动物类中药材稳定性研究中适宜条件的选择-以水蛭、地龙为例*

马旭彤，刘羿廷，张 瀛，张立强，皮佳鑫，刘志东

（1.天津中医药大学，天津 301617；2.天津中医药大学中医药研究院，天津 301617；3.天津中医药大学，现代中药发现与制剂技术教育部工程中心，天津 301617，4.牡丹江友搏药业有限责任公司，牡丹江 157000）

稳定性是药品必须具有的基本属性，是其质量可控性的主要内容之一。中药材质量问题较为复杂，除采收期和采收年限影响其质量外，在生产、贮存、使用过程中会导致药材发生变质，从而降低疗效或产生有毒物质。故稳定性也是直接影响中药材、中药饮片和中成药的临床疗效的重要环节之一。

动物类中药材，指来源于动物的干燥体、除去内脏的动物干燥体、部分器官、病理或生理产物等药用中药材，是中药材的重要组成部分，具有强心、镇静、抗血栓、抗惊厥等作用[1]，体现独特的药用价值。目前，中药材稳定性多聚焦在植物药，通常以植物药中主要有效成分、特殊成分为依据，检测不同储存条件下有效成分的含量，通过比较含量变化得到药材稳定性结论。然而，动物类中药材稳定性研究基础薄弱，缺乏针对动物药易腐败变质特点的稳定性评价手段。因此，如何能结合动物类中药材温度敏感及湿度关联性大的特点，制定符合目前动物类中药材应用实际的稳定性实验方法与指标，是解决动物类中药材质量控制问题的关键。

水蛭和地龙是疏血通注射液的主要成分，也是临床常用的动物类中药材。课题组前期依据稳定性研究指导原则，进行了稳定性实验，发现常规条件下，水蛭和地龙药材在短时间内即出现发霉变质现象，导致稳定性实验无法进行。因此，文章对实验条件进行了优化，设定了更为温和的实验条件，进一步开展了水蛭、地龙药材稳定性补充研究，为动物类中药材选择适宜条件开展稳定性研究提供重要实验依据。

1 仪器与药品

1.1 仪器 十万分之一天平（梅特勒托利多国际贸易有限公司，型号XP205）；pH计（德国Sartorius公司，型号PB-10）；离心机（赛默飞世尔科技公司，型号SORVALLST16RCentrifuge）；电热恒温水浴锅（天津泰斯特仪器有限公司，型号DK-98-ⅡA）；马弗炉（天津中环电炉股份有限公司，型号SX-G07123）；电热鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂，型号BG2-140）；安捷伦高效液相色谱仪（美国安捷伦公司，Agient1260型高效液相色谱仪）。

1.2 试药和试剂 水蛭（批号171207，181101，181202）、地龙（批号171015，171016，171017）药材由牡丹江友搏药业有限责任公司提供；乙酸乙酯（纯度：99.5%天津市康科德科技有限公司）；硫酸（纯度：96% 天津市大茂化学试剂厂）；盐酸（纯度：38%天津市大茂化学试剂厂）均为分析纯；纤维蛋白原（北京索莱宝科技有限公司）；凝血酶（北京索莱宝科技有限公司）为生物试剂。

2 方法与结果

2.1 实验条件的选择 前期参考药典稳定性实验指导原则，进行了稳定性实验。但由于实验过程中水蛭地龙大量霉变，因此，依据药典稳定性指导原则中对温度特别敏感原料药物的（低温）实验条件以及包装在半透性容器中的药物制剂的（低湿）实验条件，对实验条件进行优化和改变，在更温和的条件下，继续实验。实验条件见表1。

2.2 考察项目及标准 水蛭、地龙为《中华人民共和国药典》一部收载品种，水蛭检测项目包括鉴别、水分、含量测定等，地龙的检测项目包括鉴别、酸碱度、浸出物等，考察项目及标准见表2。

2.3 影响因素实验 在高温实验（温度60℃），高湿实验（相对湿度（75±5）%）和强光照（4 500±500）lx）[2]条件下进行影响因素实验，水蛭结果见下表3；地龙结果见下表4。

2.4 水蛭加速及长期实验结果 水蛭药材在（30±2）℃、相对湿度（65±5）%条件下进行加速实验，在低温条件（6±2）℃、低湿条件[（25±2）℃，相对湿度（40±5）%]下进行长期实验，实验结果如表5。

结果显示，由于批间差异及质量变化，水蛭药材水分、总灰分、指纹图谱等稳定性实验结果数据存在波动情况。加速实验中，水蛭药材3批样品在温度（30±2）℃、（相对湿度 65±5）%的条件下放置6个月，药材性状、薄层鉴别、水分、总灰分、酸不溶性灰分、指纹图谱以及含量均符合药材质量标准规定；长期实验中，在低温条件（6±2）℃和低湿条件（温度（25±2）℃，相对湿度（40±5）%）下进行长期实验，放置9个月，各项检验结果均符合水蛭药材质量标准规定。

2.5 地龙加速及长期实验结果 地龙药材在（30±2）℃、相对湿度（65±5）%条件下进行加速实验，在低温条件（6±2）℃、低湿条件[（25±2）℃，相对湿度（40±5）%]下进行长期实验，实验结果如表6。

结果显示，由于批间差异及质量变化，地龙药材水分、总灰分、指纹图谱等稳定性实验结果数据存在波动情况。加速实验中，地龙药材在加速条件[温度（30±2）℃、相对湿度（65±5）%]下放置 6 个月，药材各项指标均符合质量标准规定；长期实验结果表明，在低温条件（温度（6±2）℃和低湿条件[温度（25±2）℃，相对湿度（40±5）%]下进行长期实验，放置9个月，各项检验结果均符合地龙药材质量标准规定。

表1 实验条件的选择

表2 考察项目及标准

表3 水蛭影响因素实验结果

表4 地龙影响因素实验结果

3 讨论

动物类中药材是中药材的重要组成部分。《中华人民共和国药典（2015版）》共收载102味动物类中药材，其中一部收载动物类中药材55味、提取物1种及含动物的药制剂458种，占全部品种的18%[3]。此外，《现代中药大辞典》收载740种动物类中药材，《中华本草》收载1051种动物类中药材[4]。

水蛭和地龙为《中国药典（2015版）》一部收载的品种。水蛭俗称蚂蟥，主要成分为水蛭素、组织胺等[5]，有抗凝、抗血栓等作用[6]；地龙是蚯蚓的干燥体，主要成分有蚯蚓素、地龙毒素，有抗凝血、降压等作用[7]。由于受到人工粗放式养殖，加工工艺落后及技术缺陷的限制，水蛭、地龙等动物类中药材质量存在诸多问题，因其对温湿度敏感，储存条件不佳会影响其临床疗效，故以之为例进行稳定性实验研究，可为动物类中药材选择适宜条件开展稳定性研究提供重要实验依据。

中国现行的稳定性实验指导原则为《中国药典（2015版）》第四部中《9001原料药物与制剂稳定性实验指导原则》，但是，现有稳定性研究实验条件与动物类中药材实际储存条件相差较大，同时，由于缺乏关于温湿度敏感的动物类中药材稳定性研究的指导原则、法规标准和相关数据，导致一些动物类中药材全生命周期的质量可控性差，严重影响其临床疗效及应用。因此，如何结合动物类中药材自身特点，选择适宜动物类中药材稳定性研究的条件，为该类药材的生产、包装、贮存、运输以及制定有效期提供科学依据，是深入研究动物类中药材的关键。

表5 水蛭加速及长期实验结果

表6 地龙加速及长期实验结果

课题组前期进行了稳定性实验，考察了水蛭、地龙在药典规定的常规条件所下出现的质量波动和变化情况。影响因素实验中，在相对湿度90%的高湿条件下，水蛭、地龙霉变率达100%；加速实验条件，即在温度 40℃±2℃、相对湿度（75±5）%的条件下放置6个月，水蛭、地龙药材从1个月开始出现霉变；此外，在温度 30℃±2℃、相对湿度（65±5）%的条件下放置12个月，水蛭药材个别批次在3个月到9个月也会出现大量霉变。前期结果表明，高湿条件对水蛭地龙药材保存影响较大，常规实验条件不适宜开展水蛭、地龙的稳定性研究，应更改实验条件以保证药材质量。

根据前期结果，并参考指导原则中对温度特别敏感原料药物的（低温）实验条件以及包装在半透性容器中的药物制剂的（低湿）实验条件，对实验条件进行优化和改变，以期在更为温和的实验条件下，考察药材质量的稳定性。结果表明，在优化的实验条件下，水蛭、地龙未出现霉变及变质情况，且稳定性良好，质量可控，故可以此为基础，为动物类中药材选择适宜条件开展稳定性研究提供重要实验依据。

4 结论

本文对水蛭、地龙药材开展稳定性研究。在实验条件下，水蛭地龙质量稳定可控。故可以采用在（30±2）℃，相对湿度（65±5）%的加速条件以及低温条件[（6±2）℃]、低湿条件[（25±2）℃，相对湿度（40±5）%]作为动物类中药材的稳定性研究条件。也可作为其他动物类中药材相关质量研究和稳定性研究的重要参考。