高效液相色谱-串联质谱法对蔬菜中矮壮素检测方法的优化

姜亮

摘 要：为了探究白萝卜等蔬菜中的矮壮素残留情况，对高效液相色谱-串联质谱法检测矮壮素的方法进行了优化。研究了萃取溶剂、净化方式对矮壮素提取率的影响，同时优化了流动相比例等色谱条件。

关键词：矮壮素;高效液相色谱-串联质谱法;蔬菜;前处理条件优化

《GB/T 20769-2008》中矮壮素方法检出限太低，基质复杂，试验难度大。经过检测实验发现，矮壮素易溶于水，极性较强，前处理过程中提取效率极差，反相C18柱对其基本不保留，溶剂效应较强，所以如何解决回收率低，基质效应强的问题是该实验的难点。本文通过加标样品，用液相色谱-质谱法进行定量实验，对样品前处理方法和液相色谱条件进行适当优化，以期在保证灵敏度和准确度的前提下，节约成本，提高效率。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

矮壮素（标准品，100 μg/mL，CAS号：999-81-5）：农业部环境保护科研检测所;甲醇（HPLC）、乙腈（HPLC）：瑞典欧普森化工有限公司;甲酸（分析纯，含量≥88%，配制成0.1%水溶液）：国药集团化学试剂有限公司;试验用水为符合GB/T 6682-2008规定的一级水。

蔬菜样品均为平时检测的阴性样品。

1.2 仪器与设备

TSQ Quantum Ultraemr液相色谱-质谱联用仪，配有Thermo FisherU3000液相色谱仪、电喷雾离子源及Thermo LC quan数据处理系统：美国Thermo Fisher科技公司;XY1000-2C电子分析天平：常州市幸运电子设备有限公司。

1.3 方法

1.3.1 试样制备

蔬菜的取样量按照GB/T 8855-2008的规定，抽取蔬菜样品可食部分切碎，混匀，密封，作为试样，表明标记，样品取样部位按照GB/T 2763-2019的规定执行[1]。

1.3.2 试样保存

将试样置于0～4 ℃条件下冷藏保存。

1.3.3 样品前处理

称取经均浆处理的样品10 g（精确至0.01 g）于50 mL聚丙烯離心管内，加入20 mL甲醇∶水=1∶1，用高速匀浆机在15 000 r/min匀浆提取1 min，在8 000 r/min离心5 min，取上清液10 mL，经QuEChERS固相萃取柱净化，在8 000 r/min离心

5 min，吸取1.5 mL过0.22 μm滤膜，供高效液相色谱-串联质谱仪测定。

1.4 空白试验

除不加试料外，按上述步骤的规定进行平行操作。

2 结果与分析

2.1 样品前处理条件的优化

2.1.1 提取液的优化

由于矮壮素易溶于水，极性较强，前处理过程中提取效率极差，通过实验表明，含水量大的农产品回收率要大于含水量少的，所以在前处理过程中加入一定量的水，有助于回收率的提高。提取液选取乙腈∶水=1∶1和甲醇∶水1∶1作为基础提取液，经前处理及仪器分析发现甲醇∶

水=1∶1对于含水量大的农产品的回收率要高于乙腈∶水=1∶1，含水量少的回收率差别不大，所以选用甲醇+水=1∶1[2]。

2.1.2 净化条件的优化

QuEChERS固相萃取柱能有效净化样品，但目标物矮壮素有一部分会被吸附，所以本实验只采用0.22 μmPTFE滤膜过滤，用于液相色谱-串联质谱仪分析。

2.2 标准曲线

将矮壮素标准品用甲醇适当稀释后，用空白样品提取液分别配成矮壮素浓度为5.0 、10.0、25.0、50.0 ng/mL与100.0 ng/mL的标准工作溶液。线性方程为Y=25 718x+54 292.1，在5.0～100.0 ng/mL线性范围内线性良好，相关系数为0.995 3。空白基质提取液校准曲线有效降低了基质效应的影响，提高了回收率。

2.3 回收率和实验室内变异系数CV

选取矮壮素呈阴性的白萝卜，添加最低可接受浓度的矮壮素标准溶液，按试验方法制备样品溶液，在最佳色谱条件下平行测定10次，计算回收率和实验室内变异系数CV。矮壮素的加标回收率在57.9%～62.6%，实验室内变异系数CV为0.49，回收率和实验室内变异系数CV良好。

3 结论

本文在国家标准《GBT 20769-2008 水果和蔬菜中 450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》的基础上，建立了蔬菜中矮壮素的高效液相色谱串联质谱检测方法。探究了溶剂对目标物质提取率的影响，确定了最佳的溶剂比例;改进了净化方法，保证了矮壮素的检测质量。

参考文献

[1]崔海滨，刘晓丽，徐榕蔓，等.超高效液相色谱-串联质谱技术检测番茄制品中矮壮素及缩节胺残留量的方法研究[J].福建分析测试，2009，18（1）：20-24.

[2]王金花，卢晓宇，黄梅，等.超高效液相色谱-质谱法快速分析番茄及其制品中矮壮素和缩节胺残留量[J].分析化学，2007（10）：120-123.