高效液相色谱仪测定烘培食品中脱氢乙酸

何殷萍 裴波

绵阳市食品药品检验所 四川绵阳 621000

当前，食品工程中，脱氢乙酸测定方法主要是气相色谱法、液相色谱法、液相色谱-串联质谱法。其中，高效液相色谱仪测定方法最为广泛。

1 脱氢乙酸概述

脱氢乙酸（DHA）已被批准在中国食品工业中用作食品添加剂，具有防腐和保鲜作用，并且对酵母和霉菌具有显着的抑制作用。但是，在食品中过量使用脱氢乙酸对人体有害。脱氢乙酸被人体组织迅速完全吸收，进入人体后，分散在血浆和许多器官中，具有抑制体内各种氧化酶的作用。1973年，日本报道了这种防腐剂引起了肾结石等问题，出于对其安全性的怀疑，逐渐被山梨酸替代。脱氢乙酸毒性是山梨酸的十倍。日本目前限制使用此类防腐剂，欧洲共同体禁止使用此类防腐剂。大鼠口服脱氢乙酸的LD为1g/kg，每公斤体重的每日可接受摄入量（ADI值）未指定。中国的《食品添加剂使用卫生标准》规定，脱氢乙酸可用于发酵豆腐，咸菜和橙汁中，最高用量为0.30克/千克。尽管唯一支持的标准测试方法是气相色谱法，但该方法的缺点是操作复杂且对所用试剂有剧毒。50%的甲醇溶液用于超声提取，食品中的脱氢乙酸可通过高效液相色谱法直接测量[1]。

2 材料及方法

2.1 原理

用氢氧化钠溶液提取试样中的脱氢乙酸，经脱脂，去蛋白处理，过膜，用ThermoU3000紫外检测器测定，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

2.2 仪器与试剂

（1）仪器。ThermoU3000配紫外检测器，十万分之一天平，粉碎机。（2）试剂。甲醇（色谱纯）、0.02mol·L-1乙酸铵溶液、50g·L-1氢氧化钠溶液、10%甲酸溶液、120g·L-1硫酸锌溶液、70%甲醇溶液、正己烷（色谱纯）、脱氢乙酸标准品（编号：21680，批号：171011，含量：99.90%）、脱氢乙酸钠标准品（编号：BW4067，批号：T160352，含量：99.40%）、脱氢乙酸标准溶液（编号：SB05-261-2011，批号：201902，含量：1000µg·mL-1），所有标准品均在有效期内。（3）色谱条件。色谱柱：依利特C184.6mm×250mm，5μm；流动相：甲醇+0.02molL-1乙酸铵溶液（10+90，体积比）；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；进样量：20μL；检测波长：293nm。

3 样品处理

3.1 蛋糕

用粉碎机将蛋糕粉碎，混匀。称取试样2g（精确至0.001g），置于25mL离心管中，加入10mL水、5mL硫酸锌溶液，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，转移至25mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。置于离心管中，超声提取10min，转移到分液漏斗中，加入10mL正己烷，振摇1min，静置分层，弃去正己烷层，加入10mL正己烷重复进行一次，取下层水相置于离心管中，4000r·min-1离心10min，取上层清液过膜上机待测[1]。

3.2 橙汁饮料

样品混匀后，称取试样5g（精确至0.001g），置于50mL离心管中，加入10mL水，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。置于离心管中，4000r·min-1离心10min。取20mL上清液用10%的甲酸溶液调pH至5，定容至25mL。取5mL过已活化的C18固相萃取柱（500mg，6mL），用5mL水淋洗，2mL 70%的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液2mL，涡旋混合，取上清液过膜上机待测。

4 结果与分析

4.1 样品预处理

（1）蛋糕。样品在调pH至7.5时，因临界点不好掌握，用20g·L-1氢氧化钠溶液调pH时，因加入量在5～8mL，加入量较大，后期混匀较难，故在国家标准方法基础上相应提高氢氧化钠溶液的浓度，用50g·L-1氢氧化钠溶液调pH时，加2.75～3.00mL氢氧化钠溶液将其pH值控制在6.8～8.2。（2）橙汁饮料。因在处理前测得原样pH值在4.6，样品中脱氢乙酸含量为未检出，故在加标测定时，对调pH和不调pH做了相应的比对，在处理过程中固相萃取柱必需保持湿润状态，通过反复实验，在经过固相萃取柱净化后用2mL洗脱液洗脱存在洗脱不完全现象，故对方法进行相应调整，将洗脱液提高至5mL，以确保洗脱完全[2]。

4.2 线性范围与最低检出限

（1）线性范围。在本实验室条件下，脱氢乙酸含量在0.4～200μg·mL-1内，标准含量（x）与峰面积（y）有良好的线性关系，其相关系数为1.0000，回归方程为y=0.5215x+0.1729。（2）最低检出限取浓度0.08、0.20、0.40μg·mL-1标准样品分别进样10次，最低检出限：0.4+3S=0.44μg·mL-1。

4.3 方法提取回收率实验与精密度实验

取2g左右的蛋糕匀样分别加入1.0mg·mL-1的标准液0.075、0.300、1.500mL，各测定6次，其平均回收率为84.8%～111.2%，RSD值在5.14%～7.39%；取5g混匀后的橙汁饮料分别加入1.0mg·mL-1的标准液 0.025、0.200、1.00mL，其平均回收率为79.2%～100.2%。各测定5次，RSD值在2.65%～8.36%，见表1。

表1 橙汁饮料加标样结果汇总表

5 结语

总之，通过本方法对脱氢乙酸的测定，方法线性范围宽，基质干扰少，灵敏度高，前处理简单，准确度高。