流产患者抗心磷脂抗体表达与外周血膜联蛋白A2表达的影响分析

王冬梅

陕西省榆林市榆阳区妇幼保健院产科,陕西榆林 719300

由于各种因素的影响，当前流产患者在我国越来越多，特别是复发性流产比较常见[1]。复发性流产是指与同一性伴侣连续发生2次或2次以上的自然流产，特别是连续有2次自然流产经历后，第3次流产的概率在50%以上，可严重影响患者生活质量及家庭和谐[2]。根据多次流产病因和发病具体机制，复发性流产可分为非免疫类复发性流产和免疫类复发性流产，其中妊娠≤12 周的流产多是由于遗传因素、生殖方面免疫系统功能异常、内分泌系统异常、血栓前状态等原因引起[3]。妊娠>12 周的流产多由于血栓前状态、子宫解剖异常、自身免疫功能异常等因素引起。免疫学上把妊娠定义为半同种移植，特别是母体的免疫系统遭受破坏时，胎儿将会受到母体免疫系统的攻击，从而导致流产[4]。抗心磷脂抗体(ACA)为抗磷脂抗体的一种，是以血小板和内皮细胞膜上带负电荷的心磷脂作为靶抗原的自身抗体，其高表达能诱发流产[5]。膜联蛋白A2(ANXA2)是一组在结构上表现为同源相似性的钙依赖性磷脂结合蛋白，其高表达可诱发机体出现血栓形成、病理性妊娠、血小板减少等[6]。本文具体探讨与分析了复发性流产患者ACA表达与外周血ANXA2表达的影响与相关性，希望为阐明复发性流产的发生机制提供参考。现总结报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 本研究得到了所有入选者的知情同意与本院伦理委员会的批准。选择2017年2月至2019年6月在本院妇产科就诊的复发性流产患者120例作为流产组，同时选取同期本院120 例正常分娩的产妇作为对照组。纳入标准：流产组符合复发性流产的诊断标准[4]；流产组流产次数2次者74例，≥3次者46例，平均流产次数为(2.78±0.24)次；对照组没有不孕不育史以及反复流产病史，且已正常分娩；单胎妊娠；年龄24～43岁；无内分泌系统异常、生殖器官解剖异常；临床资料完整。排除标准：因夫妻双方染色体异常而发生过2次或2次以上的自然流产；临床资料缺乏者；泌尿、生殖道感染者；主要脏器的急慢性疾病以及系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病者；患有各种恶性疾病。两组入选者的年龄、孕周、体质指数、收缩压、舒张压等比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

1.2标本采集方法 所有入选者清晨空腹于肘静脉抽取3～5 mL外周血，室温静置30 min后，2 500 r/min离心6 min，取上层血清分装，-20 ℃低温冰箱贮存。

1.3仪器与试剂 RNA提取试剂盒 mirvana PARIS、定量PCR检测试剂盒 Tag Man MIRNA Reverse2 Transcription Kit 和 Taqman Real-time PCR assays 均购自德国Qiagen公司。ThermoNanoDrop 2000 Lite 分光光度计、旋涡振荡器、高低速离心机等购自美国Bio-rad公司。酶联免疫检测试剂盒购自南京森贝伽生物公司。

1.4检测指标 采用酶联免疫法检测外周血ACA表达情况，阳性：样品吸光度(A)值S/C.O.≥1(S/N≥2.1)；阴性：样品A值S/C.O.<1(S/N<2.1)[7]。

采用定量PCR检测外周血ANXA2相对表达水平，提出血清的总RNA，严格按照说明书将RNA 逆转录为cDNA，然后通过NCBI网站进入Genbank 数据库，查找ANXA2 mRNA全基因序列，设计引物，正向引物为5′-GTGCTGGGACACCACAACAATCACC-3′，反向引物为 5′-ATCCTGTCTCTGTGCATTGCTG-3′。实验结果采用相对定量法(ΔΔCt)进行分析计算，以2-ΔΔCt计算相对表达量。

表1 两组一般资料比较

2 结 果

2.1外周血ACA阳性率和ANXA2相对表达水平对比 流产组的外周血ACA阳性率和ANXA2相对表达水平均显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组外周血ACA阳性率和ANXA2相对表达水平对比(n)

2.2不同流产次数患者ACA阳性率和ANXA2相对表达水平对比 连续流产≥3次的患者血清ACA阳性率和ANXA2相对表达水平显著高于连续流产2次患者(P<0.05)，见表3。

表3 不同流产次数患者ACA阳性率和ANXA2相对表达水平对比

2.3Logistic回归分析危险因素 在240例入选者中，二分类Logistic回归分析显示外周血ACA阳性率与ANXA2相对表达水平为导致复发性流产发生的危险因素(P<0.05)。见表4。

2.4Spearman相关分析相关性 在流产组中，Spearman相关分析显示外周血ACA阳性率与ANXA2相对表达水平呈正相关(r=0.673，P<0.001)；且两者都与流产次数呈正相关(r=0.544,P=0.008；r=0.611，P=0.002)。

3 讨 论

随着工作环境及生活方式的改变、全面二孩的开放，高龄孕产妇逐渐增多，当前我国女性临床上发生自然流产的概率为15%左右，其中的80%以上为妊娠≤12 周发生流产，而复发性流产占比在5%左右[8]。复发性流产的多次发生风险随着妊娠失败次数的增多而增大，在临床要引起足够的重视并且具体分析相关病因[9]。复发性流产在临床上可分为染色体异常型、生殖道解剖异常型、内分泌异常型、生殖道感染型、同种免疫型和自身免疫型[10]。随着生殖免疫学等学科的兴起与发展，复发性流产与免疫功能异常的关系逐渐得到重视。已有研究认为流产是母胎之间的免疫平衡遭到破坏，发生免疫排斥的结果[11]。

本研究显示流产组的外周血ACA阳性率为65.0%，显著高于对照组的9.2%(P<0.05)，且连续流产≥3次的患者血清ACA阳性率显著高于连续流产2次患者(P<0.05)，说明ACA与复发性流产存在密切的关系。ACA是一种以血小板和内皮细胞膜上带负电荷的心磷脂作为靶抗原的自身抗体，也是可以检测的一组自身免疫性抗体。正常情况下心磷脂位于细胞膜脂质双分子层的内层，不能被身体免疫系统识别。由于内、外在因素的影响，心磷脂抗原会刺激机体免疫系统产生自身免疫性抗体，这种自身免疫性抗体可以直接损害血管内皮细胞，从而出现血栓、早产、死胎等。有研究显示引起抗磷脂综合征的机体可表现为反复动静脉血栓形成、血小板减少、习惯性流产[12]。ACA的高表达可激活血小板的活性，促使血小板黏附、聚集，减少前列腺素的合成，并释放出血栓素A2，促使胎盘血管收缩和血栓形成，最终形成血栓，致使胎儿氧供不足而死亡[13]。

本研究显示流产组的外周血ANXA2相对表达水平显著高于对照组(P<0.05)，且连续流产≥3次的患者血清ANXA2相对表达水平显著高于连续流产2次患者(P<0.05)。膜联蛋白是一组在结构上具有同源相似性的钙依赖性磷脂结合蛋白，可参与物质运输、细胞骨架形成、离子通道激活等多种生物学过程。ANXA2主要分布于单核细胞和内皮细胞表面，且在胎盘细胞膜上也有分布，而这些细胞是抗磷脂抗体结合的靶抗原，因此，推测ANXA2与血栓形成、病理性妊娠、复发性流产有关。另一方面，ANXA2可介导β2糖蛋白1(β2GP1)与抗β2GP1结合为复合物，诱导凝血因子Ⅲ的表达，而凝血因子Ⅲ是外源性凝血活化途径的始动因子，在血栓的形成中具有很大的作用，其高表达不仅可诱发流产，还可导致早产和死胎的发生，且大多发生在妊娠前2个月[14]。特别是ANXA2高表达可诱导血液单核细胞分泌炎性介质和促凝介质，活化单核细胞衍生的巨噬细胞，增加吞噬作用，诱导血栓形成和病理性妊娠[15]。

现代医学对复发性流产致病机制的研究比较深入，分析认为其与感染、免疫、遗传、辐射、解剖、内分泌、环境污染等有关，免疫因素是导致复发性流产发生的重要原因，占比在30%以上[16]。本研究中Spearman相关分析显示流产组的外周血ACA阳性率与ANXA2相对表达水平呈正相关(r=0.673，P<0.001)；且两者都与流产次数呈正相关(r=0.544,P=0.008；r=0.611，P=0.002)。二分类Logistic回归分析显示外周血ACA阳性率与ANXA2相对表达水平为导致复发性流产发生的危险因素(P<0.05)。也表明异常的自身免疫与妊娠显著相关，推测复发性流产可能存在一定程度的潜在因素，导致出现自身免疫失调，从而使得外周血ACA阳性率与ANXA2相对表达水平异常。本研究也存在一定不足，检测的样本数量较少，且分析指标不多，将在后续研究中进行深入分析。

总之，复发性流产患者多表现外周血ACA阳性与ANXA2相对表达水平增加，两者可互相影响，从而导致复发性流产的发生与发展。