早期微量喂养早产儿肠道菌群变化特征与喂养不耐受发生的关系研究

李海燕 陈影宇 李玉琴 官锐明

【摘要】 目的：探究早期微量喂养早产儿肠道菌群变化特征与喂养不耐受发生的关系。方法：选取笔者所在医院2019年1-6月收治的40例早期微量喂养早产儿，观察组为喂养不耐受早产儿确诊者，对照组为同时期喂养耐受早产儿，以喂养不耐受发生24 h内（T1）和喂养不耐受恢复后（T2）为时间节点，采集各早期微量喂养早产儿的粪便标本，利用PCR技术进行菌群分析，对比其肠道菌群变化情况差异。结果：T1时，观察组在肠道的肺炎克雷伯菌和大肠杆菌水平明显高于对照组，乳酸杆菌和双歧杆菌水平明显低于对照组（P<0.05）;T2时，观察组与对照组的上述肠道菌群水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：在早期微量喂养早产儿中，肠道菌群的变化参与喂养不耐受的发生，其中不耐受发生尤其与肺炎克雷伯菌和大肠杆菌水平增加有一定关系。

【关键词】 早期微量喂养早产儿 肠道菌群 喂养不耐受 变化特征

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.10.062 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2020）10-0-03

Study on the Relationship between the Change Characteristics of Intestinal Microflora and the Incidence of Feeding Intolerance in Early Micro-feeding Premature Infants/LI Haiyan， CHEN Yingyu， LI Yuqin， GUAN Ruiming. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（10）： -150

[Abstract] Objective： To investigate the relationship between the change of intestinal microflora and the incidence of feeding intolerance in early micro-feeding premature infants. Method： This research selected 40 early micro-feeding premature infants admitted to our hospital from January to June 2019. The observation group were infants with feeding intolerance while the control group with feeding tolerance. Within 24 hours of the feeding intolerance onset （T1） and after the recovery of feeding intolerance （T2） as the time node， the stool samples collected from each early micro-feeding premature infants were analyzed by PCR to compare the changes of intestinal microflora. Result： At T1， the numbers of intestinal Klebsiella pneumonia and Escherichia coli in the observation group were significantly higher than that of the control group， but the numbers of Lactobacillus and Bifidobacteria were significantly lower than that of the control group （P<0.05）. Moreover， at T2， there were no significant differences in the expression of the above intestinal microflora between the observation group and the control group （P>0.05）. Conclusion： In early micro-feeding premature infants， the change of intestinal microflora may contribute to the development of feeding intolerance. And the incidence of feeding in tolerance is particularly associated with the increased level of Klebsiella pneumonia and Escherichia coli.

[Key words] Early micro-feeding premature infants Intestinal microflora Feeding intolerance Change characteristics

First-authors address： Huidong County Maternal and Child Health Family Plan Service Center， Huidong 516300， China

目前早产儿在我国的发生率连年攀升，并随着医学和生命支持科技的精进，早产儿的成活率也日益提高[1]。其中保障早产儿生命的重中之重是提供充分营养支持，而予以营养支持的最普适方式是胃肠道喂养[2]。然而早产儿由于孕周小、胃肠道发育不足、消化吸收不协调等原因容易引发喂养不耐受（如呕吐、腹胀、胃潴留等现象），延长住院时长且不利于早产儿的生存质量[3]。早期微量喂养是国内外多采用的早产儿喂养方式，其带来的早期肠内营养能够激发胃肠道的运动和激素分泌，增强胃肠道的免疫和消化能力，从而促进胃肠道发育[4]，降低早产儿喂养不耐受的发生率[5]。纵使如此，在早期微量喂养早产儿中，喂养不耐受现象仍极小部分存在，而有研究指出，异常的肠道菌群定植与早产儿喂养不耐受有关[6]，肠道菌群对早产儿的免疫、屏障、肠道营养、激素分泌等有着一定影响[7]。因此，本研究對早期微量喂养中表现喂养耐受和不耐受早产儿的肠道菌群进行分析研究，探讨肠道菌群变化特征与喂养不耐受发生的关系，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院在2019年1-6月收治的40例早期微量喂养早产儿，喂养不耐受标准：早产儿在喂养1周内出现呕吐（每天呕吐次数不少于3次）、腹胀（24 h腹围增多1.5 cm）的表征[8-9]。纳入标准：（1）均为本院新生胎儿且胎龄30～37周，出生体重

1 500～2 500 g，无脐绕颈或者窒息史;（2）均予以早期微量喂养;肠内食物无法消化，鼻饲下胃潴留≥喂入量50%，出现腹胀或呕吐或两者兼具，干扰亲属喂养计划。排除标准：（1）消化道先天畸形者;（2）坏死性小肠结肠炎（NEC）者;（3）抗生素、益生菌制剂服用者;（4）合并其他严重疾病者。早产儿监护人知情且签署同意书，且该研究方案获得伦理委员会批准。根据喂养是否不耐受分为两组，喂养不耐受早产儿20例，设为观察组，喂养耐受早产儿20例，设为对照组。两组早产儿性别、胎龄、体重、生产方式、喂养方式等各项临床基本资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），见表1。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 以喂养不耐受发生24 h内（T1）和喂养不耐受恢复后（T2）为时间节点，分别采集两组早期微量喂养早产儿的粪便标本，每次采集新鲜粪便1 g于无菌采集管，2 h内冻存于-80 ℃冰箱等待分析，样品均送检“达安”第三方检测。

1.2.2 标本处理 （1）DNA提取：粪便微生物总DNA提取参照QIAamp DNA Stool Mini Kit（美国Qiagen公司）试剂盒说明书严格进行;（2）DNA PCR扩增：遵照试剂盒说明书操作，利用PCR对细菌16SrRNA 基因的V3～V5区域开展特异性扩增，引物序列分别为5-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAG-3和5-CCTATCCCCTGTGTGCCTTGGCAGTC TCAG-3，重复扩增3次;（3）纯化、定量及测序：应用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit（美国Axygen Biosciences公司）进行凝胶DNA片段纯化，并应用QuantiFluorTM-ST（美国Promega公司）荧光定量系统进行定量，最终由Illumina Hiseq5000实施测序。

1.3 观察指标

比较T1和T2两组早期微量喂养早产儿肠道菌群变化情况。

1.4 统计学处理

本研究数据采用SPSS 19.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

T1时，观察组肠道的肺炎克雷伯菌和大肠杆菌水平明显高于对照组，而乳酸杆菌和双歧杆菌水平明显低于对照组（P<0.05）;而T2时，观察组与对照组的上述肠道菌群水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05），见表2。

3 讨论

肠道菌群在人体健康中发挥着不可或缺的作用，其与宿主通过互相作用、互相影响以达成肠道的微生态平衡[10]，研究证实肠道菌群能够产生酶类、参与物质代谢、促进免疫器官成熟并调节免疫机能等[11]。而早产儿与足月儿相比肠道微生物环境不稳定，肠道菌群定植延迟，菌群种类多样性不足，有益菌种水平缺乏[12]，这种失衡状态将导致喂养不耐受、败血症等发生[13]。

本研究发现，在予以早期微量喂养的早产儿中，发生喂养不耐受状况的T1时，喂养不耐受者的肠道肺炎克雷伯菌和大肠杆菌水平明显高于喂养耐受者，而乳酸杆菌和双歧杆菌两种有益菌群水平明显低于喂养耐受者（P<0.05）;而随着喂养不耐受状况恢复，T2时喂养不耐受者与喂养耐受者在上述肠道菌群水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。这表明肺炎克雷伯菌和大肠杆菌水平的增加与早期微量喂养早产儿的喂养不耐受有着一定关系，考虑可能为引发喂养不耐受的危险因素。由此，在早期微量喂养早产儿中，肠道菌群的水平变化参与喂养不耐受的发生，其中不耐受发生尤其与肺炎克雷伯菌和大肠杆菌水平增加有一定关系。

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（收稿日期：2019-12-12） （本文編辑：郎序莹）