黑木耳多糖联合益生菌对高强度运动后免疫功能的调节作用*

王春亮，王运土

（1.广西师范大学体育学院，广西 桂林 541006；2.广西外国语学院，广西 南宁 530222）

由于大强度运动会造成人体免疫功能降低，所以常有大学生在一次大强度跑步后，常会患感冒、呼吸道感染等疾病。因此，寻找合适的方法提升机体免疫功能十分必要。黑木耳（Aruicularia auricua）是一种常见的食用菌，从黑木耳中提取的多糖具有多种生物活性。研究表明，黑木耳多糖具有抗氧化、降低血糖、增强肠胃消化等功能[1-2]。最近也有学者提出，益生菌通过作用于肠道菌群，可较大提升机体的免疫功能[3]。因此，通过制备黑木耳多糖益生菌咀嚼片，观察服用黑木耳多糖益生菌咀嚼片的普通大学生，在一次大强度运动后机体免疫功能的变化情况，研究旨在为黑木耳多糖联合益生菌在运动领域的应用提供理论依据。

1 试验对象与方法

1.1 黑木耳多糖益生菌咀嚼片的制备

1.1.1 原料

黑木耳菌株、干黑木耳，均来自济南张氏食用菌研究所。葡萄糖、无水型酒精、DEAE-纤维素、苯酚、甘露醇、柠檬酸、预胶化淀粉、可溶性淀粉、硬脂酸镁、可压蔗糖、食用粉沫香精等。

1.1.2 仪器

超声波细胞粉碎机，南京以马内利仪器设备有限公司；紫外可见分光光度计，上海元析仪器有限公司；台式低速离心机，由广州吉迪仪器有限公司；数显恒温水浴加热锅，型号即为HH-M4，常州市金坛友联仪器研究所；万能粉碎机，型号即为WN-20，南京科立华仪器仪表有限公司；旋转蒸发仪，型号即为FRE-52A，上海亚荣生化仪器厂；真空干燥箱，型号即为DZF-6090，上海齐欣科学仪器有限公司；酸度计，型号即为PHS-3C，上海悦丰仪器有限公司；精密增力电动搅拌器（型号即为JJ-1）、可见光分光光度计、电热恒温培养箱、高速冷冻离心机、自动部分收集器、压片机等，上海一恒科技有限公司。

1.1.3 制作方法

1）提取出黑木耳多糖：干黑木耳粉碎、称重，石油醚80℃作用回流脱脂。脱脂后90℃热水进行浸泡2次（黑木耳与水的比例为1∶15），接着，进行过滤与除杂，搜集浓缩性滤液，借助乙醇进行提取与离心采集，进行DEAE处理与离心采集，冷冻与干燥，得黑木耳多糖粗品，经测定多糖含量88.15%[4]。

2）筛选益生菌活性：对用于提取黑木耳多糖的培养基进行制备，并对菌株培育进行活化，筛选出菌株，对菌株生长曲线进行检测，检测黑木耳多糖对于乳酸杆菌益生菌本身的活性所带来的影响。为了更为全方位地发挥出黑木耳多糖的各类优势，获得具有更高活性的益生菌，借助多糖总含量到了88.15%的中性黑木耳多糖、有益菌乳酸杆菌C88间加以联合的方式，做出益生菌咀嚼片[5]。

3）对咀嚼片进行压制与成型：借助预胶化淀粉、可压性蔗糖、喷雾干后加乳糖、硬脂酸镁、甘露醇、食用粉沫香精等对益生菌咀嚼片进行生产，依据0.3 g辅料、0.2 g黑木耳多糖和益生菌来进行混合，在混合十分充分后，把压力设定成200 MPa，所有香菇多糖咀嚼片的总质量设定成0.5 g，最后，把原料、辅料进行均匀性混合，处于设定的压力下，把其压制为圆形咀嚼片[6]。

备好过目筛，把所有原料、辅料进行预混，共过筛3次，进行压片与包装。借助一样的方式来制备出没有含有黑木耳多糖与益生菌、剩余成分总含量一样的咀嚼片。

1.2 试验对象

选取广西师范大学普通专业男大学生60名为研究对象，年龄18岁～20岁。无先天性疾病、无不良嗜好，身体健康。60名大学生随机分为3组：安静组（A组）、运动组（B组）、黑木耳多糖益生菌运动组（C组），每组20人。3组大学生身高、体重、身体质量指数比较见表1。试验前，详细讲解试验过程，并要求学生签署试验知情书。

表1 3组大学生身高、体重、身体质量指数的比较Tab.1 Comparison of height,weight and body mass index among 3 groups of college students

从表1可以看出，试验前比较3组大学生身高、体重、身体质量指数，经单因素方差分析后，3组大学生身高、体重、身体质量指数无显著性差异。符合试验要求。

1.3 试验方法

1.3.1 服用方法与训练方法

A组：每天给予剂量为0.5 g的淀粉咀嚼片，共2周。服用最后1 d不运动。

B组：每天给予剂量为0.5 g的淀粉咀嚼片，共2周。服用最后1 d下午进行1 500 m跑（要求心率控制在130次/min～170次/min，9 min内跑完）。

C组：每天给予剂量为0.5 g的黑木耳多糖益生菌咀嚼片，共2周。服用最后1 d下午进行1 500 m跑（要求心率控制在130次/min～170次/min，9 min内跑完）。

在试验完成的5 d中，对全部大学学生的静脉血液、粪便进行采集，共3次。

1.3.2 指标测定方法

取材与血清的制备：训练结束后24 h，3组大学生肘静脉脉取血约3 mL，其中2 mL全血肝素抗凝，4℃冰箱保存测T淋巴细胞亚群；1 mL全血，肝素抗凝，静止25 min后，离心（4℃、10 min、1 000 r·min-1）后，取上清液，4℃冰箱保存待测免疫球蛋白。

全血T淋巴细胞亚群的测定：取100 μL抗凝血，加入抗体（CD3+的抗体为CD3-PC5，CD4+的抗体为CD4-FTTC，CD8+的抗体为CD8-PC5），PBS稀释、25℃室温培育1 h，置入红细胞，恒温器20 min，1 000 r·min-1冷冻离心，舍去上清液，采用流式细胞仪测定CD3+、CD4+、CD8+含量。

血清免疫球蛋白的测定：0.3 mL生理盐水配0.1 mL血清，免疫过散法测定IgG、IgA、IgM含量。

1.4 数据统计处理

2 结果

2.1 全血T淋巴细胞亚群的比较结果

3组大学生全血T淋巴细胞亚群的比较结果见表2。

从表2可以看出，B组、C组CD3+（21.92±7.21）%、（61.62±12.24）%、CD4+（42.23±9.79）%、（58.63±10.11）%、CD8+含量 [（32.11±6.00）%、（39.73±8.98）%]、CD4+/CD8+含量 [（1.21±0.01）%、（1.49±0.02）%]均低于 A 组 CD3+含量 [（71.71±15.32）%]、CD4+含量 [（79.25 ± 11.23）%]、CD8+含量[（47.26±9.12）%]、CD4+/CD8+含量 [（1.67 ± 0.03）%]，差异具有据统计学意义（P＜0.05）；C组与B组相比，CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+含量均升高，差异具有据统计学意义（P＜0.05）。

表2 3组大学生全血T淋巴细胞亚群含量的比较结果Tab.2 Comparison results of whole blood T lymphocyte subsets among 3 groups of college students

2.2 血清免疫球蛋白的比较结果

3组大学生血清免疫球蛋白含量比较结果见表3。

表3 3组大学生血清免疫球蛋白含量比较结果Tab.3 Comparison results of serum immunoglobulin content among three groups of college students

从表3可以看出，B组、C组IgA含量 [（3.11±0.41)g·dl-1、（5.02± 0.41)g·dl-1]、IgM 含量 [（3.23±0.34)g·dl-1、（7.63± 0.52)g·dl-1]、IgG 含量 [（1.78 ±0.21)g·dl-1、（3.22±0.48)g·dl-1]均低于 A 组 IgA 含量 [（8.41±0.22)g·dl-1]、IgM 含量 [（9.25±0.21)g·dl-1]、IgG 含量 [（4.26±0.32)g·dl-1]，差异具有据统计学意义（P＜0.05）；C组与B组相比，IgA、IgM、IgG含量均升高，差异具有据统计学意义（P＜0.05）。

3 结论

黑木耳是一种药食兼用菌，其长时间以来都是食品有关分析与研究中的焦点。在食品加工、处理技术迅猛地发展的今天，黑木耳多糖提取工艺也获得了更为全方位地改良、完善，黑木耳获得了更为广泛的用途[7]。本研究中，在提取黑木耳多糖的基础上，研制黑木耳多糖益生菌咀嚼片，并探讨其提升免疫力的功能。

CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+是机体细胞免疫的重要指标，CD3+代表成熟T淋巴细胞数目，CD4+为辅助性T细胞，CD8+为毒性T细胞，CD4+/CD8+的值常用于衡量机体的免疫功能，当其值在1.4～2.0时，即代表机体免疫功能正常[8-9]。研究中，跑步1 500 m后，运动组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+含量均降低，表明大强度运动导致大学生细胞免疫动能降低，而黑木耳多糖益生菌咀嚼片能抑制这种现象，提示黑木耳多糖益生菌咀嚼片能提升机体的细胞免疫功能。

IgG、IgA、IgM是淋巴细胞分泌的蛋白质，常被衡量机体体液免疫功能[10-11]。有研究表明，高强度运动导致机体体液免疫功能降低[12]，表现为血液中IgG、IgA、IgM含量降低。本研究还发现，高强度运动导致试验组学生机体体液免疫功能降低，而黑木耳多糖益生菌咀嚼片能抑制这种现象，提示黑木耳多糖益生菌咀嚼片能提升机体的体液免疫功能。

综上，大强度运动能导致大学生免疫功能降低，而黑木耳多糖联合益生菌能抑制上述现象，提升调控大学生免疫功能接近正常水平。