HPVE6/E7mRNA检测在ASCUS中的应用
2020-06-11薛芸许宝珍周月华
薛芸，许宝珍，周月华
南京市溧水区人民医院妇产科，江苏南京 211200
宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，全球每年新发52.6万人，死亡26.6万人。东南亚地区发病率及病死率均高，根据最新发布的中国癌症数据统计显示2015年中国子宫颈癌新发病例9.89万，死亡病例3.05万[1]。2016年ACOG指南显示美国历经25年筛查使宫颈癌发病率从14.8/10万降至6.7/10万。早期筛查早期诊断早期治疗是预防子宫颈癌的关键。研究表明，持续的高危型HPV感染是导致宫颈上皮内瘤变的必要因素[2]，对于TCT检测结果为ASCUS的人群，需要HPV检测进行有效分流，该次研究选择2018年6月—2019年5月在南京市溧水区人民医院就诊的165例TCT为ASCUS患者，同时进行Aptima HPVE6/E7mRNA与HC2检测，以阴道镜下活检病理诊断为金标准，探讨HPV E6/E7mRNA检测在ASCUS分流中的应用，指导阴道镜转诊，最大程度节省资源但又能早期诊断疾病，现报道如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象
选取165例TCT为ASCUS患者，年龄为30～71岁，平均（45.56±9.69）岁，排除宫颈手术史，同时进行 Aptima HPV E6/E7mRNA与HC2检测，并于阴道镜下进行宫颈活检。按病检结果进行分组，慢性炎症有87例，CIN1有35例，CIN2有24例，CIN3有18例，子宫颈癌有1例。
1.2 检测方法
1.2.1 TCT检测 使用TCT专用刷在宫颈移行带区旋转3～5周，刷取的脱落细胞置于专门的保存液中贮存送至病理科，采用TBS诊断系统进行阅片及诊断。
1.2.2 HC2检测 使用HC2专用细胞刷在宫颈管内旋转3～5周，将刷子置于专门保存液中，按照试剂盒说明进行，能检测13种高危型亚型HPV。结果判读：≥1.0为阳性
1.2.3 HPVE6/E7mRNA检测采用豪洛捷公司的全自动核酸检测系统，简称Aptima HPV，可以检测14种高危HPV亚型（16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68），将标本转移至样本转移试剂，可裂解细胞，分离和纯化核酸，通过转录介导的等温扩增法（TMA）进行目标扩增，使用发光核酸探针检测扩增核酸，DNA杂合体发射出的光可用光度计来测定，检测其光子信号，（相对光单位RLU），最终检测结果根据该分析物信号与阈值之比（S/CO）进行判读，≥0.5为阳性。
1.2.4 阴道镜检查及活检 所有ASCUS患者均行阴道镜检查，醋酸染色1 min，然后进行碘染色，在不着色区进行多点活检，未见明显异常者采用3,6,9,12点进行活检，转化区暴露不清者加做宫颈管搔刮。所有病理切片均由高年资病理科医师阅片，根据病理结果分为慢性炎症、CIN1、CIN2、CIN3及子宫颈癌。
1.3 统计方法
使用SPSS 17.0统计学软件分析数据。计量资料采用单个样本t检验，用均数±标准差（）表示。计数资料采用χ2检验或连续校正、Fisher精确概率法，以频数和百分比（%）表示，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 165例ASCUS患者活检病理结果情况
诊断为慢性炎症有87例、CIN1有35例、CIN2有24例、CIN3有18例，子宫颈癌有1例，其中CIN2+占25.45%（42/165），CIN1 及以下者占 73.94%（122/165）。 见表 1。
2.2 两种检测方法检测HPV感染情况
HPV E6/E7mRNA检测HPV感染阳性率为60.00%（99/165），用HC2检测HPV感染阳性率为72.73%（120/165）， 高于 HPV E6/E7mRNA 组 （χ2=38.990，P＜0.05）。CIN2+中 HPV E6/E7mRNA检测阳性率为 95.24%（40/42），CIN1及以下感染率为 47.54%（58/122）， 低于 CIN2+组（χ2=30.278，P＜0.05）。 HC2 检测组 CIN2+HPV 阳性率为88.10%（37/42），CIN1及以下组 HPV阳性率为 67.21%（82/122），低于 CIN2+组（χ2=7.176，P＜0.05）。 见表 1。
表1165 例ASCUS患者HPV E6/E7mRNA和HC2检测结果情况[n（%）]Table 1 Results of HPV E6/E7 mRNA and HC2 detection in 165 ASCUS patients[Case(%)]
2.3 两种方法对ASCUS人群中诊断CIN2+效能评价
HPV E6/E7mRNA诊断CIN2+的灵敏度为95.34%，HC2诊断CIN2+的灵敏度为88.37%，使用Fisher精确概率法计算（P=0.221）。HC2诊断CIN2+的特异度为32.79%，HPV E6/E7mRN诊断CIN2+的特异度为52.46%，比HC2高 （χ2=27.274，P＜0.05）。 Youden 指数和一致率 HPV E6/E7mRNA均高于HC2。见表2。
表2 两种检测方法诊断CIN2及以上的效能评价Table 2 Evaluation of the effectiveness of two detection methods in the diagnosis of CIN2 and above
3 讨论
该次研究发现165例ASCUS患者中CIN2+占25.45%。大多数诊断是CIN1或正常。Zhu Y等[3]研究发现ASCUS中18%患者诊断为CIN2+，仅8.3%诊断为CIN3+。因此可以看出，ASCUS中仅一小部分为真正的患有宫颈癌前病变人群，这是由于细胞学检测主观性大，ASCUS可重复性低，HPV检测作为ASCUS细胞学分流的手段，就是为了将那些不确定的细胞学结果用HPV检测可以降低无CIN的阴道镜转诊率。HC2是经美国食品药品监督管理局（FDA）批准认证的应用于高危型HPV DNA的检测。该次研究发现使用HPV E6/E7mRNA检测HPV阳性率低于HC2，与HPV一过性感染有关，病毒基因并未与宿主整合，故而未被Aptima HPV检测出来。已有研究表明，大多数HPV会通过自身免疫力清除，只有持续的HPV感染才能发生宫颈的病变[4]。E6、E7基因作为HPV病毒的致癌基因，它们的转录mRNA所表达的蛋白是导致宫颈癌的关键因素，E6、E7癌蛋白通过抑制两种抑癌蛋白 （p53及pRb）使被感染的宿主细胞无限增殖并恶变。有研究显示，CIN及子宫颈癌患者中HPV E6/E7mRNA检出率高于宫颈炎人群[5]。唐振利等[6]发现HPVE6/E7 mRNA阳性率随着宫颈病变病理学级别升高呈增加趋势，TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测能提高对宫颈病变筛查的敏感性和特异性。张月辉等人[7]研究亦发现高级别上皮内瘤变患者中HPVE6/E7mRNA检测率高于低级别上皮内瘤变及以下者。该次研究同样发现CIN2+患者中HPV E6/E7mRNA检测阳性率明显高于CIN1及宫颈慢性炎症者。由此可见，通过HPVE6/E7mRNA检测可发现高风险人群，进而提前诊断及治疗，预防子宫颈癌发生。
Castle PE等[8]研究 988例 ASCUS妇女发现 Aptima HPV诊断CIN2+的灵敏度为89.4%，特异度为63.1%，诊断CIN3+的灵敏度为95.2%，特异度为60.5%。潘琼慧等[9]研究同样发现HPV E6/E7mRNA的特异性显著高于HPV DNA。梁馨元等[10]一项Meta分析显示与HC2检测相比，HPV E6/E7 mRNA检测CIN3+表现出较高的特异度。潘学景等[11]在ASCUS分流管理的随访研究显示，HPV E6/E7 mRNA检测ASCUS中高度上皮内瘤变及子宫颈癌的敏感性与HPV DNA检测无差异,而特异性高于HPV DNA检测。该次研究结果Aptima HPV诊断CIN2+的灵敏度为95.34%，特异度为52.46%，结果与其研究相近。另外利用HC2诊断CIN2+的灵敏度为88.37%，特异度为32.79%。与Aptima HPV相比，具有相似的灵敏度，但Aptima HPV特异度更高，Youden指数和一致率Aptima HPV E6/E7mRNA均高于HC2，提示Aptima HPV在诊断子宫颈高级别上皮内瘤变中准确度更高，可用于ASCUS的分流，减少过多不必要的阴道镜。
综上所述，由于HPV E6/E7mRNA具有与HC2相似的灵敏度，且具有更高的特异度，对于TCT为ASCUS患者，应用HPV E6/E7mRNA进行分流，若阳性则转诊阴道镜活检，若为阴性，则一年后复测TCT及HPV E6/E7mRNA。HPV E6/E7mRNA可有效帮助ASCUS分流，对筛查子宫颈高级别上皮内瘤变具有较高的诊断价值，同时可以减少过度的不必要的阴道镜，对于广大基层妇女来说，同时减轻了经济负担及精神压力。
