高效液相色谱法测定黄瓜果实中6-苄基腺嘌呤残留量

2020-08-07袁晓转洛阳市食品药品检验所

食品安全导刊 2020年15期

□ 袁晓转洛阳市食品药品检验所

苄基腺嘌呤（6—BA）是一种植物生长调节剂，属于人工合成细胞分裂素，在水果、蔬菜的保鲜等方面有重要应用。6—BA 在黄瓜种子发芽、幼苗幼果生长等过程中也有应用，可促进黄瓜果实生长发育，提高果实品质和产量[1—2]。但6—BA 具有一定毒性，人体过量摄入会刺激皮肤黏膜，出现食道和胃黏膜损伤、恶心、呕吐等症状[3]。

因此检测黄瓜果实中6—BA 残留量很有必要，蔬菜中6—BA 的检测主要有高效液相色谱法和高效液相色谱—质谱法等方法[4—5]。本试验利用甲醇提取，固相萃取柱净化，高效液相色谱—标准曲线外标法定量，操作简便、准确性好，可用于黄瓜果实中6—BA 残留量的测定。

1 材料与方法

1.1 试剂耗材与仪器

6—苄基腺嘌呤标准品（98.51%，Dr.Ehrenstorfer）；甲醇（色谱级，Dikma）；乙酸铵（色谱级，科密欧）；冰乙酸（分析纯，开封化学试剂总厂）；C18固相萃取柱（1 g/6 mL，上海安谱实验科技股份有限公司）。

U3000 高效液相色谱仪（Thermo）；BSA224S—CW 电子天平（赛多利斯）；3K15 高速冷冻离心机（Sigma）；旋转蒸发仪（IKA）；KQ—400DE 数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；JYL—Y85 高速破壁调理机（九阳）。

1.2 仪器条件

色谱柱：XBridge®C18柱，4.6 mm×250 mm×5 μm（waters）；检测器：紫外检测器；波长：267 nm；流动相：甲醇+乙酸铵溶液（0.02 mol/L）=50+50；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

1.3 标准溶液的配制

准确称取6—BA 标准品0.010 0 g，用甲醇溶解定容至100 mL，混匀，即得浓度为100 μg/mL 的溶液。分别精密量取100 μg/mL 溶液10.0、5.0 mL和2.0 mL，用甲醇定容至100 mL，即得浓度分别为10.0、5.0 μg/mL 和2.0 μg/mL 的标准储备溶液。

分别精密量取2.0 μg/mL 的标准储备溶液5.0、2.0、1.0、5.0 mL 和2.0 mL，用甲醇定容至10、10、10、100 mL 和100 mL，即得浓度分别为1.0、0.4、0.2、0.1μg/mL和0.04 μg/mL的标准溶液。

1.4 样品的制备和测定

称取10 g（精确到0.001 g）均质后的样品于50 mL 离心管中，加20 mL甲醇，超声提取15 min，以10 000 r/min离心10 min，上清液转入200 mL 梨形瓶中，样品再次用20 mL 甲醇超声提取15 min，离心合并上清液，于50 ℃旋转蒸发至尽干，残液以2 mL/min的流速过预先活化好的固相萃取柱，用少量水洗涤梨形瓶，洗液过固相萃取柱，再用5 mL 水洗涤固相萃取柱，去除杂质后用甲醇洗脱并定容至5 mL，混匀后过0.22 μm 微孔滤膜，供检测用。

2 结果与分析

2.1 色谱图

将样品按照“1.2 仪器条件”进样检测，所得图谱如图1 所示，在目标物时间附近不出峰，为阴性样品。将标准储备液按照“1.2 仪器条件”进样检测，目标物在7.490 min 出峰，见图2。

图1 阴性样品色谱图

图2 标准储备溶液（1.989 8 μg/mL）色谱图

2.2 线性范围和检出限、定量限

选取浓度为0.04、0.1、02、0.4、1.0、2.0、5.0 μg/mL 与10.0 μg/mL 的6—BA标准溶液，按“1.2 仪器条件”进样测峰面积，绘制标准曲线，进行线性分析，结果表明该方法在0.04～10.0 μg/mL线性范围内线性良好，见表1。检出限定量限的确定方法：向阴性样品中加入从低到高不同浓度的标准溶液进行测定，以3 倍和10 倍信噪比（S/N）对应的6—BA 浓度作为检出限和定量限。