胃癌中表皮生长因子受体2蛋白表达与临床病理特征的关系

摘要：目的  探討HER2蛋白的表达与胃癌临床病理特征的关系。方法  选取2019年7月～2020年1月我院手术切除的201例胃癌标本的病理资料，均进行免疫组化（IHC）法与原位荧光杂交技术（FISH）检测，并分析不同临床病理特征HER2过表达情况。结果  共201例标本中，IHC 3+ 18例，IHC 2+ 39例，对IHC 2+标本进一步行FISH检测，发现有5例存在突变。IHC 1+ 56例，IHC 0+ 88例，共有23例存在HER2过表达。近端胃癌中HER2过表达率高于中远端胃癌，肠型胃癌HER2过表达率高于混合型和弥漫型胃癌，高中分化胃癌HER2过表达率高于低分化胃癌，差异有统计学意义（P<0.05）;淋巴结是否转移中HER2过表达率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论  HER2蛋白在近端胃癌中的表达高于中远端胃癌，并且HER2蛋白的表达与Lauren分型和组织学分化有关，与淋巴结是否转移无关。

关键词：HER2;免疫组化;病理特征

中图分类号：R735.2                                文献标识码：A                                  DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.13.016

文章编号：1006-1959（2020）13-0057-03

Relationship Between Epidermal Growth Factor Receptor 2 Protein Expression and

Clinicopathological Characteristics in Gastric Cancer

GAO Xie

（Department of Pathology，the Third Affiliated Hospital of Suzhou University/Changzhou First People's Hospital，

Changzhou 213000，Jiangsu，China）

Abstract：Objective  To explore the relationship between HER2 protein expression and clinicopathological characteristics of gastric cancer.Methods From July 2019 to January 2020， the pathological data of 201 gastric cancer specimens that were surgically removed in our hospital were detected by immunohistochemistry （IHC） and in situ fluorescence hybridization （FISH）， and different clinicopathological features were analyzed HER2 overexpression.Results  A total of 201 specimens， IHC 3+ 18 cases， IHC 2+ 39 cases， further FISH testing of IHC 2+ specimens， 5 cases were found to have mutations. IHC 1+ 56 cases， IHC 0+ 88 cases， a total of 23 cases had HER2 overexpression. The overexpression rate of HER2 in proximal gastric cancer is higher than that in middle and distal gastric cancer， the overexpression rate of HER2 in intestinal gastric cancer is higher than that of mixed and diffuse gastric cancer， and the overexpression rate of HER2 in high-differentiated gastric cancer is higher than that in low-differentiated gastric cancer，the difference was statistically significant （P<0.05）; there was no statistically significant difference in the HER2 overexpression rate in lymph node metastasis （P>0.05）.Conclusion  The expression of HER2 protein in proximal gastric cancer is higher than that in middle and distal gastric cancer， and the expression of HER2 protein is related to Lauren typing and histological differentiation， and has nothing to do with lymph node metastasis.

Key words：HER2;Immunohistochemistry;Pathological features

胃癌（gastric cancer）是常見的恶性肿瘤之一，随着医疗水平的不断发展，近年来胃癌的发病率有降低趋势，但其死亡率仍然位于恶性肿瘤第1位[1]。外科手术是目前胃癌的首要治疗手段，但对于中晚期患者，即使采用手术辅以放化疗治疗，其生存率仍然很低。HER2在多种人类肿瘤中均有过表达，如乳腺癌、结肠癌、肺癌、食管癌、子宫内膜癌、卵巢癌等[2，3]，其中在乳腺癌中的应用较广泛。研究显示[4]，乳腺浸润性导管癌患者中有20%～30%存在HER2基因扩增和蛋白的过表达，提示预后较差。因此，提高胃癌患者HER2蛋白的检测率对于改善患者预后具有重要意义。本研究主要探讨HER2蛋白的表达与胃癌临床病理特征的关系，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料  选取2019年7月～2020年1月苏州大学附属第三医院/常州市第一人民医院手术切除的胃腺癌患者201例，其中男性139例，女性62例，年龄34～84岁，中位年龄67岁。纳入标准：①首次确诊胃癌;②有完整临床资料;③临床评估为R0可切除;④未接受放、化疗及免疫治疗;⑤均行开放手术或腹腔镜手术;排除标准：全身广泛转移、合并其他原发性肿瘤及复发性肿瘤者。

1.2试剂  HER-2/NEU抗体试剂，DAB染色液，购自罗氏诊断产品（上海）有限公司，人类HER-2基因扩增检测试剂盒购自厦门艾德生物医药科技股份有限公司。

1.3方法

1.3.1 HE染色  组织均以4%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4 μm连续切片，HE染色，所有HE切片均在光学显微镜下进行病理诊断。

1.3.2免疫组织化学（IHC）染色  采用全自动IHC系统及其配套试剂，切片在光学显微镜下进行诊断，用已被证实的HER2 IHC3+胃癌组织作为阳性对照，被检测切片中癌旁正常胃粘膜组织作为阴性内对照，以PBS缓冲液代替一抗，作为空白对照。

1.3.3荧光原位杂交（FISH）  组织切片经二甲苯脱蜡、复水、高温清洗25 min，用100 mg/L的蛋白酶，在37℃条件下作用5～28 min后，用体积分数1%甲醛溶液固定，作用10 min，再用乙醇梯度脱水，加入混合液10 μl，使之变性。在室温条件下，用乙醇清洗3 min，待其干燥后，加入10 μl DAPI复染剂复染密封，作用20 min后，于荧光显微镜下进行诊断，用已知阳性和阴性胃癌病例作外对照，同一切片中的正常粘膜上皮、淋巴细胞和间质细胞为内对照。

1.3.4判读标准  ①免疫组化判读参照胃癌HER2检测指南（2011版）[5]，结果由2名高年资病理医师判读，其中评分为0和1+者诊断为阴性，评分为3+者诊断为阳性，评分为2+者再次进行FISH检测，见表1;②FISH的判读：选择染色均一、细胞核大小一致、胞核边界完整、无重叠、绿色CEP17信号清晰的细胞，随机计数至少20个癌细胞核中的双色信号。HER2/CEP17≥2.0，提示HER2扩增阳性;HER2/CEP17<2.0，且平均HER2基因拷贝数≥6.0同样也提示HER2扩增阳性;HER2/CEP17<2.0，同时平均HER2基因拷贝数<4.0，提示HER2扩增阴性;HER2/CEP17<2.0，且4.0≤平均HER2基因拷贝数<6.0，HER2扩增不确定，此种情况下再选择另1视野的20个癌细胞，由另1名医师进行判读。

1.4统计学方法  采用SPSS 24.0统计软件进行数据处理，计数资料以[n（%）]表示，采用？字2检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1胃癌HER2免疫组织化学染色结果情况  共201例标本中，IHC 3+ 18例，IHC 2+ 39例，对IHC 2+标本进一步行FISH检测，发现有5例存在突变，  IHC 1+ 56例，IHC 0+ 88例，共有23例存在HER2过表达，见图1。

2.2不同临床病理特征HER2过表达比较  近端胃癌中HER2过表达率高于中远端胃癌，肠型胃癌HER2过表达率高于混合型和弥漫型胃癌，高中分化胃癌HER2过表达率高于低分化胃癌，差异有统计学意义（P<0.05）;淋巴结是否转移中HER2过表达率比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

3讨论

HER2基因又称c-erbB-2基因，是一种原癌基因，定位于染色体17q21，其编码产物HER2蛋白是一种相对分子量为185 kD的跨膜酪氨酸激酶受体，属于表皮生长因子受体（ErbB）家族成员[6，7]。HER2是ErbB家族中唯一没有直接配体的受体[8]，但可以与ErbB家族中其他成员或自身形成异源或同源二聚体来发挥作用，而异源二聚体比同源二聚体具有更高的受体活性和信号转导能力，可激活胞内许多HER2蛋白介导的信号转导通路。HER2基因自身磷酸化后将会激活下游RAF/ERK1/2和PI13K/AKT两条主要的信号通路，这在细胞增殖、生长、分化以及肿瘤细胞侵袭和转移过程中起重要作用[9，10]，因此对其表达的检测将有助于多种肿瘤的预后判断。

Van Cutsem E等[11]研究结果显示，胃癌HER2阳性率约为12%～20%。本研究应用IHC及FISH法对我院201例胃癌标本进行检测，采用2011版胃癌HER2检测指南中所列评分标准，结果发现IHC 3+ 18例，IHC 2+ 39例，对IHC 2+标本进一步行FISH检测，发现有5例存在突变，IHC 1+ 56例，IHC 0+ 88例，共有23例（11.44%）存在HER2过表达，与Gravalos C等[12]报道接近。此外，近端胃癌中HER2过表达率高于中远端胃癌，肠型胃癌HER2过表达率高于混合型和弥漫型胃癌，高中分化胃癌HER2过表达率高于低分化胃癌，差异有统计学意义（P<0.05）;淋巴结是否转移中HER2过表达率比较，差异无统计学意义（P>0.05），提示HER2蛋白的过表达可能与特定类型的癌细胞亚群有关。在正常情况下HER2处于非激活状态，当受到体内外某些致癌因素刺激后被激活，具有肿瘤转化活性，并最终导致肿瘤的发生，包括胃食管结合部、贲门、胃底在内的近端胃癌通常情况下更易受到药物、食物、机械刺激等理化因素影响而致损伤，在损伤后修复过程中发生HER2的过表达，异二聚化等一系列变化，促使新生细胞过度增殖或无限增殖，并逐渐向肿瘤细胞转化，推测其可能是近端胃癌HER2过表达率高于中远端胃癌的原因。肿瘤的发生发展是一个复杂的多途径多机制的过程，以往的研究中并未提及肠型胃癌HER2过表达率高于混合型和弥漫型胃癌的具体机制，另外高中分化胃癌往往大部分形成腺管状，低分化胃癌没有腺管形成，常常是单个细胞浸润，或呈条索状浸润，细胞间缺乏粘附性，失去组织原有的分化形态，此次研究也未能深入分析高中分化胃癌HER2过表达率为何高于低分化胃癌，存在不足，有待于将来在这些方面的进一步研究。据报道[13]，约20%的进展期胃癌有HER2过表达，HER2蛋白过表达与患者预后不良相关。针对HER2蛋白的靶向药物Herceptin可使胃癌在内的多种肿瘤患者受益，延长患者的生存期。因此，正确检测和评价胃癌HER2蛋白表达和基因扩增对胃癌的临床诊治具有重要意义。

综上所述，HER2蛋白在近端胃癌中的表达高于中遠端胃癌，并且HER2蛋白的表达与Lauren分型和组织学分化有关，与淋巴结是否转移无关。

参考文献：

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[5]胃癌HER2检测指南编写组.胃癌HER2检测指南[J].中华病理学杂志，2011，40（8）：553-557.

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[9]Hausherr CK，Schiffer IB，Gebhard S，et al.Dephosphorylation of p-ERK1/2 in relation to tumor remission after HER2 and Raf1 blocking therapy in a conditional mouse tumor model[J].Mol Carcinog，2006，45（5）：302-308.

[10]McCubrey JA，Steelman LS，Abrams SL，et al.Roles of the RAF/MEK/ERK and PI3K/PTEN/AKT pathways in malignant transformation and drug resistance[J].Advan Enzyme Regul，2006（46）：249-279.

[11]Van Cutsem E，Bang YJ，Feng-Yi F，et al.HER2 screening data from ToGA：targeting HER2 in gastric and gastroesophageal junction cancer[J].Gastric Cancer，2015，18（3）：476-484.

[12]Gravalos C，Jimeno A.HER2 in gastric cancer：a new prognostic factor and a novel therapeutic target[J].Ann Oncol，2008，19（9）：1523-1529.

[13]胃癌HER2检测指南编写组.胃癌HER2检测指南[J].中华病理学杂志，2016，45（8）：528-532.

收稿日期：2020-04-17;修回日期：2020-04-27

编辑/杜帆

作者简介：高协（1990.12-），男，江苏常州人，本科，住院医师，主要从事临床病理的取材与诊断工作