石龙芮的生药学研究

张莹， 陶梁春， 姜路晴， 吕惠子

( 延边大学 药学院， 吉林 延吉 133002 )

石龙芮为毛茛科植物石龙芮(RanunculussceleratusL.)的干燥全草，朝医称之为铜罐草.《朝药志》中记载，石龙芮主要用于治疗痈疖肿毒、瘰疬结核、疟疾、下肢溃疡、肾虚、痢疾等症[1].现代研究表明，石龙芮具有抗炎[2]、抗菌[3-5]、抗寄生虫[6]等药理活性，临床上用于淋巴结结核、疟疾、风湿性关节痛、蛇咬伤等[7].还有研究表明，用鲜石龙芮可以治疗食道癌与乳腺癌[8].目前，对石龙芮的研究多是对其化学成分的研究[9-11]，而对其性状、微米显微特征等生药学方面的研究较少[12-13].为此，本文进一步研究石龙芮的生药学特征，为制定其质量标准提供科学参考.

1 实验仪器与材料

1.1 实验仪器

BDS400倒置生物显微镜，重庆奥特光学仪器有限公司； KQ5200型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司； JYD -325B生物组织石蜡切片机，金华市宇典医疗器械厂； FA2004电子天平，上海良平仪器仪表有限公司； RRH-100万能高速粉碎机，上海缘沃工贸有限公司.

1.2 实验材料

硅胶GF254薄层板，烟台江友硅胶开发有限公司；β-谷甾醇，上海源叶生物科技有限公司(纯度≥98%，批号HS237710198)；水合氯醛、无水乙醇、95%乙醇、二甲苯、石油醚、乙酸乙酯、浓硫酸均为分析纯，辽宁泉瑞试剂有限公司；石蜡，上海华灵康复器械厂(批号20130415)；番红染料、固绿染料，上海化学试剂采购供应站；中性树胶，上海标本模型厂；中药筛(380 μm)，杭州同祺仪器有限公司.采集的10批石龙芮经延边大学药学院李镐教授鉴定确认，并将标本存放在延边大学药学院朝药标本室.石龙芮的采集时间和地点(GPS定位)如表1所示.

表1 10批石龙芮药材信息

2 方法与结果

2.1 基源考证

石龙芮首次记载于《神农本草经》：“主风寒湿痹；心腹邪气；利关节；止烦满.久服轻身明目，不老，生川泽石边.”[14]与毛茛科石龙芮“全草含原白头翁素，有毒，药用能消结核、截疟及治痈肿、疮毒、蛇毒和风寒湿痺”[15]的功效对比可知，《神农本草经》中记载的石龙芮不是毛茛科石龙芮.

汉代《名医别录》中记载的石龙芮为：“上品，生于山川泽石旁，五月五采子，二月、八月采皮阴干，无毒.”[16]而毛茛科石龙芮为水生草本，植株细小，不仅无法采皮，而且因其含有原白头翁素，所以有剧毒.由上述可知，《名医别录》中记载的石龙芮并非是毛茛科石龙芮.

唐代《新修本草》中记载的石龙芮为：“俗名水堇，苗似附子，实如桑椹，故名地椹.生于湿地，五月熟，叶子味皆辛.”[17]从石龙芮的性状和生境来看，它与毛茛科石龙芮相符.《本草拾遗》中记载的石龙芮为：“水茛，叶圆而光，有毒，生水旁.”[18]该书证实了《新修本草》中记载的水堇为毛茛科石龙芮.

宋代《本草图经》中记载的石龙芮为：“今惟出兖州，一丛数茎，茎青紫色，每茎三叶，其叶芮芮，短小多刻缺，子如葶苈而色黄，生水边石上.”[19]《本草衍义》中记载的石龙芮为：“陆生者叶有毛，而末锐.陆生者又谓之天灸，取少叶系臂上，一夜作大泡，如火烧.”[20]该书所记载的石龙芮的毒性与文献[21-22]报道的内容(毛茛属植物石龙芮含原白头翁素，有剧毒，刺激性极强，与皮肤接触可导致严重的炎症和水泡)一致.由此可知，《本草图经》和《本草衍义》中记载的石龙芮为毛茛科石龙芮.

明代《本草纲目》中记载的石龙芮为：“生近水下湿地，高者尺许，其根如莽，三月生苗，丛生，圆茎分枝，一枝三叶，叶青而光滑，有三尖，多细缺，四、五月开黄花，结小实，大如豆，状如初生桑椹，青绿色，搓散则子甚细，如葶苈子.”[23]从上述植物形态表述表明，书中所记载的植物为毛茛科石龙芮.

清代《植物名实图考》中记载的石龙芮为：“今处处有之，性状正如水堇，生水边者肥大、平原者瘦小，其实亦能灸疟.”[24]从上述内容可知，该书所记载的石龙芮为毛茛科石龙芮.

综上所述，汉代记载的石龙芮并非是毛茛科石龙芮，而自唐代开始记载的石龙芮为毛茛科石龙芮，并沿用至今.

2.2 药材性状

对采集的石龙芮进行性状研究显示：石龙芮须根细长(5～7 cm)，呈白色，质较软；茎表面光滑无毛，质坚韧不易折断，直径为5 cm～1 mm；茎中空，呈浅绿色，断面呈黄白色；叶呈绿色，形态皱缩或卷曲；花呈黄色；气微，味苦.辛石龙芮的上述性状与文献[25]的表述一致.石龙芮的性状见图1.

2.3 石龙芮的显微鉴别

取石龙芮根、茎、叶，对其进行制片(利用传统石蜡切片法)和染色(番红-固绿混染法).将整株植物研磨成粉末，过中药筛(380 μm)后将其制成水合氯醛装片.在显微镜下观察石龙芮根、茎、叶的组织结构及粉末特征.

2.3.1根横切面的显微特征 图2为石龙芮根的横切面放大10倍和40倍的图.由图2可以看出：石龙芮根的横切面呈圆形；表皮细胞由一层大小不等的细胞组成；皮层由5～8层的薄壁细胞组成，排列疏松；内皮层的细胞较小，且排列不整齐；辐射型维管束多为三原型；木质部与韧皮部相间排列.上述石龙芮根的横切面特征与文献[12]中的表述一致.

2.3.2茎横切面的显微特征 图3为石龙芮茎的横切面放大10倍和40倍的图.由图3可以看出：石龙芮茎的横切面呈圆形，有髓腔；表皮细胞由一层呈圆形的细胞组成，排列紧密，近表皮处皮层存在大量的通气组织，有非腺毛；皮层薄壁细胞排列紧密，大小不一；维管束呈外韧型，多数存在，且大小不一，环状排列；木质部导管呈圆形；韧皮部细胞排列整齐.上述石龙芮茎的横切面特征与文献[13]中的表述一致.

2.3.3叶横切面的显微特征 图4为石龙芮叶的横切图放大40倍的图.由图4可以看出：石龙芮叶的表皮细胞为一层，上表皮细胞略大于下表皮细胞，且上下表皮均有气孔分布；栅栏组织为一列，呈长柱形，排列疏松；海绵组织排列稀疏，无规则，且多数有空腔存在；无厚角组织；维管束呈外韧型，多处存在；木质部呈半圆形，导管不规则排列；韧皮部细胞较小，排列紧密.

2.3.4粉末的显微鉴别 图5为石龙芮的粉末特征图(放大40倍).由图5可以看出：石龙芮的粉末呈深绿色；叶表皮细胞为多角形，呈波状弯曲；气孔为不定式；非腺毛较多，由单细胞构成；纤维较多，成束或散生，较长(可达300 μm)；螺纹导管、网纹导管和环纹导管较多；花粉粒(淡黄色)较多，呈圆形或类圆形，直径为25～30 μm，且花粉粒中有3孔沟和颗粒状的小雕纹；草酸钙簇晶较多；石细胞呈圆形或近圆形，较少，单个存在；淀粉粒较少；有厚壁细胞存在，呈多角形.

2.4 薄层色谱鉴别

依据《中华人民共和国药典：一部》[26]采用TLC鉴定石龙芮的理化性质.供试品溶液的制备：取10批石龙芮药材粉末各0.4 g，分别加入石油醚10 mL，超声提取30 min；过滤，滤液浓缩，备用.对照品的制备：取β-谷甾醇，加甲醇制成200 mg/L的对照品溶液，备用.点样、展开及显色：用毛细管吸取供试品溶液与对照品溶液各5 μL，点于同一硅胶GF254薄层板上.以体积比为6∶1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，用体积分数为10%的硫酸-乙醇溶液显色.

图6为石龙芮的薄层色谱图，图中S为β-谷甾醇对照品，1—10为各批石龙芮的供试品.由图可见，10批供试品在日光下均可见到6个清晰的斑点，重复性好，且未出现边缘效应及拖尾现象.供试品色谱中所显斑点的位置与对照品色谱所显的斑点一致，经测定其Rf值为0.3.

3 结论

本文经对石龙芮进行系统的生药学研究发现，其鉴别特征为：须根呈白色，质柔韧；茎表面光滑无毛，质坚韧不易折断；茎中空,呈浅绿色，断面呈黄白色；叶皱缩或卷曲；气微，味苦，辛.粉末呈深绿色，气孔为不定式，非腺毛较多；花粉粒为淡黄色，呈圆形或类圆形，并有颗粒状小雕纹；草酸钙簇晶较多.薄层色谱鉴别中，10批测试样品均在相同的位置出现清晰的斑点，且重复性好.本文研究结果可为制定石龙芮的药材质量标准提供科学依据.今后我们将利用高效液相色谱法对石龙芮的成分做进一步测定.