血管生成素样蛋白8与冠心病患病及严重程度的相关性

武 悦，马 宾，刘进军，李 静，佘剑雄，耿 旭，宣 玲

(蚌埠医学院第一附属医院 1.心血管内科；2.医学检验科；3.急诊内科，安徽 蚌埠 233004)

CHD是心血管疾病最常见的形式之一，其主要病理过程是动脉粥样硬化，有证据表明，血脂异常及糖耐量异常与心血管病的发病密切相关[1]。尽管再灌注及药物可有效治疗CHD，但其仍是我国国民患病死亡的主要原因，且呈上升趋势[2]。因此，CHD的早发现、早诊断、早治疗对改善患者的远期预后和生活质量具有重要的临床价值，故而寻找与冠心病发病相关的危险因素、有意义的预测标志物以及有效的防治措施，成为目前研究者们的关注和探讨的重点。ANGPTL8是最新发现的一种营养依赖型脂肪生成因子，是餐后脂肪酸运输和储存到脂肪组织的潜在中介，通过与脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase，LPL)结合，参与调节TG代谢[3-4]。另外，Niki等的研究表明ANGPTL8水平与颈动脉壁厚度呈正相关[5]。然而，近年来相关研究表明血浆ANGPTL8水平与脂代谢及葡萄糖代谢之间的关系仍存在争议，关于血浆AMGPTL8水平与冠心病的相关仍较少。因此本研究旨在进一步探索血浆ANGPTL8与脂代谢的相关性，了解其与冠心病患病及严重程度的相关性。

1 资料与方法

1.1 研究对象回顾性分析2018年10月至2019年4月间就诊于蚌埠医学院第一附属医院心血管内科并接受冠状动脉造影的患者。根据中华医学会心血管病学分会修订的2007冠心病诊断与治疗指南[6]将研究对象分组，对照组(control，CON)为冠脉管腔未见明显狭窄的患者，共40例，年龄50～80岁，平均年龄(63.30±8.41)岁；CHD组共145例，年龄46～81岁，平均年龄(65.11±9.06)岁。纳入标准：主诉为胸痛入院，完善相关辅助检查，排除手术禁忌症后，行冠状动脉造影术者。排除标准：(1)往有心肌梗死病史，或有冠状动脉介入治疗史或冠状动脉旁路移植手术史；(2)其他心血管疾病，如心功能不全、心脏瓣膜病、心肌炎等；(3)肝肾功能不全；(4)恶性肿瘤；(5)近期有创伤或手术病史；(6)近期有妊娠或哺乳史。

1.2 冠心病的诊断标准根据美国心脏病协会的诊断标准[7]，心外膜下冠状动脉包括：左主干(left main coronary artery，LM)、左前降支(left anterior descending branch，LAD)、左回旋支(left circumflex，LCX)、右冠状动脉(right coronary artery，RCA)，其中任何一支血管的狭窄程度≥50%均可诊断为CHD。本研究经蚌埠医学院第一附属医院伦理委员会同意批准，所有研究对象在入选前均已告知并签署之情同意书，本次研究遵从赫尔辛基宣言。

1.3 资料收集及指标测定记录研究对象的一般资料和重要既往史，包括性别、年龄、高血压、糖尿病等病史。留取研究对象空腹8h的静脉血标本5mL并在室温下静置30min，以3000r/min的速度将血浆离心15min，收集上清分装于500μL EP管中，于-80°C超低温冰箱中冷藏，避免反复冻融，保证同批次检测。按照蚌埠医学院第一附属医院检验医学科标准，对FBG、FIB、TC、TG、HDL、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein，LDL)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterin，LDL-C)、CRP水平等进行测定。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中ANGPTL8浓度，ELISA试剂盒由武汉伊艾博科技有限公司提供，批内及批间变异系数分别<5%和<10%，检验过程严格按试剂盒和仪器操作说明书进行。

1.4 狭窄程度评价住院期间经桡动脉或股动脉行冠状动脉造影术，将冠状动脉管腔狭窄≥50%或LM狭窄i>50%诊断为CHD。将LM、LAD、LCX和RCA定义为主要冠状动脉。根据1984年美国心脏协会规定的冠状动脉血管图像分段评价标准和Gensini评分系统对每支血管狭窄程度进行定量分析[8]。

1.5 统计学方法采用SPSS 23.0软件进行统计分析，符合正态分布的计量资料以“均数±标准差”表示，两组间比较行t检验，多组均数比较采用单因素方差分析，计数资料采用频数和百分比(n，%)表示，行卡方检验。各变量间相关性采用Pearson相关分析和多元线性回归分析及多因素logistic回归分析。以性别、年龄、糖尿病患病率、血浆ANGPTL8浓度等相关因素为自变量，是否患有冠心病为因变量，评价CHD发病的危险因素。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般临床资料与生化指标CHD组与CON组在年龄(P=0.252)、性别(P=0.860)、FIB(P=0.060)、TC(P=0.255)、LDL(P=0.061)、LDL-C(P=0.074)等方面差异均无统计学意义；CHD组高血压病患病率(P=0.045)、糖尿病患病率(P=0.001)、FBG(P=0.005)、TG(P=0.023)、CRP(P=0.021)、血浆ANGPTL8浓度(P=0.000)等均高于CON组，差异有统计学意义，CHD组HDL(P=0.002)低于CON组，差异有统计学意义，见表1。两组间血浆ANGPTL8浓度的比较见图1。

图1 组间ANGPTL8水平的比较

表1 各组一般资料及临床指标的比较

2.2 血清ANGPTL8与一般资料及临床指标的相关性分析多种临床指标与血浆ANGPTL8表达显著相关，其中Gensini评分、性别、年龄、糖尿病患病率、TG、LDL、LDL-C、CRP等与血浆ANGPTL8浓度呈正相关(r值分别为0.835、0.190、0.356、0.199、0.204、0.198、0.169、0.225，P<0.05)，HDL与血浆ANGPTL8浓度呈负相关(r值为-0.241，P<0.05)见表2。血浆ANGPTL8浓度与Gensini评分的相关性见图2。

表2 ANGPTL8与各观察指标的相关性分析

图2 ANGPTL8水平与Gensini评分的相关性

2.3 血清ANGPTL8浓度与Gensini评分的多元线性回归分析以Gensini评分为因变量，以ANGPTL8浓度、性别、年龄、高血压病患病率、糖尿病患病率、FBG、FIB、TC、TG、等作为自变量，进行多元线性回归分析。结果表明，HDL、ANGPTL8与Gensini评分有线性回归关系，且独立于年龄、性别、FBG等影响因素之外，见表3。

表3 血清ANGPTL8水平与Gensini评分的多元线性回归分析

2.4 多因素Logistic回归分析以性别、年龄、糖尿病患病率、FIB、TG、HDL、LDL-c、ANGPTL8浓度为自变量，以是否患有CHD为因变量，结果示，性别与CHD发病相关联，男性更易患病；HDL与CHD发病呈负相关；FIB及ANGPTL8浓度与CHD发病呈正相关，见表4。

表4 冠心病相关预测因素的多因素logistic回归分析

3 讨论

ANGPTL8是ANGPTLS家族的非典型成员，缺乏N端卷曲螺旋结构域和C端纤维蛋白原结构域，又名GM6484、RIFL、lipasin和betatrophin，ANGPTL8主要表达在肝脏以及脂肪组织[9]，在本研究中，血浆ANGPTL8水平在冠心病患者中较无冠心病患者显著升高，且与冠心病的严重程度相关，该严重程度体现在Gensini评分(即狭窄血管及节段)，另外，血浆ANGPTL8水平与TG及糖尿病患病率存在正相关。

血脂异常是动脉粥样硬化性心血管疾病(Cardiovascular disease，CVD)的独立危险因素[10]。近年来，基于全基因组关联研究提示ANGPTL8在脂质代谢中起了重要作用[11]。除此之外，Wang Y等人提出[12]，ANGPTL8敲除的小鼠在饲喂状态下TG水平较低，但在禁食状态下并未降低。一项前瞻性队列研究显示，240名韩国儿童空腹ANGPTL8水平与空腹TG水平呈正相关[13]。本研究得出，CHD组TG明显高于对照组，且与ANGPTL8浓度呈正相关，而LDL明显低于CON组，且与ANGPTL8呈负相关，这表明ANGPTL8可能通过作用于TG或者HDL影响血脂代谢，从而参与CHD的发病。

CHD往往会伴随糖尿病、脂代谢紊乱等合并出现，其中较常见的是CHD合并糖尿病。糖尿病患者并发动脉粥样硬化的具体机制尚不完全清楚，因此，识别与2型糖尿病并发动脉粥样硬化相关的新型生物标志物及其潜在机制至关重要。许多国外研究均提示，ANGPTL8具有显著的促进胰岛β细胞增殖的功能，例如Kugelberg E[14]和Lickert H[15]研究报道，ANGPTL8与2型糖尿病发展中的两个重要过程——胰岛素抵抗和脂质代谢相关，也可以调节胰岛素抵抗环境下β细胞的复制。Chen X等提出[16]，健康正常人体内ANGPTL8的水平是无差异的，但空腹血糖异常及糖耐量受损的患者血浆ANGPTL8水平有明显差异。然而，Hassan[17]等提出，2型糖尿病患者与正常受试者间的ANGPTL8浓度无明显差异。考虑到ANGPTL8对胰岛β细胞增殖有显著的促进作用，而糖尿病又是冠心病的等危症[18]，所以不能排除ANGPTL8与CHD的发生发展有密切联系，故仍需要进一步实验研究验证，冠心病与ANGPTL8水平间的联系是否通过影响糖代谢起作用。我们的研究发现，CHD组糖尿病患病率及空腹血糖均明显高于对照组，且与血浆ANGPTL8浓度呈正相关，提示血浆ANGPTL8浓度与糖代谢存在密切关系，而血浆ANGPTL8可能通过影响糖代谢从而参与冠心病发病。

大量研究发现动脉粥样硬化除了脂质沉积说法外，血清炎症因子在动脉粥样硬化的发展过程中起着极为重要的作用[19]。CRP是一种时相性的反应蛋白，可以对炎症状况进行及时反映[20]。CRP的含量和冠心病患者的冠状动脉病变相关严重程度存在一定关系[21]。同国内外研究现状一致，本研究结果也显示，冠心病组患者CRP浓度较对照组明显升高，且与血浆ANGPTL8浓度呈正相关。相关原因可能是，CRP参与患者粥样硬化斑块的形成及发展过程，早期动脉硬化斑块中存在CRP聚集现象，于新生内膜的近中膜部位比较显著，CRP对内皮损伤具有促进作用[22]；另外它还会抑制主动脉内皮质细胞中的纤溶酶原激活物的活性，促进血小板黏附，进而加重动脉粥样硬化的狭窄程度，导致病变加重[23]。一项针对代谢综合征受试者的临床研究发现，血浆ANGPTL8与典型炎症标志物高CRP呈正相关[24]。本研究结果亦提示CRP与血浆ANGPTL8浓度呈正相关，故考虑血浆ANGPTL8水平与冠心病发病关系可能通过炎性因素起作用，该结论有待进一步实验证明。

FIB参与凝血过程，除可直接引起血黏度增高外，还可诱导红细胞及血小板聚集，降低血液流动性，影响血流对血管壁的切流速度，刺激血管平滑肌细胞增生，进一步加重动脉硬化和血栓程度。SouadKotbi等[25]发现，血浆FIB水平与冠心病的严重程度呈正相关。本研究结果与其他报道一致，冠心病患者入院时血浆FIB浓度高于对照组，多因素logistic回归分析结果显示，入院时血浆FIB浓度与冠心病患病呈独立的正关联，血浆ANGPTL8浓度一样，可作为冠心病患病的独立预测因素，同时血浆ANGPTL8水平与冠心病发病及冠脉病变严重程度的关系可能。

4 结论

冠心病组血浆ANGPTL8水平较正常对照组显著升高，与Gensini评分呈正相关，提示血浆ANGPTL8浓度可能是冠心病患者冠脉病变严重程度的重要预测因素，且血浆纤维蛋白原浓度及血浆ANGPTL8水平可作为冠心病发病的独立预测因素，临床上可用于冠心病的早期发现与诊断，为冠心病的防治提供了新的研究方向。