赛北紫堇中的酚类成分及其细胞毒活性研究

南泽东，韩广田，李喜安，任华忠，鱼 江，王寿峰，郭 力

1成都中医药大学药学院 西南道地药材协同创新中心 中药资源系统研究与开发利用国家重点实验室，成都 611137；2乐山职业技术学院，乐山 614000；3四川轻化工大学化工学院，自贡 743000

赛北紫堇Corydalisimpatiens为罂粟科紫堇属植物，彝族药名瓦都，为一年生或两年生草本，全草入药，具有清热解毒、消肿镇痛之功效[1]，生长于海拔1 700 m附近的林下、山坡灌丛下、草丛中或地边路旁。主要分布于内蒙古、甘肃、青海、四川及西藏等地[2]。目前，已有多篇文献[3,4]对该属植物的化学成分及其药理活性进行了综述，表明该属植物主要含有生物碱类成分，之外还含有黄酮、甾体、挥发油等成分，具有广泛的药理活性，如抗肿瘤、抗炎镇痛、抗心律失常、保肝等。由于生长环境、产量等原因，对赛北紫堇的现代研究一直滞后，极大地限制了其药用价值的发挥。目前，已有的对赛北紫堇研究的报道，主要集中在质量标准[5]、含量测定[6]、总生物碱药理活性[7]以及化学成分[8]的研究。为进一步阐明该药材的药效物质基础，本实验采用硅胶柱色谱、凝胶Sephadex LH-20色谱、半制备高效液相色谱等分离技术对赛北紫堇成分进行分离，并采用四甲基唑蓝(MTT)法测定化合物对人肝癌HepG2和SMMC-7721细胞的体外抑制活性。

1 仪器与材料

Bruker-600M、Bruker-400M 核磁共振仪(德国Bruker公司)；Agilent 6320 型质谱仪(美国Agilent 公司)；X-4 型显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限公司制造，温度未校正)；Hanon P850 全自动型旋光仪(济南海能仪器股份有限公司)；LC-3000高效液相色谱仪(北京创新通恒科技有限公司)；Agilent Eclipse XDB-C18(10 mm × 250 mm，5 μm)半制备色谱柱；CO2培养箱(日本SANYO公司)；荧光倒置显微镜(日本Nikon公司)；DNM-9602G型全自动酶标仪(北京普朗新技术有限公司)；BD Transwell 小室(美国Corning公司)；薄层色谱和柱色谱用硅胶(青岛海洋化工厂)，ODS柱色谱材料(德国Merk公司)，Sephadex LH-20(瑞士Pharmacia 公司)；HPLC试剂(美国MREDA公司)，实验过程中所用的乙醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮为分析纯(天津大茂化学试剂厂)。DMEM培养基(美国HyClone公司)；胎牛血清(上海生工生物工程公司)；四甲基唑蓝(美国Sigma公司)。

赛北紫堇药材2016年10月购于西藏拉萨药材市场，由四川省食品药品学校秦运潭副教授鉴定为赛北紫堇Corydalisimpatiens，标本现存于乐山职业技术学院药学系(No.CI201610)。细胞毒活性测试所用的人肝癌HepG2、SMMC-7721细胞由四川大学华西基础医学与法医学院提供。

2 试验方法

2.1 提取分离

干燥赛北紫堇药材15 kg，粉碎后用90%乙醇回流提取3次，每次1 h，合并3次提取液，减压浓缩得浸膏1 kg。取浸膏加适量水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，回收溶剂后分别得到石油醚部位95 g，乙酸乙酯部位260 g，正丁醇部位320 g。采用酸溶碱沉法对260 g乙酸乙酯部位进行处理，将其分散到2 L蒸馏水中，用1 mol/LHCl调PH至3～4，滤去不溶物得酸性部位160 g，然后用1 mol/LNaOH调PH至9～10，得到碱性部位63 g。

碱性部位(63 g)进行硅胶柱(200～300目，1.2 kg)色谱分离，用二氯甲烷-甲醇(50∶1、20∶1、10∶1、4∶1、2∶1)梯度洗脱，得到10个主要流分B.1～B.10。B.3经硅胶柱色谱，用石油醚-丙酮(3∶1→1∶3)梯度洗脱，得到8个主要流分B.3-1～B.3-8。B.3-2经HPLC(30%乙腈-水)色谱分离，得化合物17(8 mg)。B.3-6反复经Sephadex LH-20凝胶柱(二氯甲烷-甲醇，1∶1)纯化得化合物14(6 mg)；B.5经硅胶柱色谱，用石油醚-二氯甲烷-甲醇(10∶10∶1→2∶2∶1)梯度洗脱，得到10个主要流分B.5-1～B.5-10。B.5-8经HPLC(15%乙腈-水)色谱分离，得化合物15(4 mg)和20(5 mg)；B.6经HPLC(10%乙腈-水)色谱分离，得化合物13(8 mg)、16(12 mg)和18(20 mg)；B.9反复经Sephadex LH-20凝胶柱(二氯甲烷/甲醇，1∶1)色谱分离，得化合物12(11 mg)；B.10经硅胶柱色谱，用石油醚-二氯甲烷-甲醇(3∶3∶1)洗脱，得化合物19(4 mg)。

酸性部位(160 g)进行硅胶柱(200～300目，1.2 kg)色谱分离，用二氯甲烷-甲醇(50∶1、20∶1、10∶1、4∶1、2∶1)梯度洗脱，得到12个主要流分Fr.1～Fr.10。Fr.3经Sephadex LH-20凝胶柱(二氯甲烷-甲醇，1∶1)色谱分离，得到2个主要流分Fr.3-1～Fr.3-2。Fr.3-1经HPLC(45%乙腈-水)色谱分离，得化合物10(12 mg)；Fr.4经硅胶柱色谱，用石油醚-丙酮(3∶1→1∶3)梯度洗脱，得到4个主要流分Fr.4-1～Fr.4-4。Fr.4-3经HPLC(40%乙腈-水)色谱分离，得化合物1(5 mg)和9(10 mg)；Fr.5经ODS色谱分离，用甲醇-水(20%、40%、60%)梯度洗脱，得到3个主要流分Fr.5-1～Fr.5-3。Fr.5-2经HPLC(30%乙腈-水)色谱分离，得化合物7(3 mg)和8(6 mg)；Fr.6经ODS色谱分离，用甲醇-水(20%、40%、60%)梯度洗脱，得到4个主要流分Fr.6-1～Fr.6-4。Fr.6-2经HPLC(35%甲醇-水)色谱分离，得化合物11(8 mg)和6(13 mg)；Fr.10经硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇(10∶1、6∶1、4∶1、2∶1)梯度洗脱，得到5个主要流分Fr.10-1～Fr.10-5。Fr.10-3经HPLC(18%乙腈-水)色谱分离，得化合物3(15 mg)；Fr.10-4反复经HPLC(15%乙腈-水)色谱分离，得化合物5(20 mg)、2(24 mg)和4(13 mg)。

2.2 活性测试

用MTT法进行测试，将分离得到的20个酚类化合物分别用DMSO溶解后配成10 mmol/L储备液，临用前稀释。将对数生长期人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721以2×103个/cm2的密度接种到96孔板中，每孔100 μL，并设空白组、对照组以及给药组，每组设3个平行孔，于5% CO2，37 ℃培养24 h。然后更换为受试化合物分别为2.5、5.0、10、20、40 μmol/L的含药培养基，继续培养48 h后，更换为无血清培养基，避光条件下每孔加入5 mg/mL体积为20 μL的MTT溶液，继续于37 ℃孵化4 h，然后弃去培养液，每孔加入DMSO 150 μL振摇10 min后用酶标仪测量波长在570 nm处的吸光度OD值。按下述公式计算化合物对HepG2、SMMC-7721细胞增殖的抑制率。抑制率=(OD对照-OD加药)/(OD对照-OD空白)×100 %。实验重复3次，取平均值并用SPSS软件计算化合物的半数抑制浓度IC50值。

3 实验结果

3.1 结构鉴定

化合物2为淡黄色无定形粉末，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z409[M+H]+，结合13C NMR数据给出分子式为C22H16O8，不饱和度为15。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.78(1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，7.48(1H，dd，J=2.4，8.4 Hz，H-6′)，7.10(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′′，H-7′′)，6.85(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.63(2H，d，J=8.4 Hz，H-4′′，6′′)，6.28(1H，s，H-6)，4.06(2H，s，H-1′′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：148.1(C-2)，137.0(C-3)，177.5(C-4)，155.5(C-5)，98.8(C-6)，160.3(C-7)，107.8(C-8)，163.0(C-9)，104.5(C-10)，124.4(C-1′)，116.2(C-2′)，146.1(C-3′)，148.7(C-4′)，116.3(C-5′)，121.6(C-6′)，28.2(C-1′′)，133.2(C-2′′)，130.2(C-3′′，7′′)，116.0(C-4′′，6′′)，156.3(C-5′′)。以上数据与文献[10]报道一致，故鉴定该化合物为8-对羟苄基槲皮素。

化合物3为淡黄色无定形粉末，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z393[M+H]+，结合碳谱数据得到其分子式为C22H16O7，不饱和度为15。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.93(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，7.06(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′′，H-7′′)，6.85(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，6.64(2H，d，J=8.4 Hz，H-4′′，6′′)，6.29(1H，s，H-6)，4.06(2H，s，H-1′′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：148.1(C-2)，137.0(C-3)，177.6(C-4)，155.7(C-5)，98.8(C-6)，160.4(C-7)，107.6(C-8)，163.1(C-9)，104.6(C-10)，123.9(C-1′)，130.8(C-2′,6′)，116.2(C-3′，5′)，160.5(C-4′)，28.2(C-1′′)，133.1(C-2′′)，130.1(C-3′′，7′′)，116.0(C-4′′，6′′)，156.4(C-5′′)。以上数据与文献[11]报道一致，故鉴定该化合物为8-对羟苄基山奈酚一致。

化合物4为淡黄色无定形粉末，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z409[M+H]+，结合13C NMR 数据给出分子式为C22H16O8，不饱和度为15。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.73(1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)，7.62(1H，dd，J=1.8，8.4 Hz，H-6′)，7.14(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′′，H-7′′)，6.87(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.62(2H，d，J=8.4 Hz，H-4′′，6′′)，6.44(1H，s，H-8)，3.86(2H，s，H-1′′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：147.7(C-2)，137.2(C-3)，177.3(C-4)，159.3(C-5)，112.7(C-6)，160.5(C-7)，93.7(C-8)，156.3(C-9)，104.4(C-10)，124.3(C-1′)，116.0(C-2′)，146.2(C-3′)，148.7(C-4′)，116.2(C-5′)，121.6(C-6′)，27.8(C-1′′)，133.6(C-2′′)，130.6(C-3′′，7′′)，115.7(C-4′′，6′′)，156.1(C-5′′)。以上数据与文献[12]报道一致，故鉴定该化合物为6-对羟苄基槲皮素。

化合物5为淡黄色无定形粉末，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z303[M+H]+，结合13C NMR数据给出分子式为C15H10O7，不饱和度为11。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：12.50(1H，s，5-OH)，7.69(1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，7.55(1H，dd，J=2.4，8.4 Hz，H-6′)，6.89(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.41(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.19(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：146.3(C-2)，135.2(C-3)，175.3(C-4)，155.6(C-5)，97.7(C-6)，163.4(C-7)，92.8(C-8)，160.2(C-9)，102.5(C-10)，121.4(C-1′)，114.5(C-2′)，144.5(C-3′)，147.2(C-4′)，115.1(C-5′)，119.4(C-6′)。以上数据与文献[13]报道一致，故鉴定该化合物为槲皮素。

化合物6为淡黄色无定形粉末，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z287[M+H]+，结合13C NMR 数据给出分子式为C15H10O6，不饱和度为11。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：8.07(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.89(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，6.37(1H，s，H-8)，6.17(1H，s，H-6)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：148.0(C-2)，137.1(C-3)，177.3(C-4)，162.5(C-5)，99.3(C-6)，165.6(C-7)，94.5(C-8)，158.2(C-9)，104.5(C-10)，123.7(C-1′)，130.7(C-2′，6′)，116.3(C-3′，5′)，160.5(C-4′)。上述数据与文献[14]对照基本一致，故鉴定该化合物为山奈酚。

化合物7为淡黄色无定形粉末，ESI-MS：m/z301[M+H]+，结合13C NMR 数据给出分子式为C16H12O6，不饱和度为11。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：12.97(1H，s，5-OH)，7.56(1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)，7.55(1H，dd，J=1.8，8.4 Hz，H-6′)，6.93(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.87(1H，s，H-3)，6.47(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.17(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，3.89(3H，s，3′-OCH3)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：163.5(C-2)，103.1(C-3)，181.6(C-4)，161.4(C-5)，99.0(C-6)，164.9(C-7)，94.1(C-8)，157.4(C-9)，103.1(C-10)，120.3(C-1′)，110.1(C-2′)，150.9(C-3′)，148.0(C-4′)，115.8(C-5′)，120.3(C-6′)，55.9(3′-OCH3)。上述数据与文献[15]报道基本一致，故鉴定该化合物为金圣草黄素。

化合物8为淡黄色无定形粉末，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z287[M-H]-，结合碳谱数据得出分子式为C15H12O6，不饱和度为10。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：13.12(1H，s，1-OH)，7.37(1H，d，J=9.2 Hz，H-6)，7.15(1H，d，J=9.2 Hz，H-5)，6.35(1H，d，J=2.4 Hz，H-4)，6.32(1H，d，J=2.4 Hz，H-2)，5.97(1H，s，7-OH)，4.03(3H，s，8-OCH3)，3.88(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：163.6(C-1)，97.0(C-2)，166.5(C-3)，92.1(C-4)，157.2(C-4a)，113.8(C-5)，122.5(C-6)，144.3(C-7)，150.7(C-8)，114.7(C-8a)，180.6(C-9)，104.0(C-9a)，145.5(C-10a)，55.8(3-OCH3)，62.8(8-OCH3)。以上数据与文献[16]报道基本一致，故鉴定该化合物为1，7-二羟基-3，8-二甲氧基口山酮。

化合物9为淡黄色无定形粉末，ESI-MS：m/z301[M-H]-，结合13C NMR数据给出分子式为C16H14O6，不饱和度为10。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：12.68(1H，s，1-OH)，7.64(1H，dd，J=1.6，8.0 Hz，H-8)，7.17(1H，t，J=8.0 Hz，H-7)，7.09(1H，dd，J=1.6，8.0 Hz，H-6)，6.46(1H，s，H-4)，3.93(3H，s，5-OCH3)，3.90(3H，s，3-OCH3)，3.87(3H，s，2-OCH3)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：153.8(C-1)，131.6(C-2)，159.7(C-3)，90.7(C-4)，152.8(C-4a)，148.0(C-5)，115.2(C-6)，123.3(C-7)，116.2(C-8)，120.7(C-8a)，180.7(C-9)，103.9(C-9a)，145.9(C-10a)，56.1(2-OCH3)，56.2(3-OCH3)，60.6(8-OCH3)。上述数据与文献[17]报道基本一致，故鉴定该化合物为1-羟基-2，3，5-三甲氧基口山酮。

化合物10为淡黄色无定形粉末，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z331[M-H]-，结合13C NMR数据给出分子式为C17H16O7，不饱和度为10。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：12.48(1H，s，1-OH)，7.63(1H，dd，J=1.6，8.0 Hz，H-7)，7.19(1H，d，J=8.0 Hz，H-7)，7.13(1H，d，J=1.6 Hz，H-5)，4.10(3H，s，3-OCH3)，3.96(3H，s，6-OCH3)，3.94(3H，s，2-OCH3)，3.89(3H，s，4-OCH3)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：150.2(C-1)，132.5(C-2)，153.9(C-3)，135.2(C-4)，145.4(C-4a)，115.7(C-5)，148.4(C-6)，116.1(C-7)，123.4(C-8)，120.5(C-8a)，181.3(C-9)，104.7(C-9a)，146.0(C-10a)，61.6(2-OCH3)，61.5(3-OCH3)，60.9(4-OCH3)，56.2(6-OCH3)。以上波谱数据与文献[18]报道基本一致，故鉴定该化合物为1-羟基-2，3，4，6-四甲氧基口山酮。

化合物11为无色油状物，ESI-MS：m/z287[M+H]+，结合13C NMR数据给出分子式为C16H14O5，不饱和度为10。1H NMR(400 MHz，(CD3)2CO)δ：7.62(1H，d，J=15.6 Hz，H-7)，7.61(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.51(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，H-6′)，7.11(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6)，6.89(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，6.87(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.38(1H，d，J=15.6 Hz，H-8)，3.90(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(100 MHz，(CD3)2CO)δ：127.0(C-1)，111.3(C-2)，148.7(C-3)，149.8(C-4)，116.2(C-5)，123.8(C-6)，145.6(C-7)，115.9(C-8)，169.0(C-9)，145.9(C-1′)，130.9(C-2′，6′)，116.6(C-3′，5′),160.4(C-4′)，56.3(3-OCH3)。以上波谱数据与文献[19]报道一致，故鉴定该化合物为p-hydroxyphenylferulate。

化合物12为无色针状晶体(CH3OH)，熔点为268～269 ℃；UV254下显亮蓝色荧光；ESI-MS：m/z177[M-H]-，结合碳谱数据得出其分子式为C9H6O4，不饱和度为7。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.77(1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，6.93(1H，s，H-5)，6.75(1H，s，H-8)，6.17(1H，d，J=9.6 Hz，H-3)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：164.3(C-2)，112.8(C-3)，146.0(C-4)，112.5(C-4a)，113.0(C-5)，144.5(C-6)，152.0(C-7)，103.6(C-8)，150.5(C-8a)。以上波谱数据与文献[20]报道一致，故鉴定该化合物为5，7-二羟基香豆素一致。

化合物13为淡黄色无定形粉末，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z229[M-H]-，结合13C NMR数据给出分子式为C14H14O3，不饱和度为8。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.15(4H，d，J=8.4 Hz，H-2，6，2′，6′)，6.75(4H，d，J=8.4 Hz，H-3，5，3′，5′)，4.39(4H，s，H-7，7′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：130.3(C-1,1′)，130.8(C-1，6，2′，6′)，116.1(C-3，5，3′，5′)，158.3(C-4，4′)，72.7(C-7，7′)。以上波谱数据与文献[21]报道一致，故鉴定该化合物为4，4′-二羟基二苄醚。

化合物14为白色无定形粉末，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z167[M-H]-，结合13C NMR数据给出分子式为C9H12O3，不饱和度为4。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.79(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，6.70(1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，6.64(1H，dd，J=1.8，7.8 Hz，H-6)，3.83(3H，s，3-OCH3)，3.70(2H，t，J=7.2 Hz，H-8)，2.73(2H，t，J=7.2 Hz，H-7)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：131.8(C-1)，113.7(C-2)，148.8(C-3)，145.9(C-4)，116.1(C-5)，122.4(C-6)，39.8(C-7)，64.5(C-8)，56.3(3-OCH3)。以上波谱数据与文献[22]报道一致，故鉴定该化合物为3-甲氧基-4-羟基苯乙醇。

化合物15白色无定形粉末，ESI-MS：m/z153[M-H]-，结合13C NMR数据给出分子式为C8H10O3，不饱和度为4。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.67(1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，6.64(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，6.52(1H，dd，J=1.8，7.8 Hz，H-6)，3.67(2H，t，J=7.2 Hz，H-8)，2.66(2H，t，J=7.2 Hz，H-7)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：131.8(C-1)，117.1(C-2)，146.1(C-3)，144.6(C-4)，116.3(C-5)，121.2(C-6)，39.8(C-7)，64.6(C-8)。以上数据与文献[23]报道一致，故鉴定该化合物为3，4-二羟基苯乙醇。

化合物16白色针状晶体(甲醇)，熔点为92～94 ℃；UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z137[M-H]-，结合13C NMR数据给出分子式为C8H10O2，不饱和度为4。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.03(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，6.70(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，3.68(2H，t，J=7.2 Hz，H-8)，2.71(2H，t，J=7.2 Hz，H-7)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：131.0(C-1)，130.9(C-2，6)，116.1(C-3，5)，156.8(C-4)，39.4(C-7)，64.6(C-8)。上述数据与文献[24]报道基本一致，故鉴定该化合物为对羟基苯乙醇。

化合物17为白色无定形粉末，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z151[M-H]-，结合13C NMR数据给出分子式为C9H12O2，不饱和度为4。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.19(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，6.77(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，4.43(2H，s，H-7)，3.53(2H，q，J=7.2 Hz，H-1′)，1.23(3H，t，J=7.2 Hz，H-2′)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：130.4(C-1)，115.2(C-2，6)，129.6(C-3，5)，155.3(C-4)，72.4(C-7)，65.5(C-1′)，15.2(C-2′)。以上波谱数据与文献[25]报道一致，故鉴定该化合物为对羟苄基乙基醚。

化合物18白色针状晶体(CH3OH)，熔点为114～120 ℃，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z123[M-H]-，结合13C NMR 数据给出分子式为C7H8O2，不饱和度为4。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.16(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，6.75(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，4.48(2H，s，H-7)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：133.5(C-1)，116.1(C-2，6)，129.8(C-3，5)，157.8(C-4)，65.1(C-7)。以上数据与文献[26]报道一致，故鉴定该化合物为对羟基苯甲醇。

化合物19为白色针状晶体(CH3OH)，熔点为139～141℃，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z125[M-H]-，结合13C NMR数据给出分子式为C6H6O3，不饱和度为4。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.43(1H，d，J=1.8 Hz，H-3)，7.40(1H，dd，J=1.8，7.8 Hz，H-5)，6.77(1H，d，J=7.8 Hz，H-6)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：123.6(C-1)，145.9(C-2)，115.6(C-3，5)，150.8(C-4)，117.8(C-6)。以上波谱数据与文献[27]报道一致，故鉴定该化合物为1，2，4-苯三酚。

化合物20为白色片状晶体(CH3OH)，熔点为102～103 ℃，UV254下显暗斑；ESI-MS：m/z109[M-H]-，结合13C NMR 数据得到分子式为C6H6O2，不饱和度为4。1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.87(2H，dd，J=1.8，7.2 Hz，H-3，6)，6.80(2H，dd，J=1.8，7.2 Hz，H-4，5)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：163.1(C-1，2)，132.9(C-4，5)，116.0(C-3，6)。以上波谱数据与文献[28]报道一致，故鉴定该化合物为邻二苯酚。

3.2 活性测试结果

测试结果(见表1)显示化合物2、3对人肝癌HepG2具有中等抑制活性，IC50值分别为16.8和19.2 μmol/L(阳性对照药顺铂IC50值为4.8 μmol/L)；化合物11对人肝癌SMMC-7721具有较弱的抑制活性，IC50值分别为24.6 μmol/L(阳性对照药顺铂IC50值为5.4 μmol/L)；其他化合物对人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721没有明显的抑制作用(IC50值都大于40 μmol/L)。

表1 化合物1～20的体外抗肿瘤活性

5 讨论

本课题对赛北紫堇90%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位化学成分进行系统研究，研究结果表明该植物中主要含有生物碱类成分(另文报道)，酚类成分。同时也对所有分离得到的酚类化合物进行了抗人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721细胞毒活性测试，结果显示化合物2和3对人肝癌HepG2具有中等抑制活性，化合物11对人肝癌SMMC-7721具有较弱的抑制活性，而其他酚类化合物对上述两种受试癌细胞没有明显的抑制作用。本研究将为该药材的药效物质基础的阐明、进一步的质量控制及其他药理作用的深入研究具有一定的参考价值。