上皮性卵巢癌循环肿瘤DNA含量的特点及其与肿瘤组织基因表达的相关性分析

曹文明，张奎美，高玉涛

（山东省昌乐县人民医院 妇科，山东 昌乐 262400）

0 引言

卵巢上皮性癌是常见的妇科恶性肿瘤，死亡率居妇科恶性肿瘤的首位。早期缺乏特异性的腹盆腔症状和敏感标记物，因而卵巢癌的早期诊断非常困难，70%以上的患者就诊时已属晚期。早发现、早诊断、早治疗是卵巢癌治疗的关键。肿瘤标志物在卵巢癌的诊断和疗效评估方面起到了重要的作用，如CA125和HE4，但现有的肿瘤标志物敏感性和特异性尚不够理想[1]。因此，寻求理想的肿瘤标记物尽早明确诊。相关研究表明[2-3]：循环肿瘤DNA（ctDNA）被证实存在多种肿瘤患者中，被定性、定量，并进行追踪，在肿瘤的评估及治疗评估上具有重要价值，但是，关于上皮性卵巢癌循环肿瘤DNA含量的特点及其与肿瘤组织基因表达的相关性的研究较少。因此，本文以上皮性卵巢癌患者作为对象开展研究，探讨上皮性卵巢癌循环肿瘤DNA含量的特点，并对循环肿瘤DNA与肿瘤组织基因表达的相关性进行分析，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料。选择2018年10月至2020年1月上皮性卵巢肿瘤患者20例，其中有10例为恶性上皮性卵巢肿瘤，设为恶性组；10例为良性上皮性卵巢肿瘤，设为良性组，另选择同期健康者10例，设为对照组。对照组10例，年龄28-70岁，平均（55.15±2.35）岁；恶性组10例，年龄27-69岁，平均（54.05±3.55）岁；良性组10例，年龄26-68岁，平均（54.65±3.15）岁。

1.2 方法

1.2.1 卵巢癌患者ctDNA检测样本的获取：卵巢肿瘤患者术前1周、术后3天的血样均于清晨空腹时抽取肘静脉血10 mL于EDTA抗凝管中，并在30分钟至2 h 内做以下处理：①在4℃条件下1800 g 离心 10 min，离心后将血浆分装到多个 2.0 mL的离心管中。下层血细胞分装到 2 mL 冻存管中，即为所需血细胞；②在4℃条件下以 16000 g 离心 10 min 去除残余细胞，将上清转入新的 2.0 mL的离心管中，即得到所需的血浆。而后将样品保存到-80℃冰箱中或干冰中待测定。

1.2.2 DNA提取及定量＜BR&NBSP；＞血浆游离 DNA 提取采用 QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit（Qiagen，cat.no.55114）操作流程进行。

1.2.3 采取恶性组所有患者的Survivin、FHIT、nm23-H1的样本，采用免疫组化二步法进行分析。三者的抗体浓度分别为1:50，1:100和1:500.。

1.3 观察指标。①各组循环肿瘤DNA含量情况。记录各组之间循环肿瘤DNA 的情况，并进行比较；②循环肿瘤DNA与肿瘤组织基因表达的相关性。采用SPSS Pearson 相关性分析软件对恶性上皮性卵巢癌患者循环肿瘤DNA与肿瘤组织基因表达的相关性进行分析。

1.4 统计学分析。采用SPSS 18.0软件处理，计数资料行χ2检验，采用n（%）表示，计量资料行t检验，采用（）表示，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组循环肿瘤DNA含量比较。上皮性卵巢癌患者的循环肿瘤DNA的含量高于对照组（P＜0.05），且恶性组循环肿瘤DNA的含量明显高于对照组和良性组（P＜0.05），见表1。

表1 各组循环肿瘤DNA含量比较（）

表1 各组循环肿瘤DNA含量比较（）

组别 例数 循环DNA含量对照组 10 16.8±9.1良性组 10 87.9±77.8恶性组 10 630.3±533.6 t-9.326 P-0.000

2.2 循环肿瘤肿瘤DNA与肿瘤组织基因表达的相关性。SPSS Pearson 相关性分析机构表明：循环肿瘤DNA的含量水平变化与FHIT无相关性，循环肿瘤DNA的含量水平变化与Survivin、nm23-H1基因呈正相关（P＜0.05），见表2。

表2 循环肿瘤DNA与肿瘤组织基因表达的相关性

3 讨论

卵巢上皮性癌是常见的妇科恶性肿瘤，其5年生存率仍然停留在30%-40%左右，死亡率居妇科恶性肿瘤的首位。肿瘤标志物在卵巢癌的诊断方面起到了重要的作用，但现有的肿瘤标志物敏感性和特异性尚不够理想[4]。循环肿瘤DNA（ctDNA），是在人体血液循环系统中不断流动的携带一定基因＜BR&NBSP；＞突变特征的，包括突变、缺失、插入、重排、拷贝数异常、甲基化等，来自肿瘤基因组的DNA片段，是癌细胞破裂和死亡后释放入血的遗传物质[5]。在肿瘤形成早期，血液中已经开始有ctDNA了，有多篇文献证明在多种肿瘤患者中ctDNA可以被定性、定量和追踪，可以用于肿瘤的明确诊断和治疗评估。

近年来，循环DNA含量的变化与肿瘤组织基因的关系受到广泛的关注。本研究中，上皮性卵巢癌患者的循环肿瘤DNA的含量高于对照组（P＜0.05），且恶性组循环肿瘤DNA的含量明显高于对照组和良性组（P＜0.05），说明上皮性卵巢癌循环肿瘤DNA的含量明显高于其他组，可以作为一种卵巢癌的检查方法。循环肿瘤DNA存在于血浆或血清中的单链，或者双链DNA分子，有研究表明[6]：循环肿瘤DNA具有许多肿瘤相关的分子特征，包括具有单核苷酸突变、甲基化改变、肿瘤来源的病毒序列。本研究中，SPSS Pearson相关性分析机构表明：循环肿瘤DNA的含量水平变化与FHIT无相关性，循环肿瘤DNA的含量水平变化与Survivin、nm23-H1基因呈正相关（P＜0.05），说明循环肿瘤DNA 含量可能与肿瘤的侵袭与转移能力有关。早期研究表明：Survivin、FHIT基因与肿瘤细胞的凋零有关，而nm23-H1可能与恶性肿瘤的转移有关。临床研究表明：循环肿瘤DNA的含量水平变化与Survivin、nm23-H1基因呈正相关，但循环肿瘤DNA 含量与nm23-H1基因有明显的差异，因此判断循环DNA的含量变化可能与肿瘤的转移能力相关。虽Survivin基因与循环肿瘤DNA 含量成正相关，但是本研究中的结果不足以支持循环DNA与肿瘤细胞凋亡的基因表达有关。

综上所述，患有上皮性卵巢癌的患者其循环肿瘤DNA含量较高，循环肿瘤DNA含量与肿瘤组织存在相关性，可能与肿瘤的侵袭转移能力相关，且在上皮性卵巢癌的诊断具有较高的潜在价值。