电针对高血脂合并脑缺血大鼠巢蛋白和增殖细胞核抗原表达的影响

係梦琪 李晓硕 葛东宇 董瑞娟 任秀君

摘要 目的：观察电针对高血脂合并脑缺血大鼠侧脑室外侧壁巢蛋白（Nestin）和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法：41只成年雄性SD大鼠随机分为正常组和高脂饲料喂养组，高脂饲料喂养组大鼠用高脂饲料喂养42 d造成高脂血症模型后，随机分为假手术组、模型组、电针1组、电针2组。电针1组电针“丰隆”，1次/d，连续7 d。第50天，电针组和模型组用FeCl3化学诱导造成脑缺血，术后电针组电针“丰隆”“百会”，1次/d，连续14 d。用神经功能缺损评分评定行为学变化，生物化学法检测血脂四项，HE染色观察缺血半暗带形态学改变，免疫组化检测缺血侧侧脑室外侧壁Nestin和PCNA的表达。结果：术后14 d模型组TC、LDL升高（P<0.01），HDL降低（P<0.01）;电针组TC、LDL降低（P<0.05），HDL升高（P<0.05）。模型组神经功能缺损评分增高，HE染色组织形态呈脑缺血改变，Nestin、PCNA阳性细胞个数增多（P<0.05）;电针治療可降低神经功能缺损评分（P<0.05），缺血半暗带细胞形态接近正常，Nestin、PCNA阳性细胞数升高（P<0.05），术后7 d时达到高峰，且电针1组高于电针2组（P<0.05）。结论：电针“丰隆”“百会”可调节血脂，促进缺血侧侧脑室外侧壁Nestin、PCNA的表达，改善神经功能，且在高血脂阶段进行针刺干预效果更佳。

关键词 电针;脑缺血;高脂血症;侧脑室;神经干细胞

Effect of Electroacupuncture on the Expression of Nestin and Proliferating Cell Nuclear Antigen of Rats with Hyperlipemia and Cerebral Ischemia

XI Mengqi1，LI Xiaoshuo1，GE Dongyu2，DONG Ruijuan2，REN Xiujun1

（1 School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 2 School of Traditional Chinese Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Abstract Objective：To observe the effect of electroacupuncture（EA）on the expression of Nestin and proliferating cell nuclear antigen（PCNA）in the lateral ventricle wall（LVW）of rats with hyperlipemia and cerebral ischemia.Methods：A total of 41 adult male SD rats were randomly divided into a normal group and a high fat diet group（HFD）.Rats in HFD group were fed with HFD for 42 days to establish hyperlipidemia model，and then randomly divided into a sham-operation group，a model group，a EA1 and EA2 group.Rats in EA1 group were needled at ST40 with EA（2/100 Hz，1～3 mA）20 minutes，once daily for 7 days.On the 50th day，rats in model and EA groups were induced to cerebral ischemia by 50% FeCl3.Rats in EA groups were needled at ST40 and GV20，once daily for 14 days.The behavior was assessed by neurological deficit score（NDS）.Four items of blood lipids were detected by biochemical method.HE staining was used to observe the morphological changes of ischemic penumbra.Immunohistochemistry was used to detect the expression of Nestin and PCNA in the lateral ventricle wall.Results：After 14 d operation，TC，LDL increased（P<0.01）and HDL decreased（P<0.01）in model group.TC，LDL reduced（P<0.05）and HDL rose（P<0.05）in EA group.Rats in model group had higher NDS.HE stained tissue morphology showed cerebral ischemic changes，and the number of Nestin and PCNA positive cells increased（P<0.05）.Electroacupuncture treatment could reduce the neurological deficit score（P<0.05），the morphology of ischemic penumbra cells was close to normal，the number of Nestin and PCNA positive cells increased（P<0.05），7 days after operation，and the number of Nestin and PCNA positive cells in EA group 1 was higher than that in EA 2 group（P<0.05）.Conclusion：EA at Fenglong（ST40）and Baihui（GV20）can regulate blood lipid metabolism，promote Nestin and PCNA expression in lateral ventricle wall of ischemic lateral ventricle，improve nerve function.And EA at hyperlipemia stage is more effective than EA after hyperlipemia with cerebral ischemia.

Keywords Electroacupuncture; Cerebral ischemia; Hyperlipemia; Lateral ventricles; Neural stem cell

中图分类号：R245-33文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.23.015

缺血性脑中风是世界范围内三大主要致死疾病之一，发病率、致残率、死亡率均高，给人们的工作和生活造成了严重的影响[1]。脑缺血主要是脑内血液供应障碍引起的大脑局部缺血缺氧，以大脑中动脉梗阻最为常见[2]。有大量证据表明高脂血症与缺血性神经血管损伤密切相关，血脂异常会引起氧化应激，内皮功能障碍，血脑屏障紊乱和血管炎性反应等一系列与脑缺血损伤密切相关的血管事件[3-4]。因此，改善血脂异常，可以有效預防缺血性脑血管病的发生。

西医治疗中风常用溶栓、降压、调脂、改善脑循环等方法，但在实际临床应用中仍有一定风险[5]。针灸作为中医药的一部分，其治疗缺血性中风的作法可以追溯到中国古代，且目前在世界范围内仍然普遍存在[6]。针灸治疗中风及其后遗症具有方便快捷，效果显著，不良反应较小等特点[7]。研究表明，针灸在血液供应中断后可调节脑血流量，促进神经发生，以及缺血性损伤后的神经可塑性[8-9]。临床上治疗中风的针灸处方有很多，我们根据“化痰开窍”理论选择“丰隆”“百会”两穴相配。前期实验结果表明，在高血脂阶段电针“丰隆”，高血脂合并脑缺血术后电针“丰隆”“百会”可通过调节血脂水平改善高血脂合并脑缺血大鼠神经功能，减小脑梗死体积，促进侧脑室室管膜下区（Subventricular Zone，SVZ）的神经细胞增殖[10]。

巢蛋白（Nestin）又名神经上皮干细胞蛋白，是第VI类中间丝蛋白，Nestin主要在神经干细胞中表达，因此常作为神经干细胞的标志物[11]。增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA）是一种DNA修复蛋白，在增殖细胞的细胞核中表达，因而成为评价细胞增殖状态和DNA修复的重要指标[12]。本实验通过高血脂合并脑缺血模型，研究在高血脂阶段进行电针“丰隆”预处理，脑缺血术后电针“丰隆”“百会”对模型大鼠缺血侧侧脑室外侧壁Nestin、PCNA表达的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 SPF级成年雄性SD大鼠41只，体质量（200±20）g，均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证号：SCXK（京）2012-0001。大鼠饲养于北京中医药大学针灸推拿学院实验室，保持12 h光照/12 h黑暗的自然生物节律，实验室温度（24±1）℃，湿度（50±10）%，自由摄食饮水。

1.1.2 试剂与仪器 一次性使用无菌针灸针（北京中研太和医疗器械有限公司，型号：0.30 mm×25 mm），韩氏穴位神经刺激仪（北京华卫产业开发公司，型号：LH202H），低温高速离心机（Eppendorf公司，德国，型号：Centrifuge 5810R），石蜡切片机（Leica公司，德国，型号：Leitz-1516），显微镜（Olympus公司，日本，型号：BX40F4），数码相机（Olympus公司，日本，型号：E-330）。Nestin抗体（Abcam公司，美国，批号：GR3149934-4），PCNA抗体（武汉博士德生物工程有限公司，批号：PC10），聚合HRP标记抗小鼠IgG（武汉博士德生物工程有限公司，批号：13L10A01），DAB显色液（武汉博士德生物工程有限公司，批号：13K30C22）。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备 将大鼠随机分为普通饲料喂养组（正常组）5只，高脂饲料喂养组（High Fat Diet，HFD）36只。参照前期工作，HFD大鼠用特殊配比的高脂饲料连续喂养造成高血脂模型[13]。同期喂养42 d后，根据随机数字表法将HFD大鼠分为假手术组、模型组、电针1组、电针2组各9只。43～49 d电针1组大鼠电针双侧“丰隆”，1次/d，其余各组每天抓取一次，不做其他处理。第50天，模型组和电针1、2组用FeCl3化学诱导造成脑缺血模型[14]：用戊巴比妥钠溶液（40 mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠，将其固定于右侧卧位上，从左眶上缘与外耳道连线的中点纵向切开一个2 cm左右的切口，暴露颞骨，用咬骨钳咬除部分左侧颞骨，做一个直径为3～5 mm的骨窗，暴露大脑中动脉（Middle Cerebral Artery，MCA），将浸有50%FeCl3（用0.1 mol/L HCL配置）溶液约10 μL的定量滤纸敷于暴露的MCA上20 min，去掉滤纸，逐层缝合，局部使用少许青霉素粉消炎抗菌。假手术组用生理盐水滤纸贴敷，其余操作同模型组。脑缺血术后电针1、2组电针“丰隆”“百会”，1次/d，治疗14 d。除正常组外，其余每组分为脑缺血术后1、7、14 d 3个时间点，生存期满后取材。

1.2.2 干预方法 大鼠腧穴按《实验针灸学》[15]所附的常用实验动物针灸穴位图定位。丰隆（ST40）：膝关节后外侧，腓骨正中，在腓骨小头下约7 mm处。百会（GV20）：顶骨正中处。“丰隆”直刺7 mm，“百会”及“百会”前2 mm各向后斜刺2 mm;双侧“丰隆”“百会”及“百会”前2 mm处分别接电针，连续波，频率为2/100 Hz交替，刺激强度1-2-3 mA，以大鼠肢体轻微颤动为度，时间20 min。

1.2.3 检测指标与方法

1.2.3.1 神经功能缺损评分（Neurological Deficit Score，NDS） 脑缺血后24 h用改良的Bederson5分级评分法[16]对大鼠进行神经功能缺损评分。完全正常，无运动功能缺损（正常）为0分;提尾时对侧前肢不能伸展（轻度）为1分;向对侧转圈（中度）为2分;不能向对侧运动（重度）为3分;不能自主运动，意识水平低下（极重度）为4分。评分大于或等于1分，纳入实验。

1.2.3.2 血脂4项 脑缺血术后14 d，大鼠戊巴比妥钠腹腔麻醉后，腹主动脉取血2 mL，取血12 h前禁食，自由饮水。在4 ℃下离心15 min（转速3 000 r/min，离心半径12 cm），取上清液-20 ℃冷冻保存。由北京中医药大学东直门检验科检测血清中血脂四项。用酶法测定总胆固醇（Total Cholesterol，TC），GPO-POD法测定三酰甘油（Triglycerides，TG），直接法测定低密度脂蛋白（Low-density Lipoprotein，LDL）和高密度脂蛋白（High-density Lipoprotein，HDL）。

1.2.3.3 缺血后组织形态观察 大鼠存活期满后，经戊巴比妥钠腹腔麻醉，开胸，暴露心脏和升主动脉，先用灌注针灌注生理盐水约300 mL冲洗血管，大鼠血液颜色变淡、肝肺颜色变白后，用预冷的4%多聚甲醛继续灌注，至大鼠肢体僵硬。断头取脑，浸入10%中性甲醛中固定，石蜡浸润、包埋，制备蜡块，常温保存备用。每只动物于脑缺血术后24 h随机选取2张在侧脑室水平的切片（片厚5 μm），苏木精-伊红染色法（Hematoxylin-eosin Staining，HE）观察缺血后细胞的形态变化。

1.2.3.4 Nestin、PCNA免疫组织化学检测 石蜡切片脱蜡至水，PBS磷酸盐缓冲液冲洗3 min×3次，用3% H2O2室温孵育10 min，消除内源性过氧化物酶活性。切片放入配好的0.01 mol/L PBS-枸橘酸缓冲液中做抗原热修复45 min，自然冷却至室温后滴加5%BSA封闭液，37 ℃孵育30 min后甩干，勿洗。分别滴加Nestin抗体（1∶400）、PCNA抗体（1∶100），在湿盒中4 ℃孵育过夜，PBS冲洗3 min×3次，滴加聚合HRP标记抗鼠IgG，37 ℃孵育30 min，PBS浸泡3 min×3次，DAB显色，显微镜下控制显色时间，终止反应后用自来水冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。用0.01 mol/L的PBS缓冲液做阴性对照。染色结果以缺血侧侧脑室外侧壁为主要观察部位，每个时间点2只大鼠，随机选取9个视野，统一放大400倍。用光学显微镜BX40F4镜下观察，用E-330型照相机采集图片，胞质染成棕黄色颗粒的为Nestin阳性细胞，细胞核染成棕褐色颗粒的为PCNA阳性细胞。应用Image Pro Plus软件获得每100 μm×100 μm视野中阳性细胞个数。

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行分析。NDS以中位数（四分位区间）[Md（P25，P75）]表示，用Kruslal-Wallis H秩和检验，两两比较采用Dunn′s multiple comparison test。其他数据以均值±标准差（±s）表示。血脂用单因素方差分析，免疫组化用析因设计方差分析，组间两两比较用LSD-t法、Dunnett-t法或Dunn′s multiple comparison test。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 神经功能缺损评分 脑缺血术后24 h，模型组大鼠体质量减轻，右侧上肢不能伸展，个别向右侧转圈，未见神志不清、不能进食等症状。与模型组比较，电针1组、电针2组神经功能缺损评分均有所降低（P<0.05），且电针1组较电针2组更为明显。见表1。

2.2 血脂结果 与正常组比较，脑缺血术后14 d模型组TC、LDL显著升高（P<0.01），HDL降低（P<0.01）。与模型组比较，术后14 d电针1组TC、LDL降低（P<0.05），HDL升高（P<0.01）;电针2组LDL降低（P<0.01），HDL升高（P<0.05）。见表2。

2.3 HE染色结果 术后24 h，假手术组缺血半暗带皮层神经元呈圆形或椭圆形，结构完整，排列整齐，分层明显，细胞核淡染，核仁清晰，与正常组形态基本一致。模型组神经元排列散乱，层次不清，可见大量皱缩的神经元，细胞核固缩，染色较深，核周出现空泡，血管中有红细胞渗出，组织形态整体上呈脑缺血改变。电针1组形态结构接近正常，缺血区附近正常神经元明显增多，偶见皱缩的细胞核。电针2组可见少量皱缩的神经元，组织间偶见空泡样结构，整体上趋于正常。见图1。

2.4 Nestin阳性细胞个数 假手术组Nestin阳性细胞数量少，染色浅。模型组Nestin阳性细胞分布比较密集，染色较深，在侧脑室室管膜下区聚集。电针组Nestin阳性表达明显增多，在侧脑室外侧壁呈深棕色，排列紧密，7 d时表达增多最明显。见图2。

模型组脑缺血术后1、7 d，Nestin阳性表达升高（P<0.05）。与模型组比较，电针1组Nestin陽性细胞个数在术后1、7、14 d均增多（P<0.05），电针2组在术后7 d时增高（P<0.05）。电针1组Nestin阳性细胞个数比电针2组高，且在脑缺血后7 d增高，差异有统计学意义（P<0.01）。侧脑室外侧壁Nestin阳性细胞计数显示时间和组间存在交互作用（P<0.05），时间因素的作用随分组的不同而不同。见表3。

2.5 PCNA阳性细胞个数 假手术组PCNA阳性细胞数量较少，染色较浅，分布稀疏。模型组PCNA阳性细胞在侧脑室外侧壁排列比较密集，染色加深。与模型组比较，电针2组PCNA阳性细胞数量明显增多，颜色呈棕黑色，电针1组表达更为明显，尤其是术后7 d。见图2。

模型组脑缺血术后1、7、14 d，PCNA阳性表达较假手术组均升高，且在1 d时差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，电针1组PCNA阳性细胞个数在术后1、7、14 d均增多（P<0.05），电针2组在术后7、14 d时增高（P<0.05）。电针1组PCNA阳性细胞个数较电针2组高，且在脑缺血后1 d增高，差异有统计学意义（P<0.05）。侧脑室外侧壁PCNA阳性细胞计数显示时间和组间无交互作用（P>0.05）。见表4。

3 討论

脑缺血中风与高脂血症关系密切，高达70%的中风是血栓阻塞动脉引起大脑局部缺血造成的，研究表明高血脂是引起脑中风的独立危险因素，人体血脂含量过高，血液中的脂肪易于在动脉中层出现沉积形成粥样斑块，造成颈动脉狭窄、大脑缺血，当斑块脱落堵塞脑血管，大脑血流中断，出现脑卒中[17]。血脂异常是脑血管病发病的重要危险因素，血清中TC、LDL浓度增高，HDL浓度降低，明显增加缺血性卒中的风险[18-19]。因此，改善血脂异常，降低血脂浓度对于缺血性中风患者的治疗和预后有积极意义，在高血脂阶段进行针刺干预可能是预防中风的有效手段。

丰隆为足阳明经络穴，别走于足太阴脾经，具有通经活络、祛湿化痰、醒脑安神等功效，被古今医家公认为治痰要穴。百会位于头顶正中，是督脉与手足三阳经、足厥阴经的交会穴，具有醒脑开窍、安神定志、通督定痫等作用。将具有化痰作用的丰隆与具有开窍作用的百会两穴相配，体现出“化痰通络、醒脑开窍”的配穴原则[20]。

神经干细胞在神经系统中主要作为一种储备细胞存在，当神经系统受到损伤时，如急性缺血性脑梗死、神经退行性疾病等，这些细胞便开始增殖、迁移及分化为相应的组织细胞，以便实现结构和功能的代偿[21]。成年哺乳动物大脑中的神经发生主要集中在2个区域：侧脑室室管膜下区SVZ和海马齿状回的颗粒下层（Subgranular Zone，SGZ）[22]。巢蛋白在成年神经干细胞，未成熟的神经祖细胞中瞬时表达，并在细胞转化为分化细胞后消失，被广泛用作胚胎和成年大脑中神经干细胞的标记物[11]。局灶性脑缺血后SVZ区Nestin阳性细胞数目迅速升高并在7 d达到高峰，神经干细胞在缺血发作后立即被激活[23-24]。电针治疗后脑缺血大鼠室管膜下区Nestin免疫阳性细胞明显增多[25]。作为增殖标志物，PCNA通常用于标记积极分裂的细胞，实验性脑缺血后，脑室下区PCNA阳性细胞个数增多，针刺可能通过增强脑缺血大鼠侧脑室室管膜下区PCNA的表达，促进神经细胞增殖，从而改善神经功能[26]。Nestin和PCNA免疫荧光双染阳性是增殖神经干细胞的标志[27]。研究发现脑缺血损伤后缺血侧侧脑室室管膜下区Nestin和PCNA表达增多[28]，术后7 d达到高峰，14 d时有所下降[29]，SVZ区神经干细胞增殖并参与了损伤后大脑的自我修复过程。然而，内源性神经发生不能提供足够的细胞来修复中风等重大事件造成的神经损伤，因此，采取能够刺激内源性神经干细胞增殖和分化的措施是非常重要的[30]。研究发现，电针可以改善局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损，促进内源性神经干细胞增殖和分化[31]。前期实验结果表明，电针可以促进高脂血症合并脑缺血大鼠缺血侧侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖，从而减轻脑缺血术后脑组织损伤[32]。

本实验结果显示，脑缺血术后缺血侧侧脑室外侧壁Nestin、PCNA阳性细胞从1 d开始增加，一直持续到术后7 d，14 d时出现回落趋势，与其他研究结果相似[23-24]，提示脑缺血可能诱导缺血侧侧脑室外侧壁神经干细胞增殖。在高脂血症状态下电针“丰隆”，脑缺血后电针“丰隆”“百会”可增强侧脑室外侧壁Nestin和PCNA的表达，在术后7 d达到高峰，14 d时仍处于较高水平。脑缺血后电针“丰隆”“百会”治疗同样可促进侧脑室外侧壁Nestin、PCNA阳性表达，但仅在术后7 d阳性细胞增多显著。提示连续电针治疗可使侧脑室外侧壁神经干细胞在脑缺血后一段时间内处于持续增殖状态，且在7 d时增殖达到高峰，与其他研究结果一致[31]。

总之，电针丰隆、百会可调节血脂代谢，减轻脑缺血损伤，改善神经功能，促进侧脑室外侧壁神经干细胞增殖，从而达到脑损伤后神经的自我修复作用，在高血脂阶段就进行电针干预作用更明显，体现了中风早期防治的重要性。

参考文献

[1]Verma R，Ritzel RM，Crapser J，et al.Evaluation of the Neuroprotective Effect of Sirt3 in Experimental Stroke[J].Transl Stroke Res，2019，10（1）：57-66.

[2]张蔺珊，李娟娟，吴春云.脑缺血的损伤机制及相关信号通路的研究进展[J].神经解剖学杂志，2014，30（6）：729-732.

[3]Cao XL，Du J，Zhang Y，et al.Hyperlipidemia exacerbates cerebral injury through oxidative stress，inflammation and neuronal apoptosis in MCAO/reperfusion rats[J].Exp Brain Res，2015，233（10）：2753-2765.

[4]Yan BC，Park JH，Ahn JH，et al.Effects of high-fat diet on neuronal damage，gliosis，inflammatory process and oxidative stress in the hippocampus induced by transient cerebral ischemia[J].Neurochem Res，2014，39（12）：2465-2478.

[5]Barrett KM，Lal BK，Meschia JF.Stroke：advances in medical therapy and acute stroke intervention[J].Curr Cardiol Rep，2015，17（10）：79.

[6]Zhu W，Ye Y，Liu Y，et al.Mechanisms of Acupuncture Therapy for Cerebral Ischemia：an Evidence-Based Review of Clinical and Animal Studies on Cerebral Ischemia[J].J Neuroimmune Pharmacol，2017，12（4）：575-592.

[7]Shin S，Yang SP，Yu A，et al.Effectiveness and safety of electroacupuncture for poststroke patients with shoulder pain：study protocol for a double-center，randomized，patient-and assessor-blinded，sham-controlled，parallel，clinical trial[J].BMC Complement Altern Med，2019，19（1）：58.

[8]Chen B，Tao J，Lin Y，et al.Electro-acupuncture exerts beneficial effects against cerebral ischemia and promotes the proliferation of neural progenitor cells in the cortical peri-infarct area through the Wnt/β-catenin signaling pathway[J].Int J Mol Med，2015，36（5）：1215-1222.

[9]Huang J，Ye X，You Y，et al.Electroacupuncture promotes neural cell proliferation in vivo through activation of the ERK1/2 signaling pathway[J].Int J Mol Med，2014，33（6）：1547-1553.

[10]李晓硕，葛东宇，董瑞娟，等.电针对高血脂合并脑缺血大鼠脑梗死体积及SVZ形态学影响[J].环球中医药，2018，11（4）：502-508.

[11]Bernal A，Arranz L.Nestin-expressing progenitor cells：function，identity and therapeutic implications[J].Cell Mol Life Sci，2018，75（12）：2177-2195.

[12]Bártová E，Suchánková J，Legartová S，et al.PCNA is recruited to irradiated chromatin in late S-phase and is most pronounced in G2 phase of the cell cycle[J].Protoplasma，2017，254（5）：2035-2043.

[13]于若凡，于雪，任秀君.电针对高血脂合并脑缺血大鼠血脂和脑梗死体积的影响及其机制探讨[J].北京中医药大学学报，2018，41（3）：227-234.

[14]Spasov AA，Kucheryavenko AF，Kosolapov VA，et al.Antithrombogenic activity of antioxidant compounds[J].Bull Exp Biol Med，2013，155（6）：775-777.

[15]张露芬，卢峻，嵇波.实验针灸学[M].北京：化学工业出版社，2010：219-224.

[16]Huang Z，Huang PL，Panahian N，et al.Effects of cerebral ischemia in mice deficient in neuronal nitric oxide synthase[J].Science，1994，265（5180）：1883-1885.

[17]鐘跃，邱伟，廖珍兰，等.缺血性脑卒中患者颈动脉粥样硬化斑块的超声检查与CT血管造影的影像表现分析[J].中国CT和MRI杂志，2018，16（9）：2.

[18]熊学辉，翟丹霞.不同类型脑卒中与血脂的关系及相互影响[J].河北医药，2016，38（11）：1632-1635.

[19]曹承兰，余年，林兴建，等.脑卒中高危人群的相关危险因素[J].临床神经病学杂志，2014，27（5）：335-337.

[20]李晓硕，于若凡，任秀君，等.“化痰开窍”辨证配穴的理论探讨[J].环球中医药，2017，10（5）：607-610.

[21]Boese AC，Le QE，Pham D，et al.Neural stem cell therapy for subacute and chronic ischemic stroke[J].Stem Cell Res Ther，2018，9（1）：154.

[22]Ruddy RM，Morshead CM.Home sweet home：the neural stem cell niche throughout development and after injury[J].Cell Tissue Res，2018，371（1）：125-141.

[23]Huang D，Liu H，Qu Y，et al.Non-invasive remote ischemic postconditioning stimulates neurogenesis during the recovery phase after cerebral ischemia[J].Metab Brain Dis，2017，32（6）：1805-1818.

[24]Krishnasamy S，Weng YC，Thammisetty SS，et al.Molecular imaging of nestin in neuroinflammatory conditions reveals marked signal induction in activated microglia[J].J Neuroinflammation，2017，14（1）：45.

[25]王光义，赵沁慧.电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织Nestin及bFGF表达的影响[J].医学信息，2013，26（21）：298-299.

[26]胡光强，余录，张丰正，等.醒脑开窍针刺法对脑缺血再灌注损伤大鼠PCNA表达的影响[J].泸州医学院学报，2014，37（5）：488-491.

[27]陈伟，陈岚芬，张梦蓓，等.不同褪黑素治疗方案对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞增殖的影响[J].中国当代儿科杂志，2019，21（8）：830-835.

[28]唐晓洪，来青伟，李青云，等.Ro25-6981对缺血再灌注大鼠脑室下区神经干细胞增殖的影响[J].解剖学杂志，2017，40（4）：425-428.

[29]来青伟，唐晓洪，李青云，等.缺血再灌注损伤对成年大鼠脑室下区神经干细胞增殖和NMDA受体亚单位2A表达的影响[J].神经解剖学杂志，2016，32（3）：380-384.

[30]Lapchak PA，ZHANG JH.Cellular and Molecular Approaches to Regeneration and Repair[M].Cham：Springer International Publishing，2018：101-112.

[31]Tao J，Xue XH，Chen LD，et al.Electroacupuncture improves neurological deficits and enhances proliferation and differentiation of endogenous nerve stem cells in rats with focal cerebral ischemia[J].Neurol Res，2010，32（2）：198-204.

[32]任秀君，马惠芳，图娅.电针对高脂血症合并脑缺血大鼠侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖的影响[J].针刺研究，2010，35（3）：175-181.

（2020-02-21收稿 责任编辑：王明）