自制美洛昔康注射液装量、可见异物及无菌检查

郭华亮 王强 董凤妍 徐海生 李法红

自制美洛昔康注射液装量、可见异物及无菌检查

郭华亮 王强 董凤妍 徐海生 李法红

（山东金瑞生物科技有限公司 山东 潍坊 261061）

本试验主要针对美洛昔康注射液的装量、可见异物及无菌方面进行了检查，结果显示：3个批次的美洛昔康注射液平均装量在50.3~51.2ml之间，单个样品的装量都在表示量的97%以上，符合注射液装量要求；3个批次美洛昔康注射液样品均未检出明显可见异物，均符合规定；无菌检查显示3个批次的美洛昔康注射均无菌，合格率100%，符合注射液要求。

美洛昔康 装量 注射液 可见异物 无菌检查

非甾体抗炎药(NSAIDs)是目前广泛用于治疗急性和慢性炎症及疼痛的药物，其作用机制是通过抑制环氧合酶(COX)而阻止致炎的前列腺素(prostaglandins，PGs)的合成。然而大多数NSAIDs的使用受到与之相关的副作用，特别是胃肠副作用高发生率所限制[1, 2]。我国现有兽用NSAIDs品种单一，临床使用中副作用较为明显，因此，寻找副作用小的NSAIDs是兽医临床急需解决的问题[3、4]。

美洛昔康(Meloxicam)是一种烯醇酰胺类的新型非甾体抗炎药，化学名为4-羟基-2-甲基-N-(5-甲基-2-噻唑基)-2H-1，2-苯并噻嗪-3-甲酰胺-1，1-二氧化物[5]，是勃林格殷格翰(Boehringer In－gelheim)公司1996年研发上市的一种新型倾向性环氧化酶2抑制剂，临床研究表明美洛昔康具有较强的抗炎活性，胃肠道和肾耐受性优于其他的非甾体抗炎药[6]，临床广泛应用于牛呼吸道疾病、犊牛腹泻、奶牛乳腺炎以及猪非感染性运动异常以减轻跛行与炎症[7]；与适宜的抗生素合用，辅助治疗产后败血症与毒血症[8]。目前国内批准勃林格殷格翰公司进口的美洛昔康注射液最高含量达到2%。而国内开发的美洛昔康剂型主要有美洛昔康片剂、美洛昔康混悬液为主，国内美洛昔康注射液最高含量仅为0.5 %，且仅用于犬猫等宠物疾病的防治[9]。而应用于大型家畜奶牛、猪的高含量美洛昔康注射液的开发一直存在技术瓶颈，也是国内制药企业亟需解决的技术难题[10]。本研究针对我公司制备的美洛昔康注射液的装量、可见异物和无菌方面进行考察，以期为美洛昔康注射液临床应用推广及新药开发提供理论及试验支持。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 蛋白胨(批号20160517)、氯化钠(批号20160121)、磷酸二氢钾(批号20160031 2)、磷酸氢二钠(批号20160211)均购自南京化学试剂股份有限公司；硫乙醇酸盐液体培养基(批号20160523)、改良马丁培养基(批号20160110)、营养肉汤培养基(批号20160121)、改良马丁琼脂培养基(批号20160121)均购自国药集团化学试剂有限公司；供试品美洛昔康注射液(50ml)由山东金瑞生物科技有限公司生产。

1.1.2 菌种及仪器 验证用菌种：金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003)购自中国兽医药品监察所；铜绿假单胞菌(CMCC(B)10104)购自中国兽医药品监察所；枯草芽孢杆菌(CMCC(B)63501)购自中国兽医药品监察所；生胞梭菌(CMCC(B)64941)购自中国兽医药品监察所；白色念珠菌(CMCC(F)98001)购自中国兽医药品监察所；黑曲霉(CMCC(F) 98003)购自中国兽医药品监察所。压力蒸汽灭菌器45~150L购自山东省青岛市仪器检测公司；YH-31型隔水式恒温培养箱、SH-100型超净工作台购自苏州祥禹净化科技有限公司；SC400A型澄明度检测仪购自天津博宇伟业科技公司。

1.2 方法

1.2.1 装量检查 按照最低装量检查法(中国兽药典2015年版一部附录7页)对规格为50ml/瓶的进行装量检查。具体方法如下：取样品3瓶，开启时注意避免损失，将内容物转移至预经标化的干燥量入式量筒中，将容器倒置15min，尽量倾净，读出每个容器内容物的装量，并求其平均装量。如有1个容器装量不符合规定，另取3个复试，应全部符合规定。每瓶注射液的装量均不得少于其标示量的97%。取公司生产的3批次美洛昔康注射液按上述方法检查。

1.2.2 可见异物检查 依据《中华人民共和国兽药典》2015年版一部附录可见异物第一法检查，取3批号美洛昔康注射液，每批号取20瓶，除去容器标签，擦净容器外壁，在光照度为2000~ 3000lx的条件下轻轻旋转和翻转容器，仔细观察有无异物出现。

1.2.3 无菌检查 依据《中华人民共和国兽药典》2015年版一部附录137页无菌检查法要求进行试验检查和方法验证试验。（1）稀释液的制备：pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清；分装到500ml玻璃瓶中，装量为300ml，加塞、轧盖。经115 ℃ 30 min湿热灭菌。（2）培养基配制：硫乙醇酸盐流体培养基：取本品29.3g于1L蒸馏水中，加热溶解，煮沸数分钟，分装于适当容器中，备用。改良马丁培养基：取本品28.5g，加热溶解于1L蒸馏水中，分装备用。营养肉汤培养基：取本品19.0g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装备用。改良马丁琼脂培养基：取本品42.5g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装备用。（3）培养基灭菌与贮存：硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基经115℃ 30min湿热灭菌；营养肉汤培养基经121℃ 20min湿热灭菌。已经灭菌好的培养基，待冷却后置冰箱保存，保存温度为2~8℃，有效期为1个月。（4）样品无菌检查：无菌操作取3批次供试样品，各10瓶，每瓶取10ml，分别混合至100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，振摇，再分别加入一般薄膜过滤器，滤膜孔径应不大于0.45μm直径约为50mm，进行薄膜过滤。用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液各冲洗3次，100ml/次，冲洗结束后，在无菌条件下取出滤膜，剪成2等分，分别置于50ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良的马丁培养基的培养瓶中，封好口，硫乙醇酸盐培养基置33℃、改良马丁培养基置25℃，培养14d，逐日观察各瓶内是否浑浊，试验以金黄色葡萄球菌设置阳性和阴性对照，阳性对照和阴性对照处理与样品处理步骤相同。

2 结果

2.1 装量检查结果

按我国兽药典规定，50ml注射液装量抽样检查应抽取供试品3个，每个容器装量不少于标示装量的97 %，平均装量不少于标示量。试验抽取的美洛昔康注射液(50ml)装量检结果显示3个批次美洛昔康注射液样品的平均装量在50.3~51.2ml之间，单个样品的装量都在表示量的97%以上，均符合注射液装量规定，合格率为100%，3个批次美洛昔康注射液装量检查结果如表1所示。

表1 美洛昔康注射液装量检查结果 (ml、%)

2.2 可见异物检查结果

我国兽药典规定注射用溶液无菌检查要求，取供试品20支(瓶)中，均不得检出可见异物。如检出可见异物的供试品超过1支(瓶)，应另取20支(瓶)同法检查，均不得检出，否则为不合格。本试验抽取的美洛昔康注射液可见异物检查结果显示，3个批次美洛昔康注射液样品均未检出明显可见异物，均符合规定，合格率为100%，可见异物检查结果见表2。

表2 美洛昔康注射液可见异物检查结果

2.3 无菌检查结果

无菌检查阳性对照结果显示金黄色葡萄球菌在硫乙醇酸盐流体培养基内培养，5d后生长良好；阴性对照结果显示无接种金黄色葡萄球菌的硫乙醇酸盐培养基在33℃条件下，培养14d后，仍然无菌生长，这说明本试验操作符合无菌检查操作，试验设置的阳性和阴性对照对比结果有效。3批次美洛昔康注射液无菌检查结果显示，样品在硫乙醇酸盐培养基接种管和改良马丁培养基接种管内，分别在33℃和25℃条件下，培养14d均无菌生长，这说明3批次的美洛昔康注射液符合注射液无菌要求。这也说明目前美洛昔康注射液生产条件符合无菌要求，可以开展规模化生产。

注：“+”为生长，“-”为不生-长。接种管数中1代表用硫乙醇酸盐培养基接种管；2代表用改良马丁培养基接种管。

3 结论

美洛昔康具有较好的解热镇痛和消炎的作用，对大型哺乳动物，如牛的乳房炎，猪的子宫炎治疗，赛马的跛行等具有较好的治疗效果，目前国内生产的美洛昔康注射液主要存在缺点是药物含量较低，不适合于大型哺乳动物使用，仅仅供给小型宠物使用。目前高含量的美洛昔康注射液主要依赖于进口，处于垄断地位，其价格昂贵，限制了该药物的广泛使用，因此，在目前畜牧业快速发展的背景下，需要积极开展该药物的研究以打破国外的技术垄断。本研究对自制美洛昔康注射液的装量、可见异物及无菌方面进行了检查，结果显示自制的美洛昔康注射剂装量符合要求，无明显可见异物，注射液无菌，合格率100%，符合兽药注射液类剂型的要求。本研究为进一步开展美洛昔康注射液的研发及生产奠定了基础，也为该新剂型兽药的临床应用推广以及上市前申报材料的工作准备提供了一定的试验依据。

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（2020–04–22）

S859.79

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1007-1733(2020)07-0008-03