白花鬼针草化学成分研究

万仲贤 吴建国 吴飞

摘要 目的：研究白花鬼针草醇提物的化学成分。方法：以硅胶色谱、Sephadex LH-20色谱及C18反相硅色谱分离纯化白花鬼针草醇提物的化学成分，以1H-NMR、13C-NMR以及质谱鉴定化学结构。结果：从白花鬼针草醇提物中分离、纯化、鉴定了6个化合物，分别為：槲皮素-3，3′-二甲醚-7-O-β-D-吡喃酮葡萄糖苷（1）、奥卡宁4′-O-β-D-（2″，4″，6″-三乙酰基）-吡喃酮葡萄糖苷（2）、4-O-（6″-O-对-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-对-香豆酸（3）、4-O-（2″-O-乙酰基-6″-O-对-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-对-香豆酸（4）、邻苯二甲酸异丙酯（5）、原儿茶酸（6）。结论：6个化合物均首次从白花鬼针草中分离得到，其中，槲皮素-3，3′-二甲醚-7-O-β-D-吡喃酮葡萄糖苷（1）、4-O-（6″-O-对-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-对-香豆酸（3）、4-O-（2″-O-乙酰基-6″-O-对-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-对-香豆酸（4）、邻苯二甲酸异丙酯（5）4个化合物属于首次从鬼针草数药用植物植物中分离鉴定。

关键词 白花鬼针草;化学成分;槲皮素-3，3′-二甲醚-7-O-β-D-吡喃酮葡萄糖苷;奥卡宁4′-O-β-D-（2″，4″，6″-三乙酰基）-吡喃酮葡萄糖苷;4-O-（6″-O-对-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-对-香豆酸;4-O-（2″-O-乙酰基-6″-O-对-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-对-香豆酸;邻苯二甲酸异丙酯;原儿茶酸

Abstract Objective：To study the chemical constituents of the ethanol extraction from Bidens Pilosa.Methods：The chemical constituents of the ethanol extraction from Bidens Pilosa were separated and purified by silica gel chromatography，Sephadex LH-20 chromatography and C18 reverse phase silicon chromatography，and the chemical structure was identified by 1H-NMR，13C-NMR and mass spectrometry.Results：A total of 6 compounds were isolated，purified and identified from the ethanol extraction of Bidens Pilosa：quercetin-3，3′-dimethyl ether-7-O-β-D-rhamnopyranoside（1），okanine-4′-O-β-D-（2″，4″，6″-triacetyl）-glucopyranoside（2），4-O-（6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid（3），4-O-（2″-O-acetyl-6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid（4），isopropyl phthalate（5），protocatechuic acid（6）.Conclusion：The above 6 compounds were first isolated from Bidens Pilosa.Among them，4 compounds—quercetin-3，3′-dimethyl ether-7-O-β-D-rhamnopyranoside（1），4-O-（6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid（3），4-O-（2″-O-acetyl-6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid（4），isopropyl phthalate（5）the above 4 compound were the first to be isolated and identified from the medicinal plants of Bidens L.

Keywords Bidens Pilosa; Chemical constituents; Quercetin-3，3′-dimethyl ether-7-O-β-D-rhamnopyranoside; Okanine-4′-O-β-D-（2″，4″，6″-triacetyl）-glucopyranoside; 4-O-（6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid; 4-O-（2″-O-acetyl-6″-O-p-coumaroyl-β-D-pyranone glucose）-p-coumaric acid; Isopropyl phthalate; Protocatechuic acid

白花鬼针草（Bidens pilosa var.radiata Schult.Bip.）为菊科植物白花鬼针草的全草，分布华东、中南及西南等地，具有清热解毒、利湿退黄、散瘀活血的功效，主治感冒发热、风湿痹痛、湿热黄疸、痈肿疮疖[1]，体外抗肿瘤活性研究显示白花鬼针草乙酸乙酯部位具有显著抗结肠癌活性[2]。文献显示，有学者从白花鬼针草中分离鉴定了10个化学成分，主要为甾醇类与烷酸类化合物[3]，但对其化学成分研究还有待完善与系统化，故本课题组再次探讨白花鬼针草醇提物化学成分，以为阐明白花鬼针抗结肠癌的活性成分奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 多功能提取浓缩机组（武汉中大制药设备有限公司，TX100型）;旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂，RE-2000型）;低温冷却循环泵（郑州长城科工贸有限公司，DLSB-5/20型）;酒精密度计（北京森赛密度计公司）;电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司，DK-420型）;MS Finnigan Trace DSQ四极杆质谱仪。

1.2 试剂 硅胶（青岛海洋化工厂）;Sephadex LH-20凝胶;C18反相硅填料;乙醇、石油醚均为分析纯（上海国药集团化学试剂有限公司）。

1.3 分析样品 白花鬼针草采自福建省永春县牛姆林，经福建中医药大学药学院杨成梓副教授鉴定为菊科植物鬼针草属白花鬼针草（Bidens pilosa L.var.radiata Schult.Bip.）的全草。

2 方法与结果

2.1 白花鬼针草醇提物制备 称取干燥白花鬼针草10 kg，切碎，置于TX100型多功能提取浓缩机组提取罐中，以75%的乙醇浸泡过夜后90 ℃加压提取2次，合并提取液并过滤，减压浓缩，60 ℃水浴槽上干燥至恒重，得到白花鬼针草醇提物（TE-BP）。以W生药（g）表示白花鬼针草干生药的重量，W部位（g）表示白花鬼针草醇提物的重量，醇提取物得率按公式2-1计算：

得率%=W部位W生药×100% （2-1）

2.2 白花鬼针草化学成分的纯化及鉴定 取醇提物浸膏100 g，硅胶柱正相色谱，石油醚∶乙酸乙酯梯度洗脱，合并石油醚∶乙酸乙酯不同梯度（3∶1、2∶1、1∶1）洗脱流份，浓缩得浸膏30 g，再进行硅胶柱正相色谱，氯仿∶甲醇梯度洗脱，合并氯仿∶甲醇不同梯度（10∶1、5∶1、2∶1）及甲醇洗脱流份，浓缩物再进行硅胶正相色谱，乙酸乙酯洗脱，再反复经Sephadex LH-20柱以及C18反相硅胶柱分离，得6个化合物，经1H-NMR、13C-NMR以及质谱鉴定其化学结构。

2.3 实验结果

2.3.1 白花鬼针草醇提物及个极性部位的制备   白花鬼针草乙醇提取物浸膏重1 033 g，按公式2-1计算得出乙醇总提取物及不同极性部位的得率为10.33%。

2.3.2 白花鬼针草化学成分的纯化及鉴定 从TE-BP中分离、纯化鉴定了6个化合物，具体鉴定结果如下：

1）化合物1：槲皮素-3，3′-二甲醚-7-0-β-D-吡喃酮葡萄糖苷。淡黃色淡黄色放射状晶体，分子量492，分子式C23H24O12，溶于甲醇，EI-MS m/z 493[M+H]+;1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：7.58（1H，d，J=2.1 Hz，H-2′），7.48（1H，dd，J=2.1 Hz，8.6 Hz，H-6′），6.93（1H，d，J=8.6 Hz，H-5′），6.76（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.44（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），3.80（3H，s，OMe），3.95（3H，s，OMe），5.55（1H，d，J=7.6 Hz，glu1=-H-1″），4.58（1H，dd，J=1.5 Hz，3.48 Hz，H-3″），4.63（1H，dd，J=1.5 Hz，11.8 Hz，H-6″）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）：156.4（C-2），138.4（C-3），178.6（C-4），161.4（C-5），99.7（C-6），163.4（C-7），94.9（C-8），156.7（C-9），106.3（C-10），121.4（C-1′），116.2（C-2′），145.7（C-3′），149.3（C-4′），116.1（C-5′），121.0（C-6′），60.2（OCH3），100.3（C-1″），73.6（C-2″），76.8（C-3″），70.0（C-4″），76.8（C-5″），69.9（C-6″）。以上波谱数据与文献报道基本一致[4]，故化合物1鉴定为槲皮素-3，3′-二甲醚-7-0-β-D-吡喃酮葡萄糖苷。见图1。

2）化合物2：奥卡宁4′-O-β-D-（2″，4″，6″-三乙酰基）-吡喃酮葡萄糖苷。淡黄色粉末（甲醇），分子量576，分子式C27H26O4，溶于甲醇，EI-MS m/z：576[M]+，1H-NMR（DMSO-d6）δ（ppm）：7.59（1H，d，J=9.0 Hz，H-6′），6.79（1H，d，J=9.0 Hz，H-5′）7.14（1H，d，J=1.5 Hz，H-2），7.11（1H，dd，J=1.5 Hz，8.0 Hz，H-6），6.79（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），7.59（1H，d，J=16.5 Hz，H-β），7.58（1H，d，J=16.5 Hz，H-α）;糖上质子信号：5.43（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），5.41（1H，dd，J=9.0 Hz，10.0 Hz），4.62（1H，dd，J=10.0 Hz，10.0 Hz），4.22（2H，m），3.87（1H，m），3.70（1H，dd，J=9.0 Hz，10.0 Hz）;2.05、2.02、1.94（3H，s，-COCH3×3）;13C-NMR（DMSO-d6）δ：192.7（C-4），170.0，169.6，169.3（-OAc×3），152.6（C-2′），150.0（C-4′），149.2（C-4），145.6（C-3），145.5（C-β），134.5（C-3′），126.1（C-1），122.6（C-6），121.3（C-6′），117.5（C-α），115.9（C-5），115.7（C-2），106.1（C-5′），99.5（C-1″），74.0（C-2″），70.8（C-5″），70.8（C-3″），68.33（C-4″），61.73（C-6″），20.59，20.51，20.39（-CH3×3）。以上波谱数据与文献报道基本一致[5]，故化合物2鉴定为奥卡宁4′-O-β-D-（2″，4″，6″-三乙酰基）-吡喃酮葡萄糖苷。见图2。

3）化合物3：邻苯二甲酸异丙酯。红色放射状晶体;EI-MS m/z 279[MH+]，1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm），1.23（6H，d J=7.3 Hz;CH3，H-3′，H-1″），2.04（1H，m，J=6.7 Hz;6.7 Hz，H-2′），4.01（2H，d，J=6.5 Hz;H-1′），7.67（1H，m，J=6.0 Hz;6.0 Hz，H-4，5），7.73（1H，m，J=6H;6 Hz，H-2，6）.13C NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ（ppm），18.8（C-3′，1″），27.2（C-2′），71.1（C-1′），128.8（C-4，5），131.5（C-2，6），131.7（C-1，2），166.9（C=O），以上波谱数据与文献报道基本一致[6]，故化合物3鉴定为邻苯二甲酸异丁酯。见图3。

4）化合物4：4-O-（6″-O-对-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-对-香豆酸。白色粉末，分子量472，分子式C24H24O11，溶于甲醇，EI-MS m/z：309[M-香豆酸]+（4），164[香豆酸]+（36），1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：7.53（2H，d，J=8.7 Hz，H-2，2′），7.53（2H，d，J=8.6 Hz，H-6，6′），7.44（2H，d，J=8.7 Hz，H-3，3′），7.09（2H，d，J=8.6 Hz，H-5，5′），7.63（2H，d，J=15.8 Hz，H-7），7.59（2H，d，J=15.8 Hz，H-7′），6.83（2H，d，15.8 Hz，H-8），6.36（2H，d，J=15.8 Hz，H-8′），4，66（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4，.32（1H，dd，J=7.2 Hz，9.3，H-2″），4.35（m，重疊，H-3″），4.36（m，重叠H-4″），4.35（m，重叠，H-5″），4.98（1H，dd，J=3.2 Hz，11.8 Hz，H-6″），4.83（1H，dd，J=6.6 Hz，11.8 Hz，H-6″）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）：130.3（C-1），127.4（C-1′），131.5（C-2，2′），131.0（C-6，6′），118.0（C-3，3′），117.3（C-5，5′），161.7（C-4），160.8（C-4′），147.1（C-7），145.9（C-7′），118.4（C-8），115.3（C-8′），169.2（C-9，9′），102.0（C-1″），75.1（C-2″），78.2（C-3″），72.2（C-4″），75.9（C-5″），64.9（C-6″）。以上波谱数据与文献报道基本一致[7]，故化合物4鉴定为4-O-（6″-O-对-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-对-香豆酸。见图4。

5）化合物5：4-O-（2″-0-乙酰基-6″-O-对-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-对-香豆酸。白色粉末，分子量514，分子式C26H26O11（见图），溶于甲醇，EI-MS m/z：351[M-香豆酸]+（16），164[香豆酸]+（57），1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：7.60（2H，d，J=8.7 Hz，H-2，2′），7.58（2H，d，J=8.6 Hz，H-6，6′），7.47（2H，d，J=8.7 Hz，H-3，3′），7.50（2H，d，J=8.6 Hz，H-5，5′），7.60（2H，d，J=15.8 Hz，H-7），7.58（2H，d，J=15.8 Hz，H-7′），6.79（2H，d，J=15.8 Hz，H-8），6.43（2H，d，J=15.8 Hz，H-8′），5.57（1H，d，J=8.1 Hz，H-1″），5.56（1H，dd，J=8.1 Hz，9.0，H-2″），4.44（m，J=9.0 Hz，9.0 Hz，H-3″），4.23（m，重叠，H-4″），4.22（m，重叠，H-5″），4.85（1H，dd，J=3.2 Hz，11.8 Hz，H-6″），4.83（1H，dd，J=6.6 Hz，11.8 Hz，H-6″），2.04（3H，S，OAc）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）：130.3（C-1），125.0（C-1′），130.3（C-2，2′），129.7（C-6，6′），117.5（C-3，3′），116.5（C-5，5′），160.0（C-4），158.9（C-4′），144.9（C-7），143.2（C-7′），119.5（C-8），115.8（C-8′），169.2（C-9），167.6（C-9′），97.3（C-1″），73.9（C-2″），75.8（C-3″），73.3（C-4″），73.6（C-5″），63.0（C-6″），169.2，20.7（OAc）。以上波谱数据与文献报道基本一致[7]，故化合物5鉴定为4-O-（2″-0-乙酰基-6″-O-对-香豆酰基-β-D-吡喃酮葡萄糖）-对-香豆酸。见图5。

6）化合物6：原儿茶酸。黄白色粉末，分子量154，分子式C7H6O4（见图），易溶于甲醇，MS，m/z154（92.4），137[M]+（100），109（29.2），97（5.6），81（14.6），63（15.7），53（20.6）;1H-NMR（400 MHz，Me0D）δ（ppm）：6.72（1H，d，J=8.5 Hz，H-5），7.33（1H，dd，J=2 Hz，8.6 Hz，H-6），7.36（1H，d，J=2 Hz，H-2）。13C-NMR（100 MHz，Me0D）：167.34（C00H），150.00（C-4），145.01（C-3），121.74（C-1），121.45（C-6），116.5（C-5，5′），116.23（C-2）。以上波谱数据与文献报道基本一致[8]，故化合物6鉴定为香豆酸。见图6。

3 讨论

多年来，国内外学者对鬼针草属植物的化学成分及药理作用的研究主要集中在鬼针草、婆婆针、金盏银盘、小花鬼针草、三叶鬼针与狼把草等植物上[9-14]，对产地主要集中在福建、台湾等地的白花鬼针草鲜有报道。本研究共报道6个化合物，其中，2个为黄酮类化合物，2个为木脂素类化合物，2为有机酸及酯类化合物，这提示白花鬼针草中二次代谢产物所包含的化学成分范畴较为广泛，为进一步研究其化学成分具有一定指导意义。同时，多烯炔类成分是鬼针草属植物中特征化学成分，本研究暂未鉴定出该类成分，这是种间差异，抑或是研究方法的缺陷，还有待进一步探讨。

物质基础决定药理活性。现代药理研究显示，鬼针草属植物具有抗肿瘤、消炎、镇痛、降糖、降脂与保肝等活性[15-20]，这是其活性化学成分作用机体的结果，故本研究为进一步探讨白花鬼针草的药理作用奠定基础。

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