正交试验法优选马齿苋提取工艺的研究

刘文利 焦玉玺

正交试验法优选马齿苋提取工艺的研究

刘文利 焦玉玺

（山东省齐河县畜牧业发展中心 251100）

以T淋巴细胞ANAE阳性率和B淋巴细胞EAC花环率为考察指标，采用正交试验法优选出马齿苋较佳提取工艺。结果表明，马齿苋的最佳提取工艺为液料比12:1，提取时间为20min，提取温度为80℃，提取次数为2次。

正交试验法 T淋巴细胞ANAE阳性率 B淋巴细胞EAC花环率 提取工艺

由于环境中各种致病因素尤其是免疫抑制性致病因素的存在，严重影响了家禽机体的免疫功能，使得疾病的防治变得非常困难。因此，增强家禽机体免疫力势在必行。为此，以增强家禽免疫功能为考察指标，应用正交试验法进行了马齿苋提取工艺的研究。

1 材料与方法

1.1 试验用药物马齿苋饮片，购自安徽亳州中药材交易市场。

1.2 试验用鸡 20日龄健康商品AA肉鸡。

1.3 吸水率的测定 将马齿苋分别称取3份，每份100g，加水1000ml浸泡，每隔10min观察浸透心程度。至全部透心。测定剩余液体的量。吸水率=(加入水量-滤液量)/药材量。

1.4 正交试验设计 本试验采用L9(34)正交表进行设计[1-5]，将液料比(A)、提取时间(B、h)、提取温度(C、℃)及提取次数(D)作为4个试验因素，每个因素3个水平，各因素水平详见表1。

1.5 试验方法 称取处方药材，每份100g，加水200ml浸泡3h后，按正交试验设计进行提取、过滤，滤液浓缩，离心定容至100ml。选择20日龄、体重相近的健康雏鸡100只，随机分为10组，每组10只，1~9组分别对应按L9(34)正交表提供的9种不同提取工艺得到的药物组，第10组为空白对照组即不用药组，连用5d后，分别在25日龄和30日龄抽取各组鸡5只，采集外周血进行T淋巴细胞ANAE阳性率和B淋巴细胞EAC花环率试验。具体正交试验方案见表3。

1.6 T淋巴细胞ANAE阳性率和B淋巴细胞EAC花环率的测定按照参考文献[6]进行检测。

表1 因素与水平设置 (%)

2 结果与分析

2.1 药材吸水率 马齿苋药材的吸水量为自身重量的1.8倍，结果见表2。因此，在正交试验中需先加2倍量水浸泡药材，然后再进行试验。

表2 药材吸水率结果

2.2 正交试验结果

表3 L9(34)正交试验方案及试验结果 (%)

从表3可以看出，正交试验法的9种不同提取工艺得到的提取物饲喂实验鸡后，与空白对照组相比，都对T淋巴细胞ANAE阳性率和B淋巴细胞EAC花环率的提高有不同程度的促进作用，两者差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。

2.3 正交试验结果的直观分析

表4 直观分析结果 (%)

表4数据是分别在25日龄和30日龄时检测的T淋巴细胞ANAE阳性率和B淋巴细胞EAC花环率情况。根据所得极差R的大小顺序可知，A因素和D因素对T淋巴细胞ANAE阳性率和B淋巴细胞EAC花环率的影响较大，C因素影响最小。

2.4 最优配方的筛选 由极差R可知，A因素是影响两者大小的重要因素，D因素次之，C因素影响最小。进一步从节约生产成本考虑，所以该马齿苋的最佳提取工艺为A3B1C1D1。

3 结论

（1）通过正交试验及统计分析，得到该马齿苋的最佳提取工艺为液料比为12:1，提取时间为20min，提取温度为80℃，提取次数为2次。（2）正交试验是一种适用于多因素多水平的试验设计方法，可以通过主要因素、水平的组合试验，找出各因素、水平间的内在组合规律，达到与全面组合试验相似的效果。应用正交试验的方法来优选中药最佳提取工艺，可以大大缩短研发时间。（3）在家禽机体的免疫活性细胞中，T淋巴细胞和B淋巴细胞的数量与机体免疫功能的高低有着非常密切的关系，两者数量的增加反映了机体免疫力的提高，因此，T淋巴细胞和B淋巴细胞的多少是机体免疫机能强弱的一个具体表现。（4）本试验在国内首次以T淋巴细胞ANAE阳性率和B淋巴细胞EAC花环率作为中药提取工艺的衡量指标，使中药提取工艺的筛选更接近临床实际，避免了以中药中某一种或几种成分作为指标来筛选提取工艺的弊端，利于中药发挥实际临床疗效，使其筛选评价更加接近生产实际，更加接近市场需求。

[1] 莫惠栋. 农业试验统计[M]. 北京: 中国农业出版社, 1994.

[2] 吕萍, 李倩. 马齿苋多糖三种提取方法的比较研究[J]. 食品工业, 2014, 35(8)：82-84.

[3] 王领, 李富恒等. 马齿苋提取物制备工艺、安全性及抗敏功效的研究[J]. 天然产物研究与开发, 2014, 26: 583-587.

[4] 王国玉, 王璐等. 马齿苋水提取物抗炎作用研究[J]. 河北医学, 2014, 20(11): 1866-1868.

[5] 马齿苋不同提取物对肠炎沙门菌的体外抑菌试验[J]. 中国兽医杂志, 2016, 52(4): 71-73.

[6] 崔治中. 兽医免疫学实验指导[M]. 北京: 中国农业出版社, 2006.

（2020–04–25）

S816.75

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1007-1733(2020)07-0014-02