XN-2000体液检测模式在浆膜腔积液有核细胞计数中的应用

鲁小龙,徐海波

四川大学华西广安医院 检验科(广安 638000)

浆膜腔积液标本的有形成分分析(如有核细胞计数)目前仍以手工显微镜镜检检测法为常用方法[1]，该方法沿用多年，具有操作过程复杂、重复性差、易受操作者影响、不易标准化等缺点。随着仪器自动化的发展，检验工作者一直在探索利用仪器法检测原理对浆膜腔积液进行检测，但各类报道关于浆膜腔积液检测仪器法检测的结论不一[2-11]。Sysmex XN-2000血细胞分析仪结合多种细胞分析检测技术，采用专门的体液检测通道，是少数可以应用于体液细胞检测的血细胞分析仪之一。本研究收集136例临床患者的浆膜腔积液标本，分别用XN-2000血细胞分析仪的体液模式(以下简称仪器法)和显微镜镜检计数法进行计数(以下简称手工法)，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集2018年1-12月四川大学华西广安医院临床科室送检的各类浆膜腔积液标本136例，其中男83例，女53例;胸水75例，腹水61例。年龄16～93岁；所有标本采集后用EDTA-K2抗凝剂处理，均无肉眼可见的凝块，排除血性、脓性标本，标本采集后，在2 h内完成检测(包括仪器及手工检测)。

1.2 仪器与试剂

Sysmex XN-2000血细胞分析仪(日本Sysmex公司)，原装配套试剂及质控品(稀释液：G9473,溶血剂WNR：A9053，染液WNR：A9083，溶血剂WDF：A9050，染液WDF：9113，溶血剂SLS：A9019，质控品：00781102)，经校准后的改良Neupauer计数板，微量毛细吸管，盖玻片，日本Olympus CX-31双目显微镜，一次性塑料试管，分析纯冰醋酸溶液。

1.3 检测步骤与方法

每份标本收到后分别按以下两种方法进行检测。

1.3.1 仪器法检测 按Sysmex XN-2000血细胞分析仪仪器操作手册进行检测，每次检测体液标本前，仪器切换到手动体液模式，自动进行仪器本底检测，确保检测通道中计数为0，防止携带污染。检测操作同手动检测血细胞样本，上机前充分混匀标本，肉眼观察是否有凝块，防止产生气泡。开盖上机后，按“开始”按钮自动进行细胞计数及分类检测。

1.3.2 手工法检测 由长期从事临床检验的高年资技术人员，按《全国临床检验操作规程》第4版[12]要求，先加冰醋酸1～2滴到小试管内，转动试管使管内壁沾有冰醋酸，后弃去冰醋酸，滴加混匀的浆膜腔积液标本3～4滴进入试管，数分钟后，混匀充入加有盖玻片的计数池，显微镜下按白细胞计数法计数有核细胞数。每份计数样本均计数2次，取均值作为检测结果，最后将有核细胞数结果换算成106个/L。

1.4 分组

以手工法检测有核细胞总数计数结果为参考标准，将所有标本分为A组(≤100×106个/L)和B组(>100×106个/L)两组,A组样本数为29例，B组样本数为107例。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0统计软件对各组数据进行正态分布检验，对不符合正态分布数据进行非参数Spearman双变量相关性分析和配对非参数秩和检验，计算线性回归方程。检验水准α除特别说明外均设定为0.05。

2 结果

2.1 仪器法WBC重复性检测

选择A组和B组中样本各1例，分别代表低值组和高值组，每个标本连续复测11次，去除第1次检测结果，变异系数均<5.0%(表1)。

表1 XN-2000检测WBC精密度

2.2 仪器法和手工法检测浆膜腔积液有核细胞计数结果比较

经正态分布检验分析，两种方法有核细胞计数结果的P值(sig.)在A组中依次为0.007、0.045，在B组中依次为0.000、0.000(P<0.05)，故均不符合正态分布。经非参数相关性分析，A组与B组两种方法的Spearman相关系数分别为0.913、0.998，呈显著性正相关(P<0.001)；两组中仪器法相对于手工法计数结果的线性回归方程为分别为：y=0.945x+8.932，y=1.006x+26.959。仪器法较手工法检测结果偏高，差异均有统计学意义(P<0.05)(表2)。

表2 两组数据配对非参数秩和检验结果(×106个/L)

3 讨论

浆膜腔积液有形成分计数在临床医生诊断漏出液、渗出液，胸腹膜炎症和恶性肿瘤中具有重要意义[12]。手工法计数浆膜腔积液细胞虽然被认定为参考方法[13]，但其缺点也显而易见：手工计数精度差，不同人员重复性差，操作时间长、过程繁琐(人工吸样、充池、沉淀、显微镜调整，离心制片、染色等)，分析过程很难做到标准化，生物安全方面还存在交叉感染风险，不易进行质量控制等[14]。

XN-2000血细胞分析仪体液模式采用直流电阻/射频电阻检测法(RF/DC检测)，液压聚集法(DC检测)、半导体流式细胞细胞计数法、核酸荧光染色法等检测手段，对浆膜腔积液中的有形成分进行计数并分类，标本用量仅需88 μL，反应迅速，从将标本混匀后放入仪器至检测完成的时间不超过2 min；同时无需对标本进行特殊处理(但对于脓性，有凝块的标本，不能用于该仪器的检测，以防堵塞仪器)[14]。此外该仪器还提供直观的散点图及高荧光强度有核细胞(HF)计数等参数，据报道此参数可用于恶性肿瘤脱落细胞的筛查[15-17]。

本研究中两种方法检测结果经正态分布检验，数据均不符合正态分布。经非参数相关分析，A组与B组的Spearman相关系数分别为0.913，0.998，均呈显著正相关(P<0.001)。两组中仪器法相对于手工法线性回归方程依次为y=0.945x+8.932，y=1.006x+26.959。仪器法检测浆膜腔积液的重复性实验中，高低浓度样本均显示具有较好的精密度，在白细胞计数较小时，变异系数较大，较大时，变异系数更小，且都在允许范围之内，这与已报道的相关结果相符[18]，能够满足临床诊疗的需要。由表2可知，A组与B组中两种方法计数结果存在显著性差异(P<0.05)，各组内中位数，25%位数，75%位数均显示仪器法较手工法偏高。经分析造成这种差异有以下几个方面的原因：1)仪器计数的细胞总量大，标本是按1∶50稀释仪器进行检测计数，当细胞数偏低时，还会自动扩大细胞计数量，从统计学角度，会提高结果的精密度与准确性。而手工法计数实际只有1 μL标本的内数量，若遇细胞数多时，还会用冰醋酸进行稀释后再进行计数，会增大误差。2)手工法在稀释、处理，吸样、充池等过程中，会对有核细胞产生破坏，引起计数结果偏低，尤其是充池后时间越长影响越大。但如果充池后立即计数由于细胞分布不均等原因，会引起细胞的计数结果产生偏差。3)样本的黏稠度也会影响计数结果，手工法中因样本黏稠度会导致细胞粘连导致细胞不易充入计数池，还会影响细胞分布不均，而仪器法将样本按50倍稀释后计数，可以克服样本黏稠度的影响。4)样本中脱落的间皮细胞，未成熟细胞，肿瘤细胞和脓细胞等，有成堆成团聚集的现象，分布不均，会影响计数结果。而仪器法采用核酸荧光染色法，可对这类细胞进行分析计数，显示在散点图的右上角高荧光细胞区。结合计数结果与散点图，可对此类细胞进行初步筛查[15-17]。5)手工法中，操作人员对细胞的认识不同和对计数板使用的熟练程度，也会影响计数结果准确性[6,19]。

综上所述，XN-2000血细胞分析仪体液检测模式具有操作简单迅速、结果准确可靠、减少人为操作误差等优点，可应用于浆膜腔积液有核细胞计数检测。但由于浆膜腔积液本身成分复杂和仪器非直接检测形态的特点，故XN-2000血细胞分析仪目前不能完全代替人工镜检。如当仪器出现散点图异常和高荧光细胞增高时，还应手工镜检确认；同时，脓性标本和有凝块的样本由于仪器特点，也限制了其应用。