榄形风车子萜类提取物对四种癌细胞的增殖抑制作用

张 园 刘绍华 杨 婕 李俊燕 肖志慧 文 检

(萍乡卫生职业学院 江西省萍乡市 337000)

癌症已成为我国疾病死因之首，发病率和死亡率还在攀升。肺癌、胃癌、肝癌、食道癌、结直肠癌，占到了所有癌症死亡的四分之三。目前化学药物抗肿瘤作用确切，疗效显著，但是毒副作用大，长期应用易产生耐药性，所以人们迫切希望找到疗效好且毒副作用小的药物，中药在这方面显示出了明显的优势。风车子属植物的抗肿瘤活性已被多人证实，并且从风车子中提取出的二苯乙烯类风车子抑素已被证实疗效确切。榄形风车子（Combretum olivaeforme Chao）为使君子科、风车子属攀援灌木。风车子属植物我国约有12 种，包括风车子、十蕊风车子、榄形风车子、长毛风车子、崖县风车子等。风车子属植物具有止泻、驱蛔虫、抗炎、抗癌和杀菌等作用[1]。国内外报道的风车子属植物的化学成分主要以二苯乙烯类、三萜化合物及菲类化合物为主。目前还未见榄形风车子抗肿瘤作用的研究，而其他天然药物中萜类化合物抗肿瘤作用明确，所以我们提取了榄形风车子叶片中的萜类化合物，采用MTT 法，检测其对四种癌细胞的体外增殖抑制作用，为进一步的研究提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 材料

全波长酶标HBS-109（上海博升科技有限公司）；细胞培养箱（上海博升科技有限公司）；倒置显微镜（重庆光学仪器厂）；洁净工作台（上海博迅医疗设备厂）；全自动高压蒸汽灭菌锅（上海申安LDZX-50KBS）；可调式移液器（BRAND 公司）；96 孔细胞培养板（Pore 公司）；RPMI1640 培养液、胰酶（Gibco 公司）；四甲基偶氮唑蓝（MTT，Sigma 公司）；超级新生牛血清（杭州四季青生物科技有限公司）；二甲基亚砜（DMSO，天津市化学试剂二厂）。人肺腺癌细胞（SPCA-1）、人肝癌细胞（BEL-7402）、人胃癌细胞（SGC-7901）和人白血病细胞（K562）由中科院上海生物所提供[2]。细胞用含10%胎牛血清、100 μg/ml 青霉素、100 μg/ ml 链霉素、0.2%NaHCO3的RPMI1640 培养液，于37 ℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养。榄形风车子叶片。

1.2 实验方法

1.2.1 榄形风车子中萜类化合物的提取与分离

干燥的榄形风车子叶，粉碎，用70%乙醇回流提取3 次每次1h，减压回收乙醇至无醇味的浸膏。加入适量的水混悬后，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取。石油醚部位用80%乙醇溶解，石油醚萃取，将80%乙醇层减压回收至浸膏。

1.2.2 MTT 法检测萜类提取物对四种癌细胞的增殖抑制作用

以2×104的密度将细胞接种于96 孔板中，培养12h 后加入不同浓度（1μM、10μM、100μM）提取物20μL，另设对照组。分别培养12h、24h、48h 后加入5mg/mL 的MTT50μL，继续培养4h，终止培养，吸去培养液，加入150μL DMSO，避光振荡5min，酶联免疫检测仪OD 值570nm 处测量吸光值，计算抑制率和半数抑制浓度（IC50）。抑制率计算公式：抑制率(%)={[A(对照)-A(给药组)]/A(对照)}×100。

1.2.3 结果统计

每份样本平行测定6 孔，全部数据用SPSS13.0 统计软件包进行统计分析。吸收值以均数±标准差(x±s)表示，采用方差分析比较组间均数差异。

2 结果分析

2.1 实验结果

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2.2 结果分析

数据显示，从榄形风车子中的萜类提取物对四种癌细胞都有较好的抑制作用，并且随着浓度的增加抑制作用都增强。其中对人肺腺癌细胞（SPCA-1）、人肝癌细胞（BEL-7402）和人白血病细胞（K562）的IC50（半数抑制浓度）都小于15μM，抑制效果最好的是人肺腺癌细胞（SPCA-1），IC50 （半数抑制浓 度）为7.31μM。说明该植物中的萜类化合物对人肺腺癌细胞（SPCA-1）的抑制作用最为显著，提示榄形风车子对肺癌具有潜在的治疗作用。可以进行进一步的研究。后期我们会分离出不同的萜类化合物并做结构鉴定，选取其中活性最好的单体化合物进行初步的抗癌机制研究。