小驳骨乙酸乙酯部位的化学成分研究

张海新，夏 召，许天启，陈宜敏，周光雄

暨南大学药学院中药及天然药物研究所 广东省普通高校中药和天然药物药效物质基础重点实验室，广州 510632

小驳骨JusticiagendarussaBurm.f.为爵床科驳骨草属多年生小灌木，又名接骨草，生于丘陵草坡，路旁村边或灌木丛中，广泛分布于中国、印度和马来半岛[1]。其干燥地上部分，被《中国药典》2015年版一部收为新增药材，具有祛风湿、散淤血、续筋骨之功效。小驳骨作为一种民族传统用药，有着广泛的临床应用，被广泛用于治疗筋膜骨折、创伤性损伤、月经阻滞以及产后腹痛等症[1]。现代药理学研究表明，小驳骨具有抗炎、抗氧化、止痛和肝保护等多种活性[2,3]。但其化学成分报道较少，为了更好地阐明小驳骨中具有生物活性的成分，本实验综合运用各种现代色谱和光谱技术，对小驳骨地上部分95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位进行了深入的化学成分研究。并以LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞为模型，评估分离得到的单体化合物抑制NO释放的作用，以进行抗炎活性的筛选，以期进一步丰富了小驳骨植物的成分多样性，为后续该植物的活性成分的开发与利用奠定了基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器与试剂

Bruker AV-300、AV-400和AV-600型核磁共振仪(德国布鲁克公司)；LC-100型液相色谱仪(上海伍丰科学仪器有限公司)；Agilent 6120 LC/MS TOF质谱仪(美国安捷伦科技公司)；液相分析色谱柱为Ultimate XB-C18(4.6 × 250.0 mm，5 μm，美国Welch公司)；半制备液相色谱柱为Ultimate XB-C18(10.0 × 250.0 mm，5 μm，美国Welch公司)；Eyela旋转蒸发仪(N-1100V-WB)；BP211D电子天平(Sartorouius公司)。TLC预制板(青岛海洋化工厂)；Sephadex LH-20(Pharmacia公司)；ODS(Silicycle公司)；核磁用氘代试剂(Merck公司)；色谱级甲醇(山东禹王公司)；液相用水(广东怡宝公司)，其他试剂均为分析纯。

1.2 细胞株

小鼠巨噬细胞系RAW 264.7由暨南大学药学院中药及天然药物研究所提供。

1.3 药材来源

实验药材于2016年6月在中国广东省广州暨南大学校园内采集，由暨南大学药学院周光雄教授鉴定为爵床科植物小驳骨JusticiagendarussaBurm.f.的地上部分。模式标本(JG-201601)存放在暨南大学生药学教研室。

2 实验方法

2.1 提取与分离

干燥的小驳骨地上部分20 kg，粗粉碎后用95%乙醇热回流反复提取2次，80%乙醇热回流提取1次，每次2 h，滤过，合并3次提取液，减压浓缩至无醇味，得到粗提取物浸膏。粗提取物浸膏加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，萃取液分别减压浓缩，得到石油醚部位(500 g)、乙酸乙酯部位(1.2 kg)。乙酸乙酯部位经正相硅胶柱色谱分离，石油醚-丙酮(V/V 100∶0→0∶100)梯度洗脱，经TLC分析合并后得到24个组分Fr.1～24。Fr.20经过反复硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇系统，(100∶0→0∶100)多梯度洗脱，经TLC分析合并得到8个子流分Fr.24-1～8。Fr.24-1重结晶得化合物1(3 mg)。Fr.24-6经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱(甲醇)，得到Fr.24-6-1～10。Fr.24-6-4经半制备液相(甲醇/水 32%)，重结晶得到化合物16(7 mg)和17(5 mg)。Fr.8经过反复硅胶柱色谱，二氯甲烷-乙酸乙酯(100∶0→0∶100)多梯度洗脱，经TLC分析合并得到9个子流分Fr.8-1～9。Fr.8-2经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇 1∶1)，得到Fr.8-2-1～12。Fr.8-2-2经半制备液相(甲醇/水 56%)得到化合物2(6 mg)和3(10 mg)。Fr.8-2-6经半制备液相(甲醇/水 47%)得到化合物4(10 mg)。Fr.8-6经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇 1∶1)，得到Fr.8-6-1～9。Fr.8-6-5经半制备液相(甲醇/水 55%)得到化合物5(20 mg)和6(8 mg)。Fr.8-8经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇 1∶1)，得到Fr.8-8-1～12。Fr.8-8-4经半制备液相(甲醇/水 57%)得到化合物8(5 mg)和9(10 mg)。Fr.10经过反复硅胶柱色谱，采用二氯甲烷-乙酸乙酯系统(100∶0→0∶100)多梯度洗脱，经TLC分析合并得到10个子流分Fr.10-1～10。Fr.10-1经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇 1∶1)，得到流分Fr.10-1-1～8。Fr.10-1-1重结晶得11(3 mg)。Fr.10-1-2经半制备液相(甲醇/水 50%)得到化合物7(5 mg)和10(10 mg)。Fr.10-4经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇 1∶1)，得到Fr.10-4-1～12。Fr.10-4-3经半制备液相(甲醇/水 50%)得到化合物18(9 mg)、19(10 mg)和20(7 mg)。Fr.10-4-9经半制备液相(甲醇/水 52%)得到化合物21(6 mg)。Fr.24经过反复硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇系统(100∶0→0∶100)多梯度洗脱，经TLC分析合并得到12个子流分Fr.24-1～12。Fr.24-1经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱(甲醇)，得到Fr.24-1-1～8。Fr.24-1-7经半制备液相(甲醇/水 20%)得到化合物12(7 mg)。Fr.24-4经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱(甲醇)，得到Fr.24-4-1～8。Fr.24-4-5经半制备液相(甲醇/水 18%)得到化合物13(5 mg)。Fr.24-12经反复ODS开放柱色谱，甲醇-水系统(20∶80→100∶0)多梯度洗脱，TLC分析合并7个子流分Fr.24-12-1～7。Fr.24-12-5经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱(甲醇)，得到Fr.24-12-5-1～6。Fr.24-12-5-4经半制备液相(甲醇/水 15%)得到化合物14(10 mg)和15(3 mg)。

2.2 细胞培养

小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基，放置在37 ℃，5% CO2培养箱中培养，取对数期细胞用于实验。

2.3 细胞活力实验

RAW 264.7细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养液稀释后接种到96孔板，每孔体积100 μL，最终每孔4 × 104个细胞。置恒温培育箱(37 ℃，5% CO2)中培养24 h，吸出培养液，加入含有不同浓度的待测化合物及阳性对照药(槲皮素)的培养液，培养24 h后弃去上清液，在每孔中加入5 mg/mL MTT，37 ℃下反应4 h，弃去MTT，每孔加入200 μL DMSO，置摇床上低速震荡10 min，使结晶充分溶解，用酶标仪在570 nm处测量各孔的OD值，计算化合物的IC50值。

2.4 抗炎活性实验

抗炎活性采用抑制一氧化氮(NO)生成实验，以LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7为检测模型，应用Griess试剂显色法检测一氧化氮生成量。RAW 264.7细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养液稀释到每孔4 × 104个细胞接种到96孔板，每孔体积100 μL。置恒温培育箱(37 ℃，5% CO2)中培养24 h，吸出培养液，加入含有不同浓度的待测化合物及阳性对照药(槲皮素)的培养液，同时预先在培养液中加入100 ng/mL LPS。培养24 h后，吸取各孔上清液至新的96孔板中，每孔加入以1∶1比例混合的Griess A和B溶液100 μL。在3 000 rpm下离心1 min，继续在黑暗处反应10 min。用酶标仪540 nm波长下测定各孔OD值，计算化合物的IC50值。

3 实验结果

3.1 化合物结构鉴定

化合物1无色针状晶体(甲醇);分子式为C11H11NO2。经单晶X射线衍射确定其结构(图1)为2,3,3a,5-四氢-1H-苯并[d]吡咯并[2,1-b][1,3]恶嗪-1-酮，并得到其晶体结构数据：晶体属单斜晶系，空间群为P21/n；晶胞参数：a=10.152 9(4)Å，b= 7.407 6(3)Å，c= 11.749 8(4)Å，α= 90°，β= 98.068(4)°，γ= 90°，晶胞体积V=(874.946)Å3；晶胞内分子数Z= 4；计算密度Dcalc= 1.436 mg/m3；F(000)= 400，T=293(2)K。化合物1(CCDC 1968067)的晶体学数据已上传剑桥晶体学数据中心晶体数据库(网址为www.ccdc.cam.ac.uk)，读者可以从该中心免费获得。

图1 化合物1～21的化学结构

化合物2无色针状晶体(甲醇);HR-ESI-MS：m/z135.044 6[M-H]-(计算值为135.044 6)，确定其相对分子量为136，分子式C8H8O2。1H NMR(300 MHz，CD3OD)δ：7.87(2H，d，J= 8.8 Hz，H-2，6)，6.83(2H，d，J=8.8 Hz，H-3，5)，2.51(3H，s，-CH3)；13C NMR(75 MHz，CD3OD)δ：132.1(C-1)，130.1(C-2，6)，116.2(C-3，5)，164.1(C-4)，199.5(C-7)，26.3(-CH3)。以上数据与文献[4]报道一致，故鉴定化合物2为4′-羟基苯乙酮。

化合物3黄色粉末(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z189.052 9[M + Na]+(计算值为189.052 8)，确定其相对分子量为166，分子式C9H10O3。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.43(1H，d，J= 2.1 Hz，H-2)，6.86(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，7.49(1H，dd，J=8.2，2.1 Hz，H-6)，3.82(3H，s，-OCH3)，2.48(3H，s，-CH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：128.7(C-1)，111.1(C-2)，152.0(C-3)，147.6(C-4)，114.9(C-5)，123.4(C-6)，196.0(C-7)，55.6(-OCH3)，26.2(-CH3)。以上数据与文献[5]报道一致，故鉴定化合物3为apocynin。

化合物4淡黄色针状结晶(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z325.072 9[M + Na]+(计算值为325.068 8)，确定其相对分子量为302，分子式C16H14O6。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.70(1H，d，J= 8.8 Hz，H-4)，6.44(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)，2.53(3H，s，H-9)，2.22(3H，s，H-10)，6.70(1H，d，J=8.7 Hz，H-3′)，6.76(1H，d，J=8.7 Hz，H-4′),12.92(1H，s，-OH)，9.36(1H，s，-OH)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：111.6(C-1)，162.3(C-2)，112.2(C-3)，132.1(C-4)，107.7(C-5)，162.9(C-6)，203.2(C-7)，202.8(C-8)，30.6(C-9)，26.1(C-10)，115.8(C-1′)，147.1(C-2′)，117.6(C-3′)，118.8(C-4′)，148.0(C-5′)，137.0(C-6′)。以上数据与文献[6]报道一致，故鉴定化合物4为白首乌二苯酮。

化合物5无色针状晶体(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z123.044 9[M + H]+(计算值为123.044 5)，确定其相对分子量为122，分子式C7H6O2。1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.80(2H，m，H-2，6)，6.90(2H，m，H-3，5)，9.76(1H，s，H-7)；13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ：165.3(C-1)，130.3(C-2，6)，116.9(C-3，5)，133.4(C-4)，192.9(C-7)。以上数据与文献[7]报道一致，故鉴定化合物5为对羟基苯甲醛。

化合物6无色针晶(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z161.028 7[M + Na]+(计算值为161.021 5),确定其相对分子量为138，分子式C7H6O3。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.94(1H，m，H-2)，7.51(1H，ddd，J=8.7，7.2，1.8 Hz，H-3)，6.90(1H，m，H-4)，7.79(1H，dd，J=7.9，1.8 Hz，H-5)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：113.0(C-1)，130.3(C-2)，119.2(C-3)，135.7(C-4)，17.1(C-5)，161.2(C-6)，172.0(C-7)。以上数据与文献[8]报道一致，故鉴定化合物6为水杨酸。

化合物7无色针晶(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z153.054 8[M + H]+(计算值为153.055 1),确定其相对分子量为152，分子式C8H8O3。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.22(1H，d，J= 2.0 Hz，H-3)，6.35(1H，dd，J=8.8，2.0 Hz，H-5)，7.73(1H，d，J=8.8 Hz，H-6)，2.50(3H，s，-CH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：112.7(C-1)，165.3(C-2)，102.3(C-3)，164.2(C-4)，108.2(C-5)，133.6(C-6)，202.5(C-7)，26.3(-CH3)。以上数据与文献[9]报道一致，故鉴定化合物7为2,4-二羟基苯乙酮。

化合物8黄色粉末(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z153.055 3[M + H]+(计算值为153.055 1),确定其相对分子量为152，分子式C8H8O3。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.79(1H，d，J= 8.8 Hz，H-3)，6.99(1H，dd，J=8.8，3.0 Hz，H-4)，7.19(1H，d，J=3.0 Hz，H-6)，2.57(3H，s，-CH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：115.4(C-1)，153.7(C-2)，118.2(C-3)，124.4(C-4)，149.4(C-5)，120.2(C-6)，203.9(C-7)，27.7(-CH3)。以上数据与文献[10]报道一致，故鉴定化合物8为2,5-二羟基苯乙酮。

化合物9无色颗粒(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z169.012 8[M + H]+(计算值为169.086 4),确定其相对分子量为168，分子式C9H12O3。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.20(3H，s，H-2，4，6)，3.80(9H，s，1，3，5-OCH3)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：147.4(C-1，3，5)，106.9(C-2，4，6)，56.0(1，3，5-OCH3)。以上数据与文献[11]报道一致，故鉴定化合物9为1,3,5-三甲氧基苯。

化合物10红色粉末(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z219.063 6[M + Na]+(计算值为219.063 3)，确定其相对分子量为196，分子式C10H12O4。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.18(2H，s，H-2，6)，2.47(3H，s，-CH3)，3.77(6H，s，3，5-OCH3)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：196.9(C-2，6)，148.3(C-3，5)，197.4(C-7)，26.7(-CH3)，56.6(3-OCH3)，55.2(5-OCH3)。以上数据与文献[12]报道一致，故鉴定化合物10为丁香酮。

化合物11无色针状结晶(甲醇)；分子式为C9H16O4。经单晶X射线衍射确定其结构(图2)为壬二酸，并得到其晶体结构数据：晶体属单斜晶系，空间群为P21/c；晶胞参数：a=5.484 6(4)Å，b= 9.447 5(8)Å，c= 18.807 9(5)Å，α= 90°，β= 95.708(7)°，γ= 90°，晶胞体积V= 969.71(15)Å3；晶胞内分子数Z= 4；计算密度Dcalc= 1.289 mg/m3；F(000)= 408，T=293(2)K。化合物11(CCDC 1968064)的晶体学数据已上传剑桥晶体学数据中心晶体数据库(网址为www.ccdc.cam.ac.uk)，读者可以从该中心免费获得。

化合物12白色粉末(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z543.184 5[M + Na]+(计算值为543.184 2)，确定其相对分子量为520，分子式C26H32O11。1H NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ：6.88(1H，br s，H-2′)，6.95(1H，br s，H-2′′)，6.73(1H，d，J=8.2 Hz，H-5′)，6.75(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5′′)，6.85(1H，d，J= 8.4 Hz，H-6′)，7.04(1H，d，J= 8.4 Hz，H-6′′)，4.61(1H，d，J= 4.0 Hz，H-7′)，4.66(1H，d，J= 4.0 Hz，H-7′′)，4.88(1H，d，J= 4.0 Hz，Glc-1)，3.76(3H，s，3′-OCH3)，3.77(3H，s，3′′-OCH3)；13C NMR(75 MHz，DMSO-d6)δ：132.0(C-1′)，35.1(C-1′′)，110.4(C-2′，2′′)，147.5(C-3′)，148.9(C-3′′)，145.8(C-4′)，146.1(C-4′′)，115.1(C-5′，5′′)，118.1(C-6′)，118.6(C-6′′)，85.1(C-7)，84.8(C-7′)，53.5(C-8)，53.7(C-8′)，70.8(C-9)，71.0(C-9′)，100.1(Glc-1)，73.2(Glc-2)，77.0(Glc-3)，69.6(Glc-4)，76.8(Glc-5)，60.6(Glc-6)，55.6(3′-OCH3)，55.7(3′′-OCH3)。以上数据与文献[13]报道一致，故鉴定化合物12为(+)-松脂素-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物13白色粉末(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z409.183 4[M + Na]+(计算值为409.183 9)，确定其相对分子量为386，分子式C19H30O8。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：2.05(1H，d，J=17.0 Hz，H1-2)，2.58(1H，d，J=17.0 Hz，H2-2)，5.76(1H，br s)，5.95(1H，d，J=15.5 Hz，H-7)，5.64(1H，dd，J= 15.5，6.4 Hz，H-8)，4.43(1H，m，H-9)，1.19(3H，d，J= 6.5 Hz，H-10)，0.93(3H，s，H-11)，0.92(3H，s，H-12)，1.82(3H，d，J=1.3 Hz，H-13)，4.99(1H，s，6-OH)，4.09(1H，d，J= 7.7 Hz，Glc-1)，3.11(1H，s，Glc-2)，3.03(1H，s，Glc-3)，2.92(1H，s，Glc-4)，2.94(1H，s，Glc-5)，3.41(2H，m，Glc-6)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：41.0(C-1)，49.3(C-2)，197.4(C-3)，125.6(C-4)，163.8(C-5)，77.9(C-6)，131.6(C-7)，131.5(C-8)，72.0(C-9)，22.1(C-10)，23.1(C-11)，24.1(C-12)，18.6(C-13)，100.0(Glc-1)，73.3(Glc-2)，77.0(Glc-3)，70.0(Glc-4)，77.2(Glc-5)，61.1(Glc-6)。以上数据与文献[14]报道一致，故鉴定化合物13为corchoionoside C。

化合物14白色粉末(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z517.109 3[M + Na]+(计算值为517.095 7)，确定其相对分子量为494，分子式C22H22O13。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.53(1H，s，H-8)，7.60(1H，d，J=2.7 Hz，H-2′)，6.86(1H，d，J=8.2 Hz，H-5′)，7.57(1H，d，J= 8.1 Hz，H-6′)，5.60(1H，d，J= 7.0 Hz，Glc-1)，3.09～3.60(6H，m，Glc-2-Glc-6)，3.75(3H，s，6-OCH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：156.7(C-2)，133.3(C-3)，178.0(C-4)，152.7(C-5)，131.5(C-6)，151.9(C-7)，94.2(C-8)，157.7(C-9)，104.8(C-10)，122.0(C-1′)，116.6(C-2′)，145.1(C-3′)，148.8(C-4′)，115.6(C-5′)，121.6(C-6′)，101.2(Glc-1)，74.4(Glc-2)，76.8(Glc-3)，70.2(Glc-4)，77.8(Glc-5)，61.3(Glc-6)，60.4(-OCH3)。以上数据与文献[15]报道一致，故鉴定化合物14为patuletin-3-O-glucoside。

化合物15黄色粉末(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z517.096 4[M + Na]+(计算值为517.095 7)，确定其相对分子量为494，分子式C22H22O13。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.47(1H，s，H-5)，7.58(1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，6.83(1H，d，J=8.9 Hz，H-5′)，7.56(1H，d，J= 8.9 Hz，H-6′)，5.40(1H，d，J= 7.4 Hz，Glc-1)，3.09～3.58(6H，m，Glc-2-Glc-6)，3.75(3H，s，6-OCH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：156.0(C-2)，133.0(C-3)，177.5(C-4)，93.9(C-5)，151.7(C-6)，131.5(C-7)，152.3(C-8)，158.4(C-9)，104.0(C-10)，121.5(C-1′)，116.1(C-2′)，144.9(C-3′)，148.5(C-4′)，115.2(C-5′)，121.2(C-6′)，101.0(Glc-1)，74.1(Glc-2)，76.5(Glc-3)，70.0(Glc-4)，77.5(Glc-5)，61.0(Glc-6)，59.9(-OCH3)。以上数据与文献[16]报道一致，故鉴定化合物15为commicarpiflavonol glucoside A。

化合物16无色针晶(甲醇)；分子式为C9H11NO5。经单晶X射线衍射确定其结构(图3)为1,2,3-三甲氧基-5-硝基苯，并得到其晶体结构数据：晶体属单斜晶系，空间群为P21/n；晶胞参数：a=6.840 5(9)Å，b= 13.738(2)Å，c= 10.330 9(12)Å，α= 90°，β= 99.311(12)°，γ= 90°，晶胞体积V= 958.1(2)Å3；晶胞内分子数Z= 4；计算密度Dcalc= 1.478 mg/m3；F(000)= 448，T=293(2)K。化合物16(CCDC 1968065)的晶体学数据已上传剑桥晶体学数据中心晶体数据库(网址为www.ccdc.cam.ac.uk)，读者可以从该中心免费获得。

化合物17无色针晶(甲醇)；分子式为C6H5NO3。经单晶X射线衍射确定其结构(图4)为4-硝基苯酚，并得到其晶体结构数据：晶体属单斜晶系，空间群为C2；晶胞参数：a=21.153 9(8)Å，b= 3.611 8(10)Å，c= 10.292 6(4)Å，α= 90°，β= 117.234(12)°，γ= 90°，晶胞体积V= 699.22(5)Å3；晶胞内分子数Z= 4；计算密度Dcalc= 1.321 mg/m3；F(000)= 288，T=293(2)K。化合物17(CCDC 1968066)的晶体学数据已上传剑桥晶体学数据中心晶体数据库(网址为www.ccdc.cam.ac.uk)，读者可以从该中心免费获得。

化合物18黄色油状(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z365.361 0[M + Na]+(计算值为365.266 9)，确定其相对分子量为342，分子式C20H38O4。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：5.30(1H，dt，J=4.7，9.4 Hz，H-9)，2.10(2H，m，H-11)，2.01(1H，m，H-1′)，4.04(2H，s，OH)，0.85(3H，t，J= 6.9 Hz，-CH3)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：174.2(C-1)，35.1(C-2)，25.1(C-3)，28.6(C-4)，26.6(C-5)，28.8(C-6)，28.8(C-7)，28.7(C-8)，129.7(C-9)，129.7(C-10)，31.3(C-11)，28.7(C-12)，29.0(C-13)，29.0(C-14)，28.9(C-15)，29.1(C-16)，22.1(C-17)，14.0(C-18)。以上数据与文献[17]报道一致，故鉴定化合物18为单油酸甘油酯。

化合物19黄色油状(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z279.217 4[M + Na]+(计算值为279.230 1)，确定其相对分子量为256，分子式C16H32O2。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：1.23-1.10(24H，m，-CH2)，2.17(3H，t，J=7.4 Hz，-OCH2CH3)，0.85(3H，t，J=6.9 Hz，-CH3)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：174.6(C-1)，33.7(C-2)，24.6(C-3)，28.7(C-4)，28.6(C-5)，28.9(C-6)，29.0(C-7)，29.0(C-8)，29.0(C-9)，29.0(C-10)，29.0(C-11)，28.6(C-12)，22.1(C-13)，14.0(C-14)。以上数据与文献[18]报道一致，故鉴定化合物19为tetradecanoate。

化合物20无色片状晶体(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z307.261 4[M + Na]+(计算值为307.150 0)，确定其相对分子量为284，分子式C18H36O2。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：1.99(2H，m，H-2)，0.85(3H，t，J=6.8 Hz，-CH3)，4.04(1H，s，-OH)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：35.1(C-2)，26.6(C-3)，28.6(C-4)，28.7(C-5)，29.0(C-6)，29.0(C-7)，29.1×8(C-8～15)，31.3(C-16)，22.1(C-17)，14.0(C-18)。以上数据与文献[19]报道一致，故鉴定化合物20为硬脂酸。

化合物21无色针晶(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z257.248 1[M + Na]+(计算值为257.096 9)，确定其相对分子量为256，分子式C16H32O2。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：1.99(2H，m，H-2)，0.85(3H，t，J=6.8 Hz，-CH3)，4.04(1H，s，-OH)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：35.1(C-2)，26.6(C-3)，28.6(C-4)，28.7(C-5)，29.0(C-6)，29.0(C-7)，29.1×8(C-8-15)，31.3(C-16)，22.1(C-17)，14.0(C-18)。以上数据与文献[20]报道一致，故鉴定化合物21为棕榈酸。

3.2 抗炎活性实验结果

21个化合物(1～21)的细胞活力和抗炎活性结果见表1。阳性药的IC50值为16.94±0.40 μM,化合物4、6、8的IC50值均小于阳性药的IC50，表明化合物4、6、8具有显著的抗炎活性。

表1 化合物1～21的细胞活力和抑制NO生成活性

4 讨论与结论

本研究从小驳骨的乙醇提物中分离鉴定了21个化合物，包括酚酸类，脂肪酸类，糖苷类等。其中，化合物1和16为新天然产物，所有化合物均首次从该植物中分离得到。对其抗炎活性进行了初步筛选，只有化合物4、6、8有抗炎活性，但这一些化合物的活性在一定程度上揭示了该药治疗作用的物质基础，对于小驳骨中活性成分的后期研究和质量控制研究具有一定的参考价值和指导意义。本论文在前期研究基础上，进一步丰富了小驳骨的化学成分种类，为该种药用资源的综合开发和利用奠定了基础。