苹果汁中多菌灵的高效液相色谱法研究

摘 要：多菌灵是苹果生产中常用的农药，具有毒性，会引发胸闷、恶心、抽搐等症状，国标中明确规定了蘋果汁中的多菌灵残留量要求。基于此，在苹果汁投入市场前，需进行多菌灵含量检测，本文主要探究苹果汁中多菌量的高效液相色谱法，论述其应用过程与要点，为苹果汁中多菌灵检测提供帮助。

关键词：苹果汁;多菌灵;高效液相色谱法

蔬菜水果中的多菌灵检测方法较为多样，如紫外光谱法及高效液相色谱法等。液相色谱法的应用最为普遍，但其对试剂要求较高;紫外光谱法前处理过程较为复杂，其检测结果准确性偏低。就此，探究一种高效、灵敏度高的苹果汁中多菌灵检测方法具有鲜明现实意义。

1 苹果汁中多菌灵的高效液相色谱法实验

1.1 仪器与试剂

实验所用仪器包括旋转蒸发仪、溶剂过滤器、pH计、氮吹仪与高效液相色谱系统;实验所用试剂包括多菌灵标准储备液（200μg/mL）、氯化钠溶液（100g/L）、盐酸（2mol/L）、乙酸乙酯、甲醇等。

1.2 样品处理

在苹果汁中多菌灵的高效液相色谱检测中，需采用合理处理方法，提取苹果汁中的多菌灵，保障检测的准确性。常用的蔬菜水果中多菌灵提取方法较多，本实验选择两种，通过对比分析，选出最优的样品处理方法。

1.2.1 方法一：快速样品前处理方法

应用高速组织捣碎机对苹果进行均质处理，将均质后的苹果置于50mL离心管中，添加10mL乙腈，进行涡旋混匀处理，再添加4g无水硫酸镁、1g硫化钠及1g无水醋酸钠，涡旋2min后，以4000r/min的转速进行离心处理，处理时间5min;静置后吸取5mL上清液，与125mg的N-丙基乙二胺、750mg无水硫酸镁共同置于15mL离心管中，以上述同样参数，进行涡旋与离心处理;最后，静置后吸取2mL上清液，进行45℃水浴处理，再应用氮吹仪将溶液吹干，使用乙腈溶解残渣，用0.45μm的滤膜过滤溶液，完成样品溶液的制备。

1.2.2 方法二：乙酸乙酯提取方法

应用高速组织捣碎机制备苹果汁，贮存于-20℃的冰箱中备用。在样品前处理中，称取10g苹果汁置于250mL平底烧瓶中，再添加30mL的氯化钠溶液，应用pH计测量溶液的pH值，添加盐酸调节，使其pH处于6-7之间;然后，向平底烧瓶中添加50mL的乙酸乙酯溶液，将平底烧瓶置于恒温振荡提取器中，处理一个小时;其次，对振荡后的液体进行真空抽滤处理，再应用乙酸乙酯清洗烧瓶内的滤渣，将其与滤液混合，静置分层后收集乙酸乙酯相，并应用乙酸乙酯进行水相的清洗，共清洗两次;最后，将混合溶液过硫酸钠柱，置于旋转蒸发仪中，进行旋转蒸发处理，在溶液近干时停止仪器，向溶液内添加乙酸乙酯，应用氮吹仪将溶液吹干，添加甲醇至1.5mL，完成样品溶液的制备。

对比结果显示，方法二的多菌灵回收率更高。就此，本实验选择乙酸乙酯提取方法进行样品前处理。同时，在本实验中，为验证高效液相色谱法在多菌灵检测方面的准确性，本文共进行三个样品的测定。

1.3 样品检测

在样品检测中，选择菲罗门硅烷基柱作为高效液相色谱检测的色谱柱，其规格为250mm×4.60mm，5μm;色谱柱的温度设定为室温;色谱柱的进样量设定为10μL;将磷酸盐缓冲液和甲醇作为流动相，要求混合液的浓度为0.02mol/L，二者配比为1：1，在置于色谱柱前，需对混合液进行过滤出现，选择0.45μm规格的滤膜;流动相的流速设定为0.8mL/min。在检测时，将检测波长设定为280nm，在发现样品的谱图和多菌量标准液的谱图色谱峰值保留时间相同时，即可完成检测。其中，色谱图中的色谱峰值保留时间作为多菌灵的定性分析数据;色谱图中的色谱峰面积作为多菌灵的定量分析数据，保障检测结果的准确性[1]。

2 实验结果与分析

2.1 实验结果

在本实验选择的三个样品中，测定的多菌量含量分别为4.997×10-2、5.834×10-2、6.722×10-2，均小于国标中限定的0.5，说明苹果汁符合规范要求，可正常投入市场。

2.2 实验分析

2.2.1 样品处理分析

在苹果汁样品的前处理中，需选择合理试剂进行多菌灵的提取。在本实验进行前，选择乙酸乙酯、二氯甲烷及乙腈三种提取剂进行多菌灵回收率的测定。测定结果显示，乙酸乙酯的多菌灵回收率为103.85±1.06;二氯甲烷的多菌灵回收率为39.23;乙腈的多菌灵回收率为22.975± 7.37。可见，乙酸乙酯的回收率最高，可提高苹果汁中多菌灵检测的灵敏度，本实验选择乙酸乙酯作为最终的多菌灵提取剂。

2.2.2 色谱条件分析

在多菌灵检测中，色谱条件会影响检测的准确性。在本实验进行前，对180-780nm波长范围内的吸收光谱进行分析。对比显示，在280nm波长处，光谱图上的杂峰较少，基线较为稳定，且整个光谱图清晰度较高。就此，本实验将色谱柱的检测波长设定为280nm。同时，在实验前，设置不同流动相配比与流速梯度，分别进行多菌灵分析，对比各个方案下的光谱图。对比显示，在流动相选择磷酸盐缓冲液和甲醇时，光谱图最为清晰;在二者配比为1：1时，光谱图的杂峰较少;在流动相的流速设定为0.8mL/min时，出峰时间和峰型最为合理。就此，本实验将色谱检测的流动相选为磷酸盐缓冲液与甲醇，二者配比设定为1：1，流动相的流速设定为0.8mL/min。

2.2.3 标准曲线分析

在实验结果分析中，需应用多菌灵标准液绘制标准曲线，明确高效液相色谱法在检测多菌灵时的检出限。在标准曲线绘制中，对200μg/mL的多菌灵储备液进行稀释处理，分别制备成1μg/mL、3μg/mL、5μg/mL、7μg/mL、10μg/mL、12μg/mL、15μg/mL、18μg/mL、20μg/mL。按照实验前确定的色谱条件，进行检测，获得相应的色谱

图，明确不同浓度多菌灵的色谱峰面积，将多菌灵色谱峰面积作为标准曲线的Y轴;将多菌灵的浓度作为标准曲线的X轴，计算标准曲线的线性方程，为Y=4.9984X+11.093，

方程的R2值为0.9996，说明线性方程的准确性较高，即根据色谱峰面积，应用该方程计算多菌灵浓度，具备较高的准确性。同时，将信噪比设定为S/N=3，计算高效液相色谱法测定多菌灵的最低检测限为0.1341mg/mL。

2.2.4 回收率分析

称取10g苹果汁样品，分别与25μL、50μL、75μL、

150μL标准多菌灵储备液混合，获得不同浓度的多菌灵样品液。按照上述样品前处理流程，进行样品中多菌灵的提取与浓缩，每个添加量检测三次，做平行实验。将检测数据为基础，应用外标法进行定量处理，计算不同浓度样品溶液的平均回收率及相对标准偏差。计算结果显示，25μL样品溶液的平均回收率为99.4±8.9%;50μL样品溶液的平均回收率为102.7±3.365;75μL样品溶液的平均回收率为102.3±2.871;150μL樣品溶液的平均回收率为93.2±6.932。计算的多菌灵检测限为0.02mg/kg，符合国标中苹果汁样品中多菌灵限量0.5mg/kg的要求[2]。

根据上述实验分析内容可知，在苹果汁中多菌灵的检测中，苹果汁样品的前处理、高效液相色谱法的色谱条件，直接关系到多菌灵检测的准确性，检测人员可借鉴本文提出的前处理方法，将乙酸乙酯作为提取剂，配合旋转蒸发仪与氮吹仪，以高回收率提取多菌灵，保障多菌灵检测准确性;在实验前设置不同色谱条件，对比分析不同色谱条件下的色谱图，选出最佳色谱条件，保障多菌灵检测灵敏度。总的来说，在苹果汁中多菌灵的检测中，高效液相色谱法的检测限为0.02mg/kg，符合国家标准要求，拟合标准曲线的线性方程相关系数接近于1，说明检测准确性与精密度较高，可在苹果汁中多菌灵检测中推广应用。

3 结论

综上所述，在苹果汁中多菌灵的检测中，高效液相色谱法表现出前处理流程简单、检测效率高、检测结果准确性与精密度高、检测灵敏度强、回收率高等优势，可在蔬菜水果的多菌灵残留量快速检测中推广应用，提高蔬菜水果中农药检测的效率，保障食品流通安全。

参考文献：

[1]杨丽芬，杨忠平，邵林，等.QuEChERS-高效液相色谱法测定苹果中多菌灵和噻菌灵[J].食品安全质量检测学报， 2020，11（07）：2257-2262.

[2]夏姗姗，韦沙迪，王爱臣，等.30%咪鲜胺锰盐·多菌灵水分散粒剂的高效液相色谱分析[J].化工设计通讯， 2019，45（03）：148+151.

作者简介：

沈方（1990- ），女，汉族，籍贯：江苏省新沂市新安镇，学历：本科，毕业于南京财经大学，现有职称：助理工程师，研究方向：中级工程师。