HS-SPME-GC-MS分析商陆及其炮制品挥发性成分

马银宇 卢金清 邓雅倩

摘要：利用顶空固相微萃取技术（HS-SPME）与气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）对比分析商陆（Phytolacca acinosa Roxb.）不同炮制品挥发性成分，并通过面积归一化法计算每种成分的相对百分含量。结果表明，从商陆生品中检测出39个峰，鉴定出29种成分，占挥发性成分的76.52%;从醋商陆中检测出33个峰，鉴定出27种成分，占挥发性成分的68.78%。共有挥发性成分有14种，与商陆生品相比，醋商陆减少15种成分，新增13种成分。商陆不同炮制品中挥发性成分的组成和含量均发生了变化。

关键词：商陆（Phytolacca acinosa Roxb.）;炮制品;顶空固相微萃取;气质联用技术;挥发性成分

中图分类号：Q949.745.4         文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2020）06-0153-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.06.031           开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Analysis of volatile components of different processed products of

Phytolacca acinosa Roxb. by HS-SPME-GC-MS

MA Yin-yu，LU Jin-qing，DENG Ya-qian

（Research and Development Center of Medicinal Plant in Hubei Province，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China）

Abstract： The volatile components of different processed products of Phytolacca acinosa Roxb. were compared and analyzed by headspace solid phase microextraction （HS-SPME） and gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS）. The relative percentage of each component was calculated by area normalization method. Results showed that 39 peaks were detected and 29 constituents were identified， accounting for 76.52% of the volatile constituents. 33 peaks were detected and 27 constituents were identified from vinegar Phytolacca acinosa Roxb.， accounting for 68.78% of the volatile constituents. There were 14 volatile components in both. Compared with Phytolacca acinosa Roxb. vinegar Phytolacca acinosa Roxb. has 15 components reduced and 13 components added.

Key words： Phytolacca acinosa Roxb.; processed products; HS-SPME; GC-MS; volatile component

商陆为商陆科（Phytolaccaceae）植物商陆（Phytolacca acinosa Roxb.）或垂序商陆（P.americana L.）的干燥根，别名夜呼、山萝卜、当陆、野萝卜等。性苦，寒，有毒;归肺、脾、肾、大肠经。有逐水消肿、通利二便、外用解毒散结等功效[1]。现代临床研究表明，商陆经醋制后其毒性明显降低，有利于临床安全用药[2，3]。2015年版《中国药典》虽记载有商陆炮制品，对商陆及其炮制品的研究报道非常少，尤其是利用HS-SPME-GC-MS对商陆及其不同炮制品的挥发性成分研究鲜有报道。

本研究采用HS-SPME-GC-MS分析商陸及其不同炮制品挥发性成分，探讨不同炮制方法对商陆挥发性成分的影响，以期为商陆及其炮制品在临床用药过程中提供参考。

1  材料与方法

1.1  材料

1.1.1  药材  商陆饮片购于武汉强康药业有限公司，经湖北中医药大学生药教研室张秀桥教授鉴定为商陆科（Phytolaccaceae）植物商陆（Phytolacca acinosa Roxb.）的干燥根。

1.1.2  仪器  手动固相微萃取（SPME）进样器（IKA，德国）;Agilent 6890/5973型气相-质谱-计算机联用仪（Hewlett-Packard公司）;顶空瓶（15 mL）;65 μm聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯（PDMS/DVB）萃取纤维头（Supelco公司）;ALC-210.2电子天平（北京赛多利斯天平有限公司，d=0.01 g）。

1.2  方法

1.2.1  醋商陆的制备  商陆醋制品炮制方法参照2015年版《中国药典》四部0213炮制通则中规定的处理方法。精确称取100 g商陆生品，然后再加入适量米醋搅拌均匀，闷透，再放入炒制容器内，炒制至规定的程度时，取出，放凉备用。

1.2.2  GC-MS色谱与质谱条件  GC条件：色谱条件HP-5MS石英毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）;升温程序为：50 ℃开始，以8 ℃/min升温至90 ℃，然后再以1 ℃/min升温至100 ℃，然后以15 ℃/min升温至190 ℃，最后再以10 ℃/min升温至230 ℃，保留3 min;载气：高纯度氦气（99.999%），柱流速：0.8 mL/min，进样口温度：230 ℃。

MS条件：EI源;离子源温度230 ℃，电离电压70 eV;四级杆温度150 ℃;扫描质量范围35～550 m/z。

1.2.3  顶空固相微萃取条件  经过对被测样品的用量、萃取时的平衡时间，萃取挥发性成分时的温度、萃取时间以及解吸附时间等综合考察，最佳萃取条件确定为：商陆样品1.5 g置于15 mL的顶空瓶中，轻轻插入带有萃取纤维头（65 μm PDMS/DVB）的手动进样器，在120 ℃下预平衡15 min后，再压缩手柄伸出萃取头萃取20 min，取出后立即插入气相色谱仪进样口（温度230 ℃）解吸附3 min，进样模式为不分流进样。

商陆醋制品试验条件同上。

2  结果与分析

通过化学工作站数据处理和面积归一化法计算总离子流中各组分的相对百含量，通过质谱数据库NIST08检索各峰的质谱数据，再结合各峰的相对保留时间来确定各个组分。

从商陆生品中分离出39个峰，鉴定出29种成分，占总挥发性成分的76.52%。从商陆醋制品中分离出33个峰，鉴定出27种成分，占总挥发性成分的68.78%（图1、图2及表1）。

3  小结与讨论

从商陆生品中鉴定出的29种成分，占总挥发性成分的76.52%;从商陆醋制品中鉴定出27种成分，占总挥发性成分的68.78%。商陆生品中占挥发性成分相对百分含量最高的是α-蒎烯（32.40%），其次为正己酸（4.79%）、罗汉柏烯（3.39%）、乙酸松油酯（3.14%）、姜黄素（2.95%）、右旋萜二烯（2.72%）、左旋乙酸冰片酯（2.30%）、（+）-花侧柏烯（1.92%）、α-松油醇（1.41%）等。在商陆醋制品中，挥发性成分相对百分含量最高的是雪松烯（22.86%），其次为壬醛（6.90%）、正己酸（5.57%）、罗汉柏烯（3.44%）、左旋乙酸冰片酯（2.92%）、右旋萜二烯（2.48%）、乙酸松油酯（2.33%）、合成右旋龙脑（1.78%）等。商陆炮制前后共有挥发性成分有14种，其中含量较高的分别是正己酸、罗汉柏烯、乙酸松油酯、右旋萜二烯、左旋乙酸冰片酯等，其中商陆醋制后正己酸、罗汉柏烯、左旋乙酸冰片酯的含量明显增多，而乙酸松油酯、左旋乙酸冰片酯的含量却明显减少。

商陆醋制后挥发性成分中醇类成分相对百分含量有所降低，醛类成分相对百分含量有所升高。商陆中薄荷醇和丹皮酚是中药中的重要有效成分，其中薄荷醇是一种饱和的环萜醇。研究表明，薄荷醇具有清凉止痒、抗菌、抗肿瘤和保护胃肠道等功效[4];丹皮酚具有抗肿瘤、保肝护肾、降血糖、抗菌消炎、抗心律失常、抗过敏、保护心血管、保护神经、增强免疫力等多种药理作用[5，6]。同时，在醋商陆中检测到樟脑。樟脑是樟科植物樟的根、茎、叶经水蒸气蒸馏法取得挥发油后，再用分馏法从中提取得到或用化学方法制得的一种饱和环状酮，具有兴奋、消炎镇痛、抗炎止咳等药理作用[7]。从挥发性成分的角度考虑，商陆炮制前后药理作用大致相同，但活性物质的改变必然引起临床疗效的改变。研究发现，苯甲醛、冰片、（+）-花侧柏烯3种成分在醋商陆中的含量明显减少，苯甲醛广泛存在于植物中，具有醛类的通性，易被氧化，有低毒;冰片即为2-茨醇，吸收后有微毒，有致敏性，接触后会出现头晕、恶心、呕吐甚至惊厥等;（+）-花侧柏烯也有一定刺激性，吞咽后有毒。三者的含量明显减少甚至消失，可见经炮制后商陆毒性有所降低，可为临床安全应用商陆提供一定的参考[8]。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010.152.

[2] 宫  乐，吴  皓，郁红礼，等.商陆提取物醋制前后毒性作用的比较研究[J].中国中药杂志，2013，38（10）：1610-1613.

[3] 周  倩，姚廣涛，金若敏.商陆皂苷甲的肾细胞毒性作用[A].中国药理学会，中国毒理学会.2013年（第三届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛论文集[C].上海，2013.491-492.

[4] 陈  晨，刘兆国，汪思亮，等.薄荷醇及其受体TRPM8与肿瘤关系研究进展[J].中国药理学通报，2015，31（3）：312-314.

[5] 计春燕，谭诗云，刘长青.丹皮酚抑制人大肠癌细胞增殖及其与化疗药物的协同作用[J].中国肿瘤临床，2005，32（9）：513-515.

[6] 计春燕，汪  毅，谭诗云.丹皮酚对人大肠癌HT-29细胞bcl-2和bax基因表达的影响[J].肿瘤防治研究，2007，9（5）：603-605.

[7] 熊  颖，吴雪茹，涂兴明，等.樟脑的药学研究进展[J].检验医学与临床，2009，6（12）：999-1001.

[8] 陈  琳，吴  皓，王  媚，等.商陆醋炙前后对动物黏膜刺激性比较研究[J].中国中药杂志，2011，36（7）：859-863.