HPLC同时测定附子理中丸（大蜜丸）中果糖和葡萄糖的含量

2020-08-22武红娜王晓琦潘海霞

食品与药品 2020年4期

武红娜，王晓琦，潘海霞

（沧州市食品药品检验所，河北沧州 061000）

附子理中丸是甲类非处方药，出自宋代《惠民药局方》，具有温中健脾的功效，用于脾胃虚寒、脘腹冷痛、手足不温等症[1-4]，临床应用广泛。目前，附子理中丸有大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸和浓缩丸4种剂型，其中大蜜丸、小蜜丸和水蜜丸3种剂型均收载于《中国药典》2015年版一部，由附子（制）、干姜、炒白术、党参和甘草5味药加炼蜜制成[1]。

炼蜜是由蜂蜜炼制而成，作为蜜丸中常用的辅料，据调查目前市场上不排除存在劣质蜂蜜制丸的现象[5-6]。现行标准中未对辅料蜂蜜质量进行控制，故拟建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定附子理中丸（大蜜丸）辅料蜂蜜中葡萄糖和果糖成分，以期为附子理中丸及同类药品的质量控制提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC20AT型 HPLC仪，RID-10A检测器（日本岛津公司）；LC350A型超声波处理器（济宁市鲁超仪器有限公司）；CP225D型十万分之一电子天平（德国赛多利斯公司）； Milli-Q Advantage A10型超纯水仪（美国Millipore公司）。

1.2 试剂与试药

果糖对照品（批号：100231-201807），D-无水葡萄糖对照品（批号110833-201707，中国食品药品检定研究院）；乙腈（色谱纯），醋酸（色谱纯），磷酸（纯度85 %，默克公司）；其他试剂均为分析纯，水为纯化水（自制）。附子理中丸（大蜜丸）15批次，来自我省11个地市，产自全国各地不同企业。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

流动相：乙腈-水（85:15），流速0.8 ml/min，以Prevail Carbohyrate ES为色谱柱，柱温25 ℃，示差折光检测器检测。理进样体积15 μl。理论板数：按果糖峰计应不低于2000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照溶液的制备取果糖、D-无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加40 %乙腈，分别制成每1 ml含果糖15 mg、D-无水葡萄糖16 mg的溶液，摇匀，滤过，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品剪碎，取约2.0 g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入40 %乙腈50 ml，密塞，称定重量，超声处理20 min，放冷，用40 %乙腈补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液按附子理中丸的处方比例和生产工艺制备缺炼蜜的阴性样品，并按2.2.1项下方法制成阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验精密量取2.2项下对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各适量，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录色谱（见图1）。由图1可见，供试品溶液主峰与对照品溶液主峰保留时间一致，阴性对照溶液无干扰，说明本方法专属性良好。

图1 HPLC图谱

2.3.2 线性关系考察分别配制果糖、D-无水葡萄糖系列浓度混合对照品溶液，使其每1 ml分别含果糖5.0001，10.0002，15.0005，20.0073，25.0013 mg，D-无水葡萄糖5.3337，10.6669，16.0002，21.3341，26.6673 mg。精密吸取系列浓度混合对照品溶液各15 μl，按上述色谱条件测定，记录色谱图，以峰面积（Y）对进样量（X，μg）进行线性回归。果糖回归方程为：Y=3.07523X+0.18501，相关系数r=0.9998，结果显示果糖在75.0015～375.0150 μg范围内线性关系良好。葡萄糖回归方程为：Y=3.2692X+0.1175，相关系数r=1.0000，结果显示葡萄糖在80.0015～400.0075 μg范围内线性关系良好。

2.3.3 精密度试验精密吸取2.2.1项下同一对照品溶液15 μl，连续进样6次，按2.1项下色谱条件测定，结果果糖、葡萄糖峰面积RSD分别为0.5 %，0.9 %，说明本方法精密度较高。

2.3.4 稳定性试验按2.2.2项下方法制备附子理中丸（2号企业，批号为180101）的供试品溶液，进样分析。于2，4，8，12，24 h后分别再次进样分析，记录并比较果糖、葡萄糖含量的变化，评价样品溶液中果糖、葡萄糖室温放置不同时间的稳定情况。结果6个检测点果糖、D-无水葡萄糖峰面积的RSD分别为0.3 %，0.1 %，表明果糖、葡萄糖在室温放置24 h内稳定性良好。

2.3.5 重复性试验取同一批号样品附子理中丸（2号企业，批号：180101）6份，按2.2项下方法制备对照品和供试品溶液，进样分析，记录并比较果糖、葡萄糖含量的变化。结果6份样品的果糖、D-无水葡萄糖的RSD为分别为0.6 %，0.5 %（均小于2 %），表明该方法重复性良好。

2.3.6 回收率试验取已知含量的附子理中丸（2号企业，批号：180101）样品约1.5 g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，共9份，按样品含量的50 %，100 %，150 %，分别加入3个不同浓度果糖、D-无水葡萄糖的混合对照品溶液（每个浓度 3 份），按2.2.2项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率。结果平均回收率分别为100.03 %，99.34 %，RSD分别为1.33 %，1.42 %，表明该方法回收率良好，结果见表1。

2.4 样品测定

精密称取15批次附子理中丸（大蜜丸）样品各2份，分别按2.2项方法制备对照品溶液和供试品溶液，分别按2.1项色谱条件测定果糖和葡萄糖的含量，以外标法计算样品含量，结果见表2。附子理中丸果糖与葡萄糖总量在23.9 %～50.8 %之间，果糖与葡萄糖比值分别在0.65～2.11之间。

3 讨论

蜂蜜是附子理中丸（大蜜丸）的主要辅料，具有润肠降压、保护肝脏、增强免疫力的效果[7]，主要成分有蛋白质、糖类、维生素、多酚类和矿物质等。作为一个复方药物，附子理中丸成分复杂，因此本研究对提取方式和指标成分均进行了优化选择。

3.1 指标成分的选择

2015年版《中国药典》一部规定，蜂蜜中果糖和葡萄糖的总含量不得低于60 %，果糖与葡萄糖含量比值不得小于1.0[1]。因此，糖类成分为蜂蜜质量考察的重要指标[8-9]。本研究根据上述标准及样品测定结果，结合制剂工艺等因素，拟定附子理中丸（大蜜丸）果糖、葡萄糖总量（%）不得少于31.4 %，比值不得小于1.0 %，与药典标准统一。