Runx3和C-myc在结直肠癌组织中的表达及其临床意义分析

贾光辉

（内蒙古自治区乌兰察布市中心医院普外科，内蒙古 乌兰察布 012000）

近年来，研究发现[1]，结直肠癌的发生与抑癌基因和癌基因的表达失调密切相关。Runx3基因为RunX家族中的一员，研究发现[2]，Runx3可调控胃上皮细胞的增殖，参与胃癌的发生发展。最新的研究表明[3]，Runx3的表达缺失也可导致癌细胞的侵袭转移。C-myx癌基因是一种DNA结合蛋白，研究证实，其异常表达与多种肿瘤的发生、发展密切相关。目前有关Runx3与C-myx在结直肠癌中的表达情况的报道较少。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年1月～12月我院普外科结直肠癌手术标本66例，患者术前均未接受过抗癌治疗。66例患者中，女30例，男36例，年龄30～86岁，平均（61.2±3.8）岁，其中直肠癌34例，结肠32例；黏液癌11例，腺癌55例；分化程度：低分化7例，中分化53例，高分化6例；Dukes分期：A期11例，B期26例，C期28例，D期1例。无淋巴结转移40例，有淋巴结转移26例。癌组织取自肿瘤中心部位（非坏死区），另选择经病理确认为正常组织，距肿瘤处≧5 cm的肠管近端切缘。将手术标本术后病理，癌旁正常组织放入液氮中冷冻保存备用。

1.2 Runx3与C-myc的检测

用Western印迹法检测，使用磷酸盐缓冲液（PBS）清洗100 mg组织样品2次，将组织用剪刀剪成小块，放入组织匀浆器中，与1 mL裂解液充分混匀，之后4℃离心30 min。取上清10 μL进行蛋白定量，之后取30µg总蛋白电泳分离，并转印至聚偏氟乙烯膜上。之后的3h内以5%脱脂奶粉封闭，Tris盐酸缓冲液（TBST）洗膜2次。用抗-Runx3抗体（1:1000稀释），抗C-myc抗体（1:1000稀释），内渗抗-GAP-DH抗体（1:1000稀释）4℃孵育过夜。TBST洗膜4次，再用羊抗兔抗体（1:4000稀释）孵育1 h，之后洗膜。增强化学发光法显色，压片，灰度值以Quantity On灰度软件分析。

1.3 统计学方法

采用SPSS18.0软件分析及处理数据，以（±s）表示计量资料，组间比较以t检验，多个计量资料比较以方差检验，二指标相关性用线性相关分析，以P＜0.05，具有统计学意义。

2 结 果

2.1 Runx3蛋白和C-myc蛋白在癌组织及癌旁组织中的比较

Runx3蛋白在结直肠癌组织中的表达较癌旁组织下调，C-myc蛋白均在癌组织中的表达较癌旁组织明显上调，差异有显著性，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 Runx3蛋白和C-myc蛋白在癌组织及癌旁组织中的比较（±s）

表1 Runx3蛋白和C-myc蛋白在癌组织及癌旁组织中的比较（±s）

组织 Runx3蛋白 C-myc蛋白癌组织 1.07±0.49 2.23±0.61癌旁组织 2.06±0.22 1.36±0.36 t-14.974 9.979 P＜0.05 ＜0.05

2.2 结直肠癌临床病理参数与Runx3和C-myc蛋白表达

Runx3表达与肿瘤腔内直径、组织类型、浸润深度有相关性，差异有统计学意义（P＜0.05）；C-myc患者与淋巴结转移、Dukes分期、病理分化、浸润深度有相关性，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 结直肠癌临床病理参数与Runx3和C-myc蛋白表达（±s）

表2 结直肠癌临床病理参数与Runx3和C-myc蛋白表达（±s）

临床病理参数 分类 n Runx3 P C-myc P性别 男 361.01±0.420.2312.28±0.710.542女 301.15±0.52 2.19±0.41年龄 ≧60岁 351.21±0.530.0512.11±0.540.135＜60岁 310.99±0.33 2.33±0.64肿瘤大小 ＜5 cm 451.16±0.330.0012.16±0.640.071≧5 cm 210.88±0.28 2.44±0.41组织类型 腺癌 551.13±0.410.0062.20±0.650.280黏液癌 110.77±0.25 2.43±0.58淋巴结转移 无 401.29±0.440.0001.94±0.330.000有 260.75±0.23 2.69±0.64 A期 111.66±0.181.76±0.25分期B期 261.03±0.15 2.01±0.34 C+D期 290.84±0.33 2.66±0.610.0000.000高分化 61.51±0.251.65±0.21中分化 531.10±0.44 2.19±0.54低分化 70.46±0.15 3.16±0.41浸润深度 T1+T2 161.59±0.250.0001.83±0.350.002 T3+T4 500.94±0.35 2.35±0.62分化类型0.0010.005

2.3 Runx3和C-myc蛋白表达的相关性

经相关分析显示，Runx3和 C-myc的表达呈负相关（r=-0.410,P=0.002）。

3 讨 论

结直肠癌的发生发展是一个多阶段演变，多基因参与的复杂过程，同时伴随多种分子事件的发生，涉及到抑癌基因失活和癌基因激活，导致细胞内基因发生变化，影响细胞的正常生长、凋亡，引发肿瘤。Runx3是近年来新发现的一种抑癌基因，其表达下调主要是由于Runx3启动子区域CpG岛的甲基化有关。同时其活性可能也受多种信号通路调控，其抑癌机制与TGF-β通路密切相关，而该通路参与结直肠癌的发生与发展。研究发现[4]，Runx3可能参与TGF-β信号传导过程，在Runx3蛋白的介导下，TGF-β由胞质转入胞核内，才能核内靶点相结合，调节相关靶基因的转录。Runx3表达下降，可引起TGF-β信号失活，导致细胞生长、凋亡异常，从而引发肿瘤。研究表明[5]，大肠癌中Runx3的表达量较正常黏膜组织明显要低，且Runx3在伴有淋巴结转移组中和低分化组中明显低于未转移组和中高分化组。本研究结果显示，结直肠癌中Runx3蛋白表达低于癌旁组织，且临床分期越晚，病理分化越低，则表达下调更明显。

骨形态发生蛋白（BMPs）是TGF-B超家族的成员，具有广泛的生物学功能。Runx3是TGF-B/BMP介导的信号转导通路的一部分，此通路降低C-myc表达，主要通过以下途径：（1）C-myc、Runx3基因启动子的结合位点，对C-myc表达进行抑制，BMP和Runx3直接下调C-myc基因启动子的活性；（2）通过Runx3和BMP基因转录，对β-连环素/T-细胞转录因子（B-catenin/TCF4）的活性进行抑制。BMP可对C-myc基因启动子进行抑制，从而影响C-myc基因的转录。研究证实[6]，BMP信号通路通过增加Runx3表达，来下调C-myc的表达。本研究中结果显示，在结直肠癌组织中，C-Myc表达上调，Runx3表达下调，二者的表达呈负相关，但由于本研究实验条件的限制，关于其作用靶点及分子机制仍需进一步研究。

C-myc具有双向调节能力，能介导细胞凋亡和细胞增殖。研究发现[7]，C-myc可激活细胞的端粒酶，导致细胞具有无限分裂生殖的潜能，从而导致癌症的发生。已有研究证实，在结直肠癌的发生中，C-myc起癌基因作用。还有学者发现，C-myc基因在癌旁组织的表达明显下降，在结肠癌组织中高度表达；其表达与结肠癌的肿瘤分期、淋巴结转移等密切相关，提示C-Myc基因的表达上调可能与结肠癌的发生发展密切相关。本文中发现，在结直肠癌组织中，C-myc的表达明显增加，且其表达与淋巴结转移、Dukes分期、病理分化密切相关，也进一步证实上述观点。