慢性肝病患者血清miRNA-122变化及与肝功能、肝纤维化的关系分析

张小燕

陕西省商洛市柞水县人民医院检验科，陕西商洛 711400

肝病是指由于各种原因引起的肝脏组织细胞受到损伤的总称，出现肝病时人体会表现出不同程度的营养不良及代谢紊乱。慢性肝病常由乙醇、药物、肝炎病毒等原因造成，如不及时发现治疗，转为肝硬化的可能性极高，最终形成肝癌，对人类的健康造成严重威胁。临床研究显示，血清微小核糖核酸-122(miRNA-122)在肝脏疾病的发展中起重要作用，可影响脂质、胆固醇代谢及肝细胞的生长周期[1]，同时，对于慢性肝病患者肝纤维化程度有一定影响。为进一步了解血清miRNA-122与慢性肝病患者肝功能、肝纤维化的关系，本研究选取46例慢性肝病患者及40例体检健康者进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2017年3月至2018年4月收治的46例慢性肝病患者为慢性肝病组，另选取同期40例体检健康者为对照组。慢性肝病患者纳入标准：(1)符合慢性肝炎诊断标准[2-3]；(2)可正常交流；(3)自愿参与本项研究并签署知情同意书。排除标准：(1)患有心、肾功能代谢障碍；(2)患有心肌炎、心肌损伤、心肌病等；(3)患有免疫系统、内分泌系统、感染性疾病及恶性肿瘤；(4)拒绝参加此次研究。慢性肝病组患者男31例，女15例；年龄25～60岁，平均(33.63±7.59)岁；疾病分类：病毒性肝炎14例，酒精性肝硬化10例，非酒精性脂肪性肝病6例，肝炎后肝硬化11例，隐源性肝硬化5例；肝纤维化分级：S0级3例，S1级9例，S2级8例，S3级15例，S4级11例，其中S0、S1、S2级为轻中度纤维化，S3、S4级为重度纤维化。对照组男30例，女10例；年龄26～61岁，平均(34.81±7.45)岁。2组研究对象性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2试剂与仪器 试剂盒包括miRNA试剂盒(购自上海康朗生物科技有限公司)、美国ABI ProFlex PCR仪(购自北京安麦格贸易有限公司)、美国GeneCopoeia试剂盒(购自上海伯易生物科技有限公司)。仪器包括东芝120FR全自动生化分析仪，法国STA GO全自动血凝仪，美国雅培CELL-DYN-1800全血细胞计数仪，德国Sigma1-14离心机。

1.3方法 (1)清晨抽取受试者静脉血，利用全自动生化分析仪对丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清清蛋白(ALB)、直接胆红素(DBil)、总胆红素(TBil)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)、AST/血小板计数(PLT)比值指数(APRI)、FIB-4指数等指标进行检测，凝血酶原时间活动度(PTA)、PLT、乙型肝炎病毒基因(HBV-DNA)分别利用血凝仪、血细胞计数仪及PCR仪检测。取部分静脉血分离血清备用。(2)血清miRNA-122检测：利用miRNA试剂盒提取血清总RNA；miRNA-122采用美国ABI ProFlexTMPCR系统进行分析；miRNA-122反转录采用美国GeneCopoeia试剂盒进行反应，将miRNA反转录生成cDNA,所有操作遵循试剂盒说明书进行。根据PCR仪配备系统，得出miRNA-122的Ct值。(3)经患者知情同意，取肝组织进行活检，标本由福尔马林固定、石蜡包埋后进行切片处理，再经HE、Masson双染色，完成后根据Ishak标准进行肝纤维化评估分级。

2 结 果

2.12组相关检测指标比较 慢性肝病组与对照组肝功能相关指标检测差异均有统计学意义(P<0.05)。慢性肝病组血清miRNA-122 Ct值为24.98±0.81，对照组血清miRNA-122 Ct值为21.59±0.48，2组比较差异有统计学意义。见表1。

表1 2组相关检测指标比较

2.2miRNA-122水平与肝纤维化的关系 血清miRNA-122水平与肝纤维化分级呈负相关(r=-0.411，P=0.001)。S0、S1、S2级肝纤维化患者血清miRNA-122水平较S3、S4级患者高(P<0.05)。

2.3慢性肝病患者S3、S4期肝纤维化的独立危险因素分析 以单因素分析中有统计学意义的miRNA-122、AST、PLT、ALB、GGT、HBV-DNA、APRI、FIB-4指数纳入多因素Logistic回归分析。多因素Logistic回归分析结果显示，miRNA-122、AST、PLT、ALB、HBV-DNA、APRI、FIB-4指数是S3、S4期肝纤维化的独立危险因素。见表2。

表2 多因素Logistic回归分析结果

3 讨 论

临床上常用ALT和AST来评估肝功能，这2个标志物用于临床诊断肝损伤有一定限制，不能区分引起慢性肝病的原因。根据JIAO等[4]和SINGH等[5]的研究显示，酒精性肝损伤、药物性肝损伤、乙型肝炎病毒及肝癌等引起的慢性肝病中其miRNA均出现不同程度的变化，以miRNA-122最具代表性。miRNA-122是肝脏的一种特有RNA，其特异性表达占成人肝脏总miRNA的70%，在肝病患者血清中表达量升高，主要作用于mRNA对翻译进程进行干扰[6]。在何雪琴等[7]和何佳等[8]的研究中发现，慢性肝炎、肝细胞癌患者血清中miRNA-122表达量明显上升，而肝星状细胞对肝纤维化有重要影响[9]。

当肝功能受到损伤时，相关凝血因子合成受到阻碍而使得PTA延长，维生素K无法得到纠正，提示肝功能极差。胆红素是肝功能检查的重要指标之一，肝脏疾病发生时，胆红素代谢产生障碍，高水平胆红素易产生细胞毒性对神经系统和大脑造成严重损伤。本研究显示，慢性肝病组的ALT、PTA、DBil、TBil水平明显高于对照组，且miRNA-122 Ct值也高于对照组，miRNA-122和其他指标均可提示肝功能受到损伤，此结果与王伟静等[10]研究结果一致。慢性肝病患者肝纤维化的可能性极高，对患者的治疗具有明显影响作用。本研究中，取肝脏组织进行活检并对肝纤维化程度进行分级发现，S0、S1、S2级纤维化患者其血清miRNA-122水平较S3、S4级纤维化患者较高，提示肝纤维化程度越重，血清miRNA-122水平越低，原因可能是由于肝纤维化程度重的患者正常肝细胞数量减少导致血清miRNA-122水平下降，其抗肝纤维化作用减弱而使肝纤维化加重。