环境、温度、湿度等均符合操作规程的要求。

1.3统计学处理

2 结果

2.1血清和腹腔积液中IL-6、IL-8、MMP-2 和 MMP-9水平

结果显示，OSAC组血清和腹腔积液中IL-6、IL-8、MMP-2 和 MMP-9的水平均高于良性肿瘤组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 OSAC组和良性肿瘤组患者血清和腹腔积液中IL-6、IL-8 、MMP-2 和 MMP-9水平Tab.1 Comparison of IL-6, IL-8, MMP-2 and MMP-9 levels in serum and peritoneal effusion between OSAC group and benign tumor group

2.2OSAC组患者腹腔积液中各指标的相关性

OSAC组患者MMP-2、MMP-9以及IL-6在血清和腹腔积液中的表达呈正相关(t=0.465，t=0.290，t=0.401，P<0.05)，见图1。

图1 OSAC患者血清与腹腔积液中MMP-2、MMP-9及IL-6的相关性Fig.1 Correlation of MMP-2,MMP-9 and IL-6 in serum and peritoneal effusion in OSAC patients

2.3OSAC患者腹腔积液中IL-6、IL-8、MMP-2 以及MMP-9与临床分期和组织分级的关系

由表2可见，Ⅲ、Ⅳ期OSAC患者腹腔积液中IL-6、IL-8、MMP-2和MMP-9水平均高于Ⅰ、Ⅱ期患者，高、中分化组各指标水平低于低分化组，差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 OSAC组腹腔积液中IL-6、IL-8、MMP-2 和 MMP-9与临床分期和组织分级的关系Tab.2 Relationship of IL-6, IL-8, MMP-2 and MMP-9 levels in peritoneal effusion of OSAC group between clinical stage and tissue grading

3 讨论

腹腔积液是临床上一种常见的体征，其形成的原因较复杂，妇科恶性肿瘤极易产生腹腔积液[8]，其中以浆OSAC最为多见[9]。OSAC腹腔积液的发病机制比较复杂，可能是卵巢肿瘤侵袭使得毛细淋巴管重吸收障碍，造成血管内皮生长因子(VEGF)增多，增加了毛细血管的通透性[10]。腹腔转移是OSAC的特性之一[11]，腹腔积液的出现意味着OSAC存在腹腔转移[12]，大量腹腔积液极易造成机体低蛋白血症，形成恶病质。腹腔积液中的非细胞成分例如细胞因子和基质金属蛋白酶在OSAC发病中起着非常重要的作用[13]，其中IL- 6、IL- 8、MMP-2和MMP-9是OSAC腹腔积液良恶性的重要指标。

IL-6 是淋巴细胞、单核-吞噬细胞及某些肿瘤细胞产生的具有多功能的细胞因子，可刺激肿瘤生长，促进肿瘤转移和恶化。IL-6由卵巢上皮细胞产生，促进肿瘤细胞的增殖。IL-8是一种具有激活和趋化作用的细胞因子，与肿瘤的生长、侵袭和转移密切相关[14]，IL-8可通过自分泌生长因子、血管发生因子和促进Ⅳ型胶原酶的活性以及影响细胞的黏附移动,从而促进肿瘤的发生、发展和转移。本研究结果显示，OSAC血清和腹腔积液中IL-6、IL-8均高于卵巢良性肿瘤组，且腹腔积液中IL-6、IL-8水平高于血清中的水平，IL-6在OSAC血清和腹腔积液中呈正相关关系。

MMP是一类高度保守的酶[15]，MMP参与肿瘤细胞的增殖、凋亡过程并参与调节肿瘤的发生和发展。MMP与卵巢肿瘤的侵袭和转移密切关联，在卵巢癌中应用最广泛的指标为MMP-2和MMP-9。有研究显示，多种恶性肿瘤患者血清中MMP-2、MMP-9均明显增高，提示恶性肿瘤的形成可能与 MMP 有关[16-17]。MMP-2又被称为明胶酶A，它的表达与卵巢癌的进展显著相关，检测MMP-2可能作为预测和评估患者预后的灵敏指标，因此下调MMP-2的表达可能会抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移。MMP-9属于Ⅳ型明胶酶，可降解Ⅳ型胶原蛋白，Ⅳ型胶原蛋白是细胞外基质和基底膜的主要成分。肿瘤的侵袭和转移很大程度上依赖于细胞外基质的降解。细胞外基质和基底膜被降解，促使肿瘤细胞向腹膜移动，MMP促进新生血管形成，加速肿瘤向腹膜生成是卵巢癌腹腔积液形成的主要机制[18-19]。本研究结果表明，OSAC患者血清和腹腔积液中MMP-2、MMP-9均高于卵巢良性肿瘤组，且腹腔积液中MMP-2、MMP-9水平高于血清中的水平。腹腔积液中MMP-2、MMP-9与临床分期成正相关[20]，与组织分级成负相关，同时腹腔积液中MMP-2、MMP-9分别与血清中各指标呈正相关性。因此，下调MMP-2、MMP-9的表达可能会抑制OSAC细胞的侵袭和转移。

综上所述，血清和腹腔积液成分中细胞因子和MMP的表达可作为OSAC进展和预后的标志物，深入研究细胞因子和MMP将有助于阐明卵巢癌的发病机制,协助临床诊断和预后评估, 并能为OSAC的早期诊断和治疗提供新的线索和途径。