蚯蚓提取液对家蚕生长发育及血淋巴氧化指标的影响

吴永胜， 徐麒麟， 杨家棣， 罗红琼， 杨 雪， 邱时秀， 孙越鸿， 曹雨辰， 齐桂兰*

（1.成都市农林科学院畜牧研究所，四川成都 611130；2.四川农业大学动物科技学院，四川成都 611130；3.乐至县蚕桑局，四川乐至 641500）

蚯蚓又名地龙，为环节动物门寡毛纲的陆栖无脊椎动物，是我国常用中草药之一。近些年，蚯蚓提取物（液）越来越受到关注，其富含多种活性成分如蚓激酶、抗菌肽、蚯蚓素等，具有促生长、解热镇痛、抗炎抑菌、抗癌等多种功效 （吴泽宇，2015）。研究发现饮水中添加稀释300倍的蚯蚓提取物可以提高伊莎佛黑鸡育成期的体液免疫水平（李娟，2018）。蚯蚓提取物可提高小鼠的生长性能，降低料重比，提高血清中 T-AOC、IgG、IFN-γ、IL-6、TNF-α、溶菌酶水平，进而提高小鼠的免疫功能（刘瀚扬，2019）。饲粮中添加蚯蚓提取物可以降低成华猪的料重比，促进蛋白质的合成及利用，降低血清LDH和促炎因子IL-6水平，进而提高机体的抗氧化能力和免疫功能（徐麒麟，2019）。

家蚕（Bombyx mori）是一种重要的经济昆虫，为丝绸产业提供重要的原料，茧丝产量是蚕业生产中最关注的问题（朱巧莹，2015）。桑是家蚕的主要饲料，家蚕5龄期的食桑量占全龄食桑量的85%（王安皆，2008）。桑叶为家蚕提供生长发育及丝蛋白合成所需的营养物质，越来越多的学者用中草药提取液（高玉军，2018）、杀虫剂（李二兰，2016）或重金属（袁红霞，2014）等处理桑叶来研究其对家蚕生长发育、茧丝质量的影响，并深入开展相关机理研究。然而目前鲜见蚯蚓提取液对家蚕生长发育及血淋巴氧化指标的影响，因此本试验用不同稀释比例的蚯蚓提取液原液处理桑叶，初步探究其对家蚕生长发育、蚕茧质量、蚕丝品质及血淋巴中氧化关键指标的影响，旨在为蚯蚓提取液的生产应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料 本试验于2018年春季蚕期在成都市农林科学院畜牧研究所进行。供试品种为871×872，由乐至县蚕桑局提供，1～4龄幼虫常规桑叶育。

蚯蚓提取液原液由成都市农林科学院畜牧研究所研制，蚯蚓为人工饲养的赤子爱胜蚓（Eisenia foetida），蚯蚓提取液用蒸馏水混匀，经自融水解后制备，经检测分析，所制备的蚯蚓提取液原液密度1.048 g/mL，其中氨基酸总量（17种）5.42%、游离氨基酸2.97%、SOD 1289 IU/mL、小肽6.95%，蚯蚓提取液原液置于4℃冰箱保存备用。

1.2 主要试剂 苯基硫脲购自Sigma-Aldrich公司，丙二醛、乳酸脱氢酶和总抗氧化能力试剂盒购自北京奇松生物科技有限公司。

1.3 试验设计 5龄期家蚕幼虫随机分为4个组，每组3个重复，每个重复100头。设置3个蚯蚓提取液原液稀释比例组（EE1、EE2和 EE3），稀释比例分别为50倍、100倍和200倍，蚯蚓提取液原液按比例稀释后按50 mL/kg喷洒新鲜桑叶，稍晾干后给家蚕添食，对照组（CK）则用蒸馏水代替。5龄期家蚕幼虫饥饿4 h后开始添食，每8 h添食一次，进入熟蚕期终止添食，正常条件下上簇营茧。

1.4 指标检测

1.4.1 家蚕生长指标 在家蚕饲养期间，每天观察各组家蚕的基本活动，调查家蚕的蚕体质量及存活率，并及时将死亡幼虫移除。

1.4.2 茧质及丝质 在各组家蚕全部上簇7 d后采茧，从每个重复中随机抽取雌雄茧各10粒，剖茧，分别称量全茧量、茧层量，计算茧层率；从各处理组中称取缫丝测定材料茧1.5 kg，委托四川省农科院蚕业研究所检测丝质相关指标。

1.4.3 血淋巴氧化指标 5龄期第7天，每个重复随机选取家蚕幼虫各10头，用脱脂棉蘸取75%的酒精对家蚕蚕体进行体表消毒，剪去尾角，轻压腹部采集血淋巴于冰浴的离心管中，加入少量苯基硫脲后4℃、8000 r/min离心10 min，取上清置于-80℃冰箱保存备用。采用ELISA试剂盒检测家蚕血淋巴中丙二醛、乳酸脱氢酶、总抗氧化能力水平。具体操作严格按照试剂盒说明书进行，每个样品重复3次。

1.5 数据处理及统计分析 试验数据应用SAS 9.2统计分析软件中的MEANS过程进行描述性统计分析，ANOVA过程进行方差分析和Duncan’s多重比较，结果用“平均值±标准差”表示。P＜0.05表示差异显著，采用GraphPad Prism6软件作图。

2 结果

2.1 蚯蚓提取液对家蚕体质量和存活率的影响由表1可知，与对照组相比，添食蚯蚓提取液稀释的桑叶可提高家蚕的体质量和存活率。50倍稀释组体质量和存活率均显著高于对照组（P＜0.05），100和200倍稀释组体质量显著高于对照组（P＜0.05），但存活率与对照组相比差异不显著（P＞0.05）。

表1 蚯蚓提取液对家蚕5龄幼虫体质量和存活率的影响

2.2 蚯蚓提取液对家蚕茧质的影响 由表2可知，与对照组相比，添食蚯蚓提取液稀释的桑叶对蚕茧全茧量、茧层量和茧层率无显著影响（P＞0.05）。

表2 蚯蚓提取液对家蚕5龄幼虫茧质的影响

2.3 蚯蚓提取液对家蚕丝质的影响 由表3可知，与对照组相比，添食蚯蚓提取液稀释的桑叶组蚕丝品质均有提高。与对照组相比，50、100和200倍稀释组粒茧丝长分别增加了68.1、10.9 m和15.1 m；100和200倍稀释组解舒率分别增加了3.7%和1.9%；50和200倍稀释组茧丝纤度降低了0.084、0.035旦，100倍稀释组茧丝纤度增加了0.049旦；50、100和200倍稀释组解舒丝长分别增加了52.7、46.4 m和31.8 m；50和100倍稀释组出丝率分别增加了1.6%和1.3%；50、100和200倍稀释组蚕丝洁净分别增加了3.12、3.75、1.25 分。

2.4 蚯蚓提取液对家蚕血淋巴氧化指标的影响由图1可知，家蚕5龄期幼虫添食蚯蚓提取液稀释后处理的桑叶，血淋巴中氧化关键指标丙二醛含量和乳酸脱氢酶含量均有降低。其中，100和200倍稀释组血淋巴中丙二醛含量与对照组相比分别降低了38.04%和32.23%（P＜0.05），乳酸脱氢酶含量分别降低了25.65%和35.60%（P＜0.05），50倍稀释组丙二醛和乳酸脱氢酶含量与对照组相比差异不显著（P＞0.05）；各稀释组血淋巴总抗氧化能力差异不显著（P＞0.05）。

表3 蚯蚓提取液对家蚕丝质的影响

3 讨论

本试验结果表明，家蚕5龄幼虫期添食不同稀释比例的蚯蚓提取液后，体质量、存活率及丝质均有所提高，表明蚯蚓提取液可促进家蚕的生长发育。ELISA检测结果显示，与对照组相比，100和200倍蚯蚓提取液稀释组家蚕血淋巴中氧化损伤指标丙二醛和乳酸脱氢酶的水平均有所降低，表明其可以间接提高家蚕的的抗氧化损伤能力。

蚯蚓提取液是从蚯蚓体内提取的混合物，研究表明其具有重要的促生长作用，是一种生物反应调节剂。谢大识等（2008）研究发现日常饮水中添加0.5%和1.5%的蚯蚓提取物后肉鸡的增重效果明显。孙朋朋等（2014）研究表明，仔猪补充料中加入蚯蚓液可促进仔猪生长发育，提高断奶重。本试验研究发现，添食蚯蚓提取液稀释的桑叶可明显提高家蚕的体质量和存活率。这与覃明和等（1988）前期的研究结果相一致。本试验同时研究发现，添食蚯蚓提取液对家蚕全茧量、茧层量和茧层率等茧质指标没有显著影响，但可以提高蚕丝的品质，而覃明和（1989）研究发现蚯蚓提取液具有增强体质，促进丝蛋白积累的作用，其主要经济指标全茧量、茧层量和茧层率均有提高，同时茧层氨基酸总量及构成茧丝蛋白的主要氨基酸含量均有提高，这可能与家蚕品种、试验环境及蚯蚓提取液有关。

丙二醛是膜脂质过氧化终产物，其水平间接反映机体损伤程度，丙二醛水平升高可使生物膜的多不饱和脂肪酸发生氧化反应，并且通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤，导致细胞膜构型、结构和通透性改变，进而诱导氧化应激（米智，2013）。本试验结果显示，添食蚯蚓提取液可降低家蚕血淋巴中丙二醛的含量，这与周亿金等（2009）在小鼠血液和肝脏中的研究结果一致。乳酸脱氢酶是一种细胞质氧化还原酶，可催化乳酸氧化为丙酮酸，是机体病理损伤、炎症反应和氧化应激的标志，其水平常常用于细胞和组织毒理学领域和临床生物学诊断（Akila，2017）。本试验结果显示，添食蚯蚓提取液可降低家蚕血淋巴中乳酸脱氢酶的含量，这与徐麒麟等（2019）在成华猪上的研究结果一致。总抗氧化能力反映了机体清除活性氧的能力，蚯蚓提取液对动物机体总抗氧化能力存在差异性。我们实验室前期研究发现饲粮中添加蚯蚓提取液可以提高小鼠血清中总抗氧化能力，但蚯蚓提取液对成华猪血清中的总抗氧化能力却没有影响。而本试验结果发现添食蚯蚓提取液对家蚕血淋巴中总抗氧化能力没有影响，这一结果表明蚯蚓提取液对动物的总抗氧化能力的影响可能与动物种属有关。

本研究证实了添食蚯蚓提取液稀释处理后的桑叶可促进家蚕的生长发育，间接提高家蚕的抗氧化损伤能力。为蚯蚓提取液在家蚕生产中的应用提供了参考。但是，其分子机制仍有待进一步研究。