应用超高效液相色谱－串联质谱法快速准确地测定食品中三氯蔗糖含量

姜云

一、实验部分

1.仪器与试剂。Acquity UPLC-Quattro Premier XETM质谱联用仪；电子天平；高速冷冻离心机为Sigma3-18K型SIR漩涡混合器；HLB固相萃取小柱（3mL/60mg）等。主要的试剂包括甲醇、三氯蔗糖对照物质等。

2.标准溶液的配制。精确称取三氯蔗糖对照品10mg，用甲醇溶解并定容至10mL；配置1.0g/L的标准储备液，通过甲醇-水（体积比45∶55）逐步进行稀释，确保浓度符合标准工作液要求。

3.样品前处理。（1）均匀适量地称取酒类样品，准确加入甲醇-水15mL，旋涡混合1min，超声提取15min，冷冻离心设置成10000r/min，离心10min，利用有机滤膜（0.22μm）过滤上清液，然后利用仪器进行测定。（2）均匀适量地称取乳饮料、乳制品以及果蔬汁等样品，加入超纯水15mL，旋涡混合1min，超声提取15min，冷冻离心设置成10000r/min，离心10min，将上清液全部取出，过Oasis HLB小柱，并通过超纯水（3mL）淋洗上样，将淋洗液全部弃除，通过真空条件进行2min的HLB柱抽干。洗脱环节选择甲醇4.5mL，在洗脱液中加入超纯水5.5mL，混匀后通过有机滤膜（0.22μm）进行过滤，然后利用仪器进行测定。（3）均匀适量地称取冰淇淋、面包、炒货、坚果类样品，加入超纯水15mL，旋涡混合1min，超声提取15min，加入浓度为0.5mol/L的氧化钠溶液1mL，漩涡混匀后加入浓度为0.42mol/L的硫酸锌溶液1.5mL，充分混匀后加入浓度为0.5mol/L的氢氧化钠溶液1.5mL，漩涡混匀，放置静置。冷冻离心设置成10000r/min，离心10min，将上清液全部取出，通过甲醇进行稀释，使其达到试验样品中甲醇和水的体积比45∶55，選择有机滤膜（0.22μm）过滤之后进行仪器测试。

二、结果与讨论

1.方法的线性范围与检出限。通过空白样品提取并配制五个不同浓度的标准工作液，在优化条件下进行测定，进样量5μL，获取质量色谱图，以基质匹配标准工作液中三氯蔗糖的质量浓度（X，μg/L）为横坐标，以定量离子对的峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，回归方程Y=1897.7X-2.22，r=0.9998。结果发现，线性关系较好的范围是0.2mg/L-20mg/L。依据定量离子对和定性离子对的峰面积比值，将0.4mg/kg的三氯蔗糖加入到空白样品后，信噪比S/N为20.15，所以定量下限便以此浓度进行设定。通过这种方法测定食品内三氯蔗糖含量，具有较高的灵敏度。

2.方法的回收率与精密度。选择没有目标分析物的样品，开展加标回收率及精密度试验。将各种浓度的标准物质加入样品后，放置0.5h，让样品均匀吸收标准物质，利用此法开展提取、净化以及测定，回收率和精密度结果见表1。从表1可见，在0.4mg/kg、4mg/kg、10mg/kg的加标水平下，回收率为85%-98%，相对标准偏差处于1.7%-5.0%。试验表明，该方法具有非常稳定的回收率，完全可以进行实际样品测定。